慢性粒細(xì)胞白血病患者BCR-ABL融合基因P210表達(dá)對(duì)病程判斷和預(yù)后評(píng)估的臨床價(jià)值 *

劉偉平，官凡琪，宋耀輝，阮艷秋

(1.自貢市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科， 四川自貢 643000；2.遵義醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)與科技學(xué)院，貴州遵義 563000)

慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myelogenous leuke-mia，CML)是骨髓造血干細(xì)胞的惡性克隆增殖性疾病。臨床上通常按照病程將CML分為慢性期、加速期和急變期。一旦疾病進(jìn)入急變期，預(yù)后極差[1]。90%以上的CML患者的血細(xì)胞中出現(xiàn)Ph染色體，即t(9；22)(q34；q11)，9號(hào)染色體長(zhǎng)臂上abl原癌基因易位至22號(hào)染色體長(zhǎng)臂的斷裂點(diǎn)集中區(qū)(bcr)，形成BCR-ABL融合基因，并表達(dá)BCR-ABL融合蛋白[2]。BCR-ABL 融合基因以不同剪接方式形成mRNA-b3a2和b2a2，編碼形成P210融合蛋白[3]；該蛋白具有異?；钴S的酪氨酸激酶活性，并可活化細(xì)胞內(nèi)相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而調(diào)控細(xì)胞的分裂與增殖，使細(xì)胞凋亡信號(hào)降低、存活率延長(zhǎng)，這是引起白血病細(xì)胞惡性增殖及凋亡抵抗的主要機(jī)制之一[4]。因此，本研究旨在探討不同病程BCR-ABL融合基因P210的表達(dá)水平以及外周血象、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)、α-羥丁酸脫氫酶(α-hydroxybutyrate，HBDH)和血糖(glucose，GLU)的變化，以期為臨床的早期診斷、病程判斷和預(yù)后評(píng)估提供一良好指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2017年4月～2018年5月期間自貢市第一人民醫(yī)院住院的CML患者共計(jì)30例，其中男性18例，女性12例，年齡24歲～86歲。疾病分期：慢性期13例，加速期8例，急變期9例。

1.2 試劑和儀器 Agilent StrataGene MX 3005P 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀購(gòu)自美國(guó)安捷倫科技公司；BCR/ABL210融合基因定量檢測(cè)購(gòu)自上海源奇生物醫(yī)藥科技有限公司。XN-1000全自動(dòng)血液分析儀購(gòu)自希森美康生物有限公司，血清GLU，LDH，UA和HBDH購(gòu)自邁克生物有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 CML診斷依據(jù)中國(guó)慢性髓性白血病診斷與治療指南(2016年版)，結(jié)合骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)免疫表型、臨床癥狀等進(jìn)行綜合分析。采用RT-PCR測(cè)定BCR-ABL融合基因P210表達(dá)水平，結(jié)果以BCR-ABL轉(zhuǎn)錄本水平與ABL(內(nèi)參基因)轉(zhuǎn)錄本水平的比值(P210/ABL)來(lái)表示[5]；血細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi)采用XN-1000全自動(dòng)血液分析儀，分類(lèi)采用手工顯微鏡法進(jìn)行確認(rèn)；血清LDH和HBDH，GLU，UA，K+分別運(yùn)用速率法、葡萄糖氧化酶法、尿激酶法、電極法進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，符合正態(tài)分布的定量資料，三組間比較采用方差分析，非正態(tài)分布的定量治療采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，率的比較采用卡方(χ2)檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同病程CML患者BCR-ABL融合基因P210檢測(cè)結(jié)果 見(jiàn)表1。30例CML患者中，BCR-ABL融合基因P210陽(yáng)性表達(dá)的有28例，占93.3%，其表達(dá)量通過(guò)Mann-WhitneyU檢驗(yàn)分析比較，發(fā)現(xiàn)不同分期CML患者中BCR-ABL融合基因P210的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=9.561，P=0.000)，且運(yùn)用伊馬替尼治療一年后，檢測(cè)各病程BCR-ABL融合基因P210的陽(yáng)性表達(dá)情況，運(yùn)用卡方檢驗(yàn)分析比較治療前后BCR-ABL融合基因P210陽(yáng)性表達(dá)率的差異，得出在13例慢性期CML患者中，治療后此基因陽(yáng)性表達(dá)率較治療前差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.047，P=0.029)。此結(jié)果表明，BCR-ABL融合基因P210的表達(dá)在不同病程CML患者中表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可用于臨床對(duì)CML患者病程判斷及預(yù)后評(píng)估。

表1 不同病程CML患者BCR-ABL P210檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同病程CML患者外周血象檢測(cè)結(jié)果 見(jiàn)表2。測(cè)定30例不同病程CML患者外周白細(xì)胞(white blood cell，WBC)、血紅蛋白(hemoglobin，HGB)含量及中性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比值(NEU/LYM)并運(yùn)用單因素方差分析比較。外周WBC，HGB和NEU/LYM在不同病程CML患者中的表達(dá)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P=0.000)。由此得出，測(cè)定外周血中WBC，HGB的含量及NEU/LYM比值可用于臨床對(duì)CML患者的病程進(jìn)行判斷，從而為其有效治療提供一可靠指標(biāo)。

表2 不同病程CML外周血指標(biāo)的比較

2.3 不同病程CML患者血清部分生化指標(biāo)比較 見(jiàn)表3。利用單因素方差分析比較不同病程CML患者血清GLU，LDH，HBDH，K+和UA的表達(dá)差異。不同病程CML患者血清中GLU，LDH的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.026，0.0482)，但血清HBDH，K+和UA的含量在不同病程CML患者之間比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。由此得出，CML患者血清中GLU，LDH在不同病程的差異表達(dá)可為臨床對(duì)其病程診斷提供一早期指標(biāo)。

表3 不同病程CML部分生化指標(biāo)的比較

3 討論

BCR-ABL融合基因是白血病發(fā)生的必要條件之一，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)可有效檢測(cè)BCR-ABL融合基因表達(dá)水平[6]。本研究顯示，不同疾病分期BCR-ABL P210轉(zhuǎn)錄本差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且急變期患者的BCR-ABL P210的轉(zhuǎn)錄水平明顯高于加速期和慢性期的患者。由此得出，通過(guò)對(duì)CML患者BCR-ABL P210的檢測(cè)，有助于臨床準(zhǔn)確判斷患者病程和病情變化，從而有效實(shí)施個(gè)體化治療。

獲得深層的分子生物學(xué)反應(yīng)是酪氨酸激酶抑制劑(tyrosine kinase inhibitors，TKI)治療CML追求的目標(biāo)[7-8]。骨髓或外周血中BCR-ABL P210轉(zhuǎn)錄本為0或定性檢測(cè)結(jié)果為陰性是CML完全緩解的重要指標(biāo)[6]。本研究結(jié)果顯示，13例慢性期CML患者采用伊馬替尼治療一年后，BCR-ABL P210陽(yáng)性率明顯降低。因此，對(duì)伊馬替尼治療的慢性期CML患者進(jìn)行BCR-ABL P210基因表達(dá)水平的檢測(cè)，有助于臨床判斷其療效和監(jiān)測(cè)其復(fù)發(fā)，此與文獻(xiàn)報(bào)道相符[6，8]。

本研究表明，不同分期CML患者外周血WBC，NEU/LYM和HGB差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這提示針對(duì)不明原因的WBC，NEU/LYM異常升高和HGB下降對(duì)于CML患者的早期診斷具有重要意義。另外，各期CML患者LDH一般呈輕度或重度升高，其原因可能在于Ph染色體易位產(chǎn)生BCR-ABL融合基因并表達(dá)蛋白P210，使白血病細(xì)胞大量增殖，糖酵解增強(qiáng)，進(jìn)而使血清中LDH及其同工酶活性增高。另有研究表明，CML患者骨髓增生程度極度活躍，各組織和器官被惡性細(xì)胞浸潤(rùn)，其肝脾腫大及功能受損使LDH加速釋放入血，從而可導(dǎo)致血清LDH及其同工酶活性升高[10]。在對(duì)各期CML患者血糖測(cè)定過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，血糖水平與CML分期密切相關(guān)。以上結(jié)果表明，在排除患者其它疾病情況下，測(cè)定LDH及GLU水平可用于CML臨床分期診斷及預(yù)后評(píng)估指標(biāo)之一。

綜上所述，BCR-ABL融合基因P210表達(dá)水平可作為CML早期診斷、病程判斷和預(yù)后評(píng)估的良好指標(biāo)。此外，外周血WBC數(shù)量，NEU/ LYM，GLU及LDH可用于CML的分期診斷和預(yù)后評(píng)估。兩者結(jié)合起來(lái)，可提高CML診斷和治療的敏感度及準(zhǔn)確度。然而本研究檢測(cè)的臨床樣本較少，且分布較為局限，仍需納入不同地區(qū)，不同人種的臨床樣本進(jìn)行分析研究，以增加本研究的可信度，以期為臨床對(duì)CML患者的分期診斷和預(yù)后提供理論依據(jù)。