動物狂犬病診斷與防控

劉亮

摘要：狂犬病是嚴(yán)重危害我國公共衛(wèi)生的重要人獸共患病，也是我國目前患病率與死亡率高的烈性傳染病之一。人類感染狂犬病的主要來源于患狂犬病或攜帶狂犬病病原的動物，因此有效防控動物狂犬病是消滅人感染狂犬病的重要途徑。該文主要分析對動物狂犬病進行檢測及防控的措施，以期進一步加強我國獸醫(yī)公共衛(wèi)生體系建設(shè)。

關(guān)鍵詞：狂犬病;人獸共患病;診斷;防控

中圖分類號：S854.4

文獻標(biāo)識碼：B

doi：1 0.3969/j.issn.2096-3637.2019.06.022

0 引言

隨著中國寵物行業(yè)的興起，犬貓的飼養(yǎng)在中國越來越流行，人類與犬貓的親密程度也在加深，因此一旦犬貓感染狂犬病病毒，其通過咬、舔的傷口就很容易使人感染狂犬病。而狂犬病作為一種烈性的人獸共患病，其感染后一旦出現(xiàn)臨床癥狀[1]，死亡率為100%，并且無任何藥物能治愈。因此，對疑似感染的動物進行檢測很有必要，可以避免造成人們的恐慌，此外還應(yīng)做好狂犬病的防治與監(jiān)控，降低人類感染動物的可能。

1 診斷與檢測技術(shù)

1.1 動物狂犬病腦組織樣品的直接免疫熒光檢測（DFA）

DFA是實驗室確診狂犬病的唯一手段，其也是被世界衛(wèi)生組織和動物衛(wèi)生組織所認證的狂犬病實驗室診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。對疑似患病動物進行腦干、小腦或者海馬角的觸片與抹片制備，并進行干燥和同定，抗體感染作用，漂洗及裝片，最終進行結(jié)果判定。在實驗室還未完成試驗或者試驗標(biāo)準(zhǔn)實驗室沒有證實前均不能報告檢測的結(jié)果，如果對結(jié)果存有疑問時，應(yīng)進行對樣品的重復(fù)檢測。

1.2狂犬病熒光抗體病毒中和試驗（FAVN）

FAVN主要是定量測定，應(yīng)用于動物與人免疫接種后狂犬病中和抗體的水平的檢測和評價暴露前或者暴露后免疫的效果。先將疑似/易感動物的血清稀釋并與稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)攻擊毒株（cvs-ll）中和，待中和后，加入稀釋好的BHK-21細胞，此時未被中止的病毒將會在BHK-21細胞上復(fù)制，細胞培養(yǎng)3d后，用80%的冷丙酮于- 20℃同定1h以上，用熒光抗體孵育、檢測并計算血清對病毒的半數(shù)中和稀釋度。在試驗操作中應(yīng)設(shè)置OIE對照、WHO對照和陰性對照。只有在對照和病毒滴度結(jié)果均成立的情況下，此次檢測結(jié)果才有效。操作人員應(yīng)進行嚴(yán)格的暴露前免疫，并且血清抗體效價大于1.0IU/mL時才能批準(zhǔn)操作該試驗[2]。

1.3狂犬病中和抗體的競爭ELISA檢測

狂犬病ELISA中和抗體檢測試劑盒是對動物體內(nèi)的血清中和抗體效價進行測定，用于免疫檢測，具有安全、準(zhǔn)確及快速的優(yōu)點。1977年，Atanasiu等人利用初步純化的狂犬病病毒的組織首次建立了間接ELISA方法，用于人血清抗體的定性檢測。1988年時，Barton等人建立了適用于野生動物的狂犬病抗體ELISA定性檢測。2000年，CLiquet等用純化好的病毒糖蛋白為抗原，研發(fā)出狂犬病間接ELISA中和抗體定量檢測試劑盒，并且得到了世界動物衛(wèi)生組織的認可和推薦。但要注意需要在檢測前將濃縮的洗滌液用ddH_{2O稀釋并定容至200mL并混勻，可以用于稀釋酶標(biāo)抗體和洗滌酶聯(lián)板。}

1.4狂犬病病毒反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測法

RT-PCR的優(yōu)點在于其具有高通量、高靈敏度和高特異性的特點，可以應(yīng)用于大規(guī)模樣品的初步篩選，并且其對結(jié)果可直接用于核酸序列的分析;檢測結(jié)果直觀，易于判定;該方法也可從不適宜組織學(xué)檢測或病毒分離的腐敗樣品中檢測病毒核酸。但其結(jié)果不能直接作為確診的依據(jù)，僅可作為參考。

1.5狂犬病病毒熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）快速檢測法

FQ-PCR快速檢測法是在RT-PCR的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，其優(yōu)點是快速檢測、準(zhǔn)確定量、高特異性、高靈敏度、交叉污染率低，可以采用一步熒光定量RT-P CRTaqman法和兩步熒光定量RT-PCR法檢測狂犬病病毒基因[3]。在操作中要注意RT-PCR檢測法中的注意事項，還應(yīng)注意將各種試劑在冰上融化后分裝，避免試劑被反復(fù)凍融;在配制FQ-PCR體系時應(yīng)避免強光直射，現(xiàn)配現(xiàn)用;移液器和熒光定量PCR儀應(yīng)定期校驗。在進行結(jié)果判定時，陽性結(jié)果的ct值應(yīng)小于32，并且一定要出現(xiàn)典型的擴增曲線，表明其中存在狂犬病病毒;陰性對照應(yīng)ct值且無經(jīng)典曲線，表明其中存在狂犬病病毒，還有一個有效原則就是當(dāng)ct值大于32并且出現(xiàn)經(jīng)典的擴增線曲，建議將試驗重新做一次，如果結(jié)果出現(xiàn)ct值和典型的擴增曲線則為陽性，否則為陰性。

1.6金標(biāo)試紙條在狂犬病抗原抗體中的檢測應(yīng)用

世界衛(wèi)生組織報告中指出，血清抗體濃度要達到0.5IU/mL以上疫曲接種才能達到有效保護。該方法由于不直接接觸狂犬病病毒，因此在一般的實驗室均可以用其對血清抗體進行檢測，其特點是快速、便捷。但要注意該試紙條只適合用于犬貓等動物的狂犬病病毒血清抗體檢測。

1.7乳鼠南內(nèi)接種試驗（MIT）

MIT檢測是一種簡單易于操作的診斷方法，該方法由Koprowski等建立，后期由世界衛(wèi)生組織專家委員會認可，并列為狂犬病的診斷方法之一。其主要應(yīng)用于狂犬病病毒的分離、毒力強弱的測定、抗體水平的檢測、疫苗效果的評價。但其缺點是試驗周期較長，且僅依靠動物發(fā)病的癥狀并不能確定其為狂犬病病毒感染，要輔助電鏡和免疫熒光法作特異性鑒定。

2 人類狂犬病的防控

（1）必須從根本上杜絕狂犬病從動物傳至人，應(yīng)積極響應(yīng)國家制定的對犬貓進行強制性免疫接種的法規(guī)，從根本上消滅傳染源，這樣人就沒有必要再進行疫苗接種與檢測。

（2）犬貓主人要明確一點，動物的狂犬病疫苗比人類要便宜，因此給犬貓進行免疫是防止人發(fā)生傳染病的最簡單、有效方法。犬貓主人應(yīng)主動對犬進行定期的疫苗注射，每年1-2次，并且鄰里之間應(yīng)互相監(jiān)督提醒，讓每只犬都能進行接種。

（3）犬貓主人應(yīng)對家養(yǎng)動物進行栓養(yǎng)，尤其是去公共場所，既防止家養(yǎng)犬貓傷人，也避免其他流浪犬貓帶來感染。對家養(yǎng)犬貓進行及時絕育，減少流浪貓狗的出生數(shù)量，也能為犬貓避免子宮蓄膿、卵巢囊腫等疾病。

（4）對于檢測出患狂犬病或者帶毒的犬貓，應(yīng)按照動物重大疫病防控方法，進行及時捕殺處理，對于抗體不達標(biāo)或者尚未進行疫苗注射的動物，應(yīng)及時補充注射疫苗，以降低犬貓對狂犬病病毒的易感一性，從根本上預(yù)防和控制狂犬病的發(fā)生和流行。

（5）暴露后應(yīng)及時進行預(yù)防性治療。因抗體在機體內(nèi)產(chǎn)生需要一定的時間，因此，當(dāng)機體暴露后應(yīng)及時接種狂犬病疫苗和狂犬病免疫抗血清，這也是抑制組織病毒感染最有利的時機。

3 結(jié)束語

從根本上消除狂犬病，還得從改變?nèi)藗兊乃枷胗^念開始，提高人們自身的道德修養(yǎng);強化法律法規(guī)的監(jiān)督作用;加快狂犬病診斷的應(yīng)用。

參考文獻

[1]張菲，張守峰，唐青，等我同狂犬病現(xiàn)狀與防控意見[J]中同人獸共患病學(xué)報，2010，26（ 4）：381-388.

[2]蹇慧，劉力.狂犬病診斷與防制研究進展[J].畜牧獸醫(yī)雜志，2006，25（ 2）：19-21

[3]李靜.狂犬病的實驗室診斷在臨床狂犬病診斷中應(yīng)用的研究[D].瀘州：瀘州醫(yī)學(xué)院，2009