腸易激綜合征血清炎癥因子表達(dá)與腸道菌群變化的關(guān)系

趙斌, 郭聯(lián)斌, 段武瓊

腸易激綜合征(irritable bowel syndrome，IBS)屬慢性功能性胃腸疾病，目前臨床對其發(fā)病機制尚未完全闡明，但均證實IBS患者存在腸道微生態(tài)紊亂和炎癥介質(zhì)的異常表達(dá)[1-3]。在IBS病理進(jìn)展過程中，腸道菌群紊亂和炎性因子異常表達(dá)發(fā)揮重要作用。其中白細(xì)胞介素尤為突出，參與腸黏膜病變[4-5]。但目前臨床對IBS患者炎癥介質(zhì)的研究尚未形成統(tǒng)一認(rèn)識，其與腸道菌群的關(guān)系也尚不完全清楚[6]。為此，本研究回顧性分析本院40例IBS患者和40例體檢健康者臨床資料，探討IBS患者炎性因子與腸道菌群的關(guān)系。報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

本研究經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)同意。納入本院2017年3月至2019年3月40例IBS患者作為觀察組，另納入同期40例體檢健康者作為對照組。兩組研究對象基本資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表1。

表1 兩組基本資料比較

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：① IBS診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會胃腸功能性疾病協(xié)作組推薦診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；② 對照組納入對象均在本院完成體檢，且檢查合格，無胃腸道疾??；③ 病理資料完整，且患者年齡18～70歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：① 合并有潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、消化道出血及胃腸道惡性腫瘤疾病者；② 合并有嚴(yán)重感染或肝腎功能嚴(yán)重不全者；③ 既往有精神意識障礙病史者。

1.3 檢測方法

1.3.1 血清炎性因子 在患者入院確診后清晨，空腹抽取靜脈血5 mL，離心后取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清白介素-6(interleukin-6，IL-6)、IL-8、IL-13及IL-18水平，儀器為ELx808IULALXH 酶標(biāo)儀(廈門鱟試劑生物科技股份有限公司)，試劑盒均由上海恪敏生物科技有限公司提供，操作按試劑盒說明進(jìn)行。

1.3.2 腸道菌群 用一次性滅菌竹簽取患者糞便中央標(biāo)本5 mg，置于-80℃保存。取1.0 g糞便標(biāo)本，加入9 mL厭氧菌稀釋液，混勻，采用10倍連續(xù)稀釋法稀釋至10-8。取適合的稀釋濃度接種于雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸桿菌及腸球菌培養(yǎng)基中，用L形涂布棒均勻涂布，雙歧桿菌、乳酸桿菌置入手套式厭氧箱中培養(yǎng)48～72 h，腸桿菌和腸球菌采用常規(guī)恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24～48 h。采用細(xì)菌三級鑒定法將細(xì)菌鑒定至屬水平，選擇30～300培養(yǎng)基進(jìn)行菌落數(shù)計數(shù)，計算每克標(biāo)本中菌落含量，取3個平板計算腸道菌群各菌落平均數(shù)。

1.4 觀察指標(biāo)

比較兩組研究對象血清炎性因子(IL-6、IL-8、IL-13及IL-18)和腸道菌群(雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸桿菌及腸球菌)水平，分析IBS患者炎性因子與腸道菌群的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組炎性因子水平比較

觀察組血清IL-6、IL-8及IL-18均顯著高于對照組，IL-13顯著低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

2.2 兩組腸道菌群水平比較

觀察組糞便標(biāo)本中雙歧桿菌和乳酸桿菌均低于對照組，腸桿菌和腸球菌水平均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。IBS患者糞便標(biāo)本檢測，革蘭染色后鏡下觀察各腸道菌落(×400)對比，見圖1。

2.3 IBS患者血清炎性因子與腸道菌群關(guān)系

IBS患者炎性因子IL-6、IL-8及IL-18與雙歧桿菌、乳酸桿菌含量呈負(fù)相關(guān)，與腸桿菌和腸球菌呈正相關(guān)(P<0.05)，IL-13與雙歧桿菌和乳酸桿菌表達(dá)含量呈正相關(guān)，與腸球菌和腸桿菌呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，見表4。

表2 兩組炎性因子水平比較

表3 兩組腸道菌群水平比較

表4 IBS患者血清炎性因子與腸道菌群相關(guān)性分析

3 討論

腸道菌群改變是IBS患者重要的臨床特點，其改變主要體現(xiàn)在腸道益生菌數(shù)量減少，而致病菌數(shù)量增加。雙歧桿菌和乳酸桿菌是機體重要的益生菌，機體終身攜帶，具有營養(yǎng)、免疫及生物拮抗作用，而腸桿菌和腸球菌則是引起IBS患者腸黏膜損傷免疫防御功能低下主要的致病菌[8-10]。因而本研究觀察上述四種腸道菌群在IBS患者與健康對照組中的表達(dá)水平，結(jié)果顯示觀察組雙歧桿菌和乳酸桿菌較對照組顯著降低，而腸桿菌和腸球菌較對照組升高，這與既往報道一致[11-12]。另外，白細(xì)胞介素參與IBS病理過程，其中IL-6、IL-8及IL-18是IBS重要的促炎因子，可通過刺激T淋巴細(xì)胞增殖，進(jìn)而誘發(fā)和促進(jìn)腸道黏膜炎性反應(yīng)[13-14]，而IL-13則可通過抑制單核巨噬細(xì)胞分泌促炎因子，從而對腸道黏膜發(fā)揮保護(hù)作用[15]。本研究也顯示觀察組IL-6、IL-8及IL-18高于對照組，IL-13低于對照組，這與劉磊等研究結(jié)果相符[16]。

圖1IBS患者糞便標(biāo)本革蘭染色鏡下結(jié)果(×800) 圖A為雙歧桿菌，菌體著色不均，形態(tài)多形性，無鞭毛、芽孢;圖B為乳酸桿菌，細(xì)長桿菌，菌體成單、短鏈排列;圖C為腸桿菌，菌體長短不一，無芽孢;圖D為腸球菌，菌體呈球形或卵圓形，呈對、長鏈或成堆排列

IL-6具有復(fù)雜的生物學(xué)功能，可促進(jìn)T細(xì)胞增殖，加快腸道黏膜的炎性反應(yīng)，Bashashati M等[17]還證實IL-6與IBS敏感性相關(guān)，可能受腸道菌群水平影響。IL-8不僅可促進(jìn)腸道黏膜炎癥進(jìn)展，還可介導(dǎo)IL-1、TNF-α等其他炎性因子的表達(dá)[18]。IL-13屬于抑炎因子，由Th2細(xì)胞分泌，在IBS腸黏膜炎性反應(yīng)中具有調(diào)節(jié)炎性介質(zhì)釋放作用[19]。本研究發(fā)現(xiàn)腸道菌群與炎性因子具有相關(guān)性，IBS患者腸道菌群失調(diào)，微生態(tài)結(jié)構(gòu)紊亂，破壞腸黏膜和正常的細(xì)胞增殖分化活動，進(jìn)而誘發(fā)炎癥反應(yīng)，使IL-6、IL-8及IL-18等促炎因子表達(dá)升高，進(jìn)而加快IBS病理進(jìn)展。秦燕等[20]也認(rèn)為隨著腸道菌群的改變和腸黏膜通透性的增加，腸源性內(nèi)毒素物質(zhì)分泌增加，機體應(yīng)激免疫應(yīng)答被激活，進(jìn)而促進(jìn)炎性因子的表達(dá)。另外，隨著IL-6、IL-8及IL-18促炎因子的表達(dá)，會引起腸道感覺過敏[21]，這成為胃腸動力紊亂的原因，進(jìn)一步造成腸道菌群的失調(diào)。因而，炎性因子和腸道菌群水平可能存在相互作用關(guān)系，促進(jìn)IBS發(fā)展，這提示監(jiān)測IBS患者血清炎性因子水平，有助于評估腸道菌群含量，這可為今后臨床IBS防治提供新的治療思路。

綜上，IBS患者腸道菌群與血清炎性因子水平具有顯著相關(guān)性，監(jiān)測血清炎性因子有助于指導(dǎo)臨床。