山杏內種皮中磷脂化合物的分析測定

鮑宇宏

摘 要：山杏（Prunus armeniaca） 是我國北方干旱山地丘陵區(qū)特有的經濟林樹種，目前對山杏的研究主要集中在對山杏仁的研究，如杏仁中的苦杏仁苷、山杏揮發(fā)油、硒、不飽和脂肪酸和山杏蛋白等方面的研究，未見有對其磷脂類物質提取及測定的研究。本研究以山杏內種皮為原料，利用高效液相色譜法測定含量，以便為生產中測定山杏內種皮磷脂類化合物提供技術依據(jù)，為山杏資源的充分開發(fā)利用提供參考。

關鍵詞：磷脂；高效液相色譜；山杏內種皮

1.引言

1.1 山杏的介紹

杏，有文字記載的，首為《詩經》，其把杏列為五果之首，即杏、李、桃、栗、棗。此外，《齊民要術》、《王楨農書》、《黃帝內經素問》等書籍中都有對杏的記錄[1]。具記載，我國是整個杏屬植物的原生種的起源地。據(jù)介紹，全國各地約有 1500 多個品種[2]。我國山杏資源十分豐富，是我國北方重要的生態(tài)經濟型樹種，主內蒙古、北京、遼寧、山西、黑龍江、新疆、西藏等地區(qū)，多分布在半干旱、半濕潤的風沙平原、山地和丘陵地區(qū)[3]。

山杏的營養(yǎng)價值較高，據(jù)分析，山杏果肉含蛋白質、碳水化合、及多種維生素。此外，山杏果肉中還含有多種礦質元素、胡蘿卜素、類黃酮、綠原酸以及焦性兒茶酸等活性物質[4]廣泛用于食品、飲料、藥品生產上[5]。但是，目前山杏的開發(fā)主要集中在杏仁上，其他方面有待研究。

1.2 磷脂的概述

磷脂也稱磷脂類、磷脂質，磷脂是細胞的組成成分，是指含有磷酸的脂類，屬于復合脂。磷脂在生命過程中起結構形成和代謝作用，具有重要而廣泛的生理意義。磷脂主要存在于油料種子中，大部分存在于膠體相內，并且廣泛分布在動植物體內。

2.材料與方法

2.1 試驗材料與儀器

2.1.1 主要原料與試劑

主要原料和試劑有山杏內種皮、甲醇、乙腈、磷脂酰甘油（PG）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰膽堿（PC）。

2.1.2 試驗儀器

主要儀器設備有電子天平、紫外-可見分光光度計、高效液相色譜儀。

3.高效液相色譜法測定磷脂類化合物

3.1 制備樣品

稱取樣品1.0000 g，加入正己烷-甲醇（1：1，體積比）試劑15 mL，超聲功率450 W，超聲提取50 min，放置至室溫，加正己烷-乙醇提取試劑補至原重，6 000 r/min離心10 min，取上清液用適量的0.75 %氯化鈉溶液萃取2次，收集有機相。將有機相旋轉濃縮至近干，用甲醇定容至10 mL。取樣品溶液1 mL，甲醇稀釋至10 mL，0.45 μm微孔濾膜過濾，待測。

3. 2檢測波長的選擇

波長掃描結果在201～210nm之間有一個最大吸收峰，為此，測定相同樣品在201～210nm范圍內，在每個納米波長下測定其吸收度結果表明206nm處磷脂有最大吸收度。因此，選用206nm作為檢測波長。

3.3 流動相的選擇

試驗考察了流動相為甲醇、乙腈、甲醇-乙腈等不同流動相組成及比例下3種磷脂標準品的分離情況。流動相為100%甲醇或100%乙腈時，PG和PE保留時間相近，最終確定甲醇-乙腈（15：85，V/V）為流動相。

3.4 流速的選擇

試驗中選取流速分別為0.8mL/min、1.0mL/min及1.5mL/min，考察流速的不同對磷脂各組分的分離度、出峰時間及信號強度的影響。結果表明流速越小，出峰越慢，且峰型不好，分叉或跟有若干小峰，流速越大出峰時間越快，峰型越好，但PE、 PG與PC保留時間越接近。綜合考慮，確定流速為1.0 mL/min。

3.5最優(yōu)色譜條件

根據(jù)試驗結果，確定高效液相色譜法分析磷脂類化合物的最優(yōu)條件為：流動相為甲醇-乙腈（15：85，V/V），流速為1.0mL/min，由于柱溫對分離效果影響不大，最終選擇柱溫為35℃。

3. 6 標準曲線的繪制

分別取磷脂標準品儲備液進行稀釋，制備標準曲線，以標準品濃度為橫坐標，以峰面積/106為縱坐標進行線性回歸，三種磷酯標準品的線性方程及相關系數(shù)見表3-1。

3. 7 精密度試驗

將混合標準品溶液按3.3色譜條件進行測定，重復測定5次，三種磷脂化合物峰面積的RSD值分別為：PG：1.53%， PC：1.01%， PE：1.17%，表明儀器精密度良好。

3. 8 樣品測定結果

精密稱取一定量的山杏內種皮樣品提取，在已優(yōu)化的色譜條件下測定，平行測定5次，其分析結果見表3-2。根據(jù)回歸方程計算山杏內種皮PE含量為0.3934mg/g。

3.9穩(wěn)定性試驗

將樣品溶液按色譜條件每隔2h測定一次，重復5次，磷脂類化合物PE峰面積的RSD值為1.23%，說明樣品溶液在8h內穩(wěn)定，結果見表3-3。

4.結論

本試驗以山杏內種皮為原料，建立了高效液相色譜-紫外檢測器的分析方法。以高效液相色譜-紫外檢測器法分析山杏內種皮中磷脂酰乙醇胺（PE）的含量，通過優(yōu)化色譜條件，建立標準品回歸方程，并考察試驗方法。確定液相色譜檢測條件為：AGILENT ZORBAX RX-SIL型硅膠柱，流動相為乙腈：甲醇（15：85，v/v），等度洗脫，流速為1mL/min，檢測波長為206nm，柱溫為35℃，進樣量為20μL，根據(jù)標準曲線測得山杏內種皮中PE的含量為0.3934mg/g，與總磷脂含量相比，山杏內種皮中應該還有別的磷脂成分。

參考文獻：

[1]中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1990，176.

[2]王煥華.中藥趣話[M].天津：百花文藝出版社，2006，214-218.

[3]畢武臣，劉志龍.論山杏的生物經濟學特性及發(fā)展前景[J].防護林科技，2005，（5）：76-77.

[4]張加延，張釗.中國果樹志：杏卷[M].北京：中國林業(yè)出版社，2003，12.

[5]宋曰欽.山杏蛋白的研究與開發(fā)利用[J].北京大業(yè)大學，2006.

[6]曹棟，裘愛泳，王興國. 磷脂的結構、性質、功能及研究現(xiàn)狀（2）[J].糧食與油脂，2004（ 6） ： 13-16.