基于HPLC法的芙蓉散質(zhì)量控制方法研究

首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院（100010）莊志宏 吳劍坤

北京市衛(wèi)生局臨床藥學(xué)研究所（101300）張林華

芙蓉散為北京中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑，在皮科、外科已有50多年的應(yīng)用。它具有清熱解毒，消腫止痛的功效，對于陽性腫瘍有良好的治療效果。臨床常用于瘡瘍腫毒之熱毒蘊結(jié)引起的乳腺炎、各種軟組織損傷、關(guān)節(jié)炎等癥候，癥見皮膚紅、腫、熱、痛，舌紅，苔白或黃，脈滑、數(shù)[1]。處方為芙蓉葉、生大黃、黃芩、黃連、關(guān)黃柏、澤蘭、冰片等。方中芙蓉葉具有涼血解毒、消腫止痛作用，生大黃清熱解毒、祛瘀生新，芙蓉葉、生大黃為君藥，黃芩清熱解毒、瀉火燥濕，助君藥清熱解毒，行臣藥之功。局部用藥可使腫瘍得以消散，即使難以完全消散也可使腫勢局限，拔膿外出[2][3]。在現(xiàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)《北京市醫(yī)療機構(gòu)制劑規(guī)程》中僅規(guī)定對芙蓉散進(jìn)行薄層鑒別，并無含量檢測項目。為進(jìn)一步提升芙蓉散質(zhì)量控制水平，識別制劑生產(chǎn)過程關(guān)鍵風(fēng)險因素，本研究建立了芙蓉散中黃芩苷含量測定方法，為有效控制制劑質(zhì)量、保證臨床用藥安全提供依據(jù)。

附圖 對照品溶液，陰性對照溶液，供試品溶液色譜圖

1 材料

1.1 主要儀器 日立L-2000型高效液相色譜儀；D-2000工作站；島津AUW-220D分析天平等。

1.2 樣品與試劑 黃芩苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110715-201720）；芙蓉散（北京中醫(yī)醫(yī)院提供，批號：1701016）；乙腈（色譜純，天津市光復(fù)科技有限公司）；純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用Diamonsil C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈（B）和0.1%磷酸水（A）為流動相梯度洗脫，梯度洗脫條件詳見附表1；流速1ml/min；柱溫30℃；檢測波長277nm；進(jìn)樣量10μL；理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算不低于2500。見附表1。

2.2 黃芩苷對照品溶液制備 精密稱取黃芩苷對照品1.55mg，置于10mL容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得黃芩苷為0.155mg/mL的對照品溶液。

2.3 芙蓉散供試品溶液制備 精密稱取芙蓉散5g，精密加入70%甲醇75ml，稱定重量，超聲處理40min，放冷至室溫，用70%甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml～25ml容量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，取續(xù)濾液即得。并按照處方配制不含黃芩的陰性對照樣品。

2.4 陰性對照樣品 在上述色譜條件下，取黃芩對照品溶液、芙蓉散供試品溶液、芙蓉散陰性樣品溶液各10μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果顯示黃芩苷和其他組分峰分離度良好，陰性樣品對測定無干擾，見附圖。

附表1 梯度洗脫色譜條件

附表2 芙蓉散中黃芩苷含量測定結(jié)果

附表3 樣品中黃芩苷含量測定結(jié)果

2.5 線性關(guān)系考察 按照上述色譜條件，分別進(jìn)樣1、2、3、5、10μL的黃芩苷對照品溶液，記錄色譜圖。以進(jìn)樣含量（μg）為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到黃芩苷的回歸方程為Y=233651925.3239X+4290.3661；R2=1.0000。黃芩苷在0.155～1.55μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.6 重復(fù)性試驗 取2.4項下制備的供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量10μL，結(jié)果樣品中黃芩苷的平均含量為4.00mg/g，RSD為1.38%（n=6），表明該方法重復(fù)性較好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取芙蓉散供試品溶液，按上述色譜條件于0、2、4、8、24h進(jìn)樣，結(jié)果，供試品溶液中黃芩苷峰面積的RSD為1.33%（n=5），表明供試品溶液中的黃芩苷成分在室溫放置24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗 精密稱取已測含量的同一批號芙蓉散樣品6份，計算回收率。平均回收率為95.43%，RSD為1.48%。見附表2。

2.9 樣品含量測定 取3批芙蓉散供試品，按照2.4項下方法進(jìn)行樣品處理，按照上述色譜條件進(jìn)行含量測定，結(jié)果見附表3。

3 結(jié)論

本研究通過對供試液在HPLC檢測器響應(yīng)信號進(jìn)行測定，優(yōu)化儀器參數(shù)，對提取溶劑的組成、提取時間和溶劑用量進(jìn)行優(yōu)化，確定最優(yōu)的實驗條件，建立了具有分離效果好、峰形對稱、溶劑及其他雜質(zhì)干擾小的含量測定方法。在三個批次樣品的應(yīng)用表明，此方法可以對符合現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的藥品的質(zhì)量進(jìn)行進(jìn)一步的量化。預(yù)期通過一段時間的數(shù)據(jù)積累可以明確制劑質(zhì)量合理變化范圍。為采取合理、有效手段提升散劑均勻性，控制制劑質(zhì)量、保證臨床用藥安全提供方法支撐。