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    大豆分離蛋白、木薯淀粉與轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶組合對(duì)鰱魚魚糜凝膠品質(zhì)的影響

    2019-10-15 08:36:02沈曉蕾李向紅王發(fā)祥王建輝黃軼群劉永樂U
    食品與機(jī)械 2019年9期
    關(guān)鍵詞:網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)魚糜白度

    沈曉蕾 - 李向紅 - 俞 健 王發(fā)祥 -王建輝 - 黃軼群 - 劉永樂U -

    (長(zhǎng)沙理工大學(xué)化學(xué)與食品工程學(xué)院,湖南 長(zhǎng)沙 410114)

    鰱魚作為中國(guó)的四大家魚之一,年產(chǎn)量達(dá)數(shù)百萬噸,由于土腥味重,肌間刺多,鮮食用率較低。為了提高鰱魚的利用率及經(jīng)濟(jì)價(jià)值,通常將其肉與各種輔料混合制成具有彈性凝膠狀的魚糜重組制品,該魚糜重組制品營(yíng)養(yǎng)豐富,蛋白質(zhì)含量高[1],食用方便,風(fēng)味獨(dú)特,深受消費(fèi)者喜愛。

    在魚糜中加入各種蛋白及淀粉可以提高魚糜的凝膠強(qiáng)度,還可以降低魚糜中對(duì)人體有害的過量飽和脂肪和膽固醇[2]。大豆分離蛋白(SPI)是植物蛋白中的優(yōu)質(zhì)蛋白,蛋白含量在90%以上,其作為蛋白類食品添加劑得到了廣泛應(yīng)用。木薯淀粉中支鏈淀粉比直鏈淀粉含量高,造成了木薯淀粉具有較好的黏性,可以增強(qiáng)魚糜的凝膠強(qiáng)度。劉鑫等[3]研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)木薯淀粉添加量為8%時(shí)能夠使竹莢魚魚糜的凝膠強(qiáng)度提高130.6%。轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(TG)作為常用的凝膠增強(qiáng)劑,能夠催化肌球蛋白(MHC)上賴氨酸的ε-氨基和谷氨酸殘基上的γ-酰胺基形成共價(jià)鍵使蛋白質(zhì)之間或蛋白質(zhì)內(nèi)部發(fā)生交聯(lián),提高魚糜制品的彈性和緊實(shí)度[4]。

    試驗(yàn)擬以鰱魚為原料,考察SPI、木薯淀粉及TG最適添加量對(duì)魚糜制品食用品質(zhì)(持水率、蒸煮損失、白度、凝膠強(qiáng)度)的影響,為魚糜的工業(yè)生產(chǎn)提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    新鮮鰱魚、大豆分離蛋白(純度99%)、木薯淀粉(純度99%):市售;

    轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶:酶活120 U/g,江蘇一鳴生物科技有限公司;

    腸衣:直徑50 mm,食品級(jí)塑料透明腸衣,濰坊美橙包裝設(shè)計(jì)有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    電子天平:BL-9205B型,日本島津公司;

    恒溫水浴鍋:DK-98-Ⅱ型,天津泰斯特儀器有限公司;

    電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱:DHG-9140A型,上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;

    質(zhì)構(gòu)儀:TA·XTplus型,英國(guó)Stable Mico System公司;

    斬拌機(jī):ZB-20型,山東省諸城市華鋼機(jī)械有限公司;

    低場(chǎng)核磁共振儀:NM120型,上海紐邁電子科技有限公司;

    掃描電鏡:EVO-LS 10型,日本Minolta公司。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 魚糜重組制品的工藝流程

    新鮮魚肉→前處理→采肉→脫水→斬拌→制備魚糜凝膠

    1.3.2 操作要點(diǎn)

    (1) 前處理:去頭及內(nèi)臟,清洗干凈。內(nèi)臟的黑膜需清除干凈,防止影響魚糜的品質(zhì)[5]。

    (2) 采肉:去除油脂及紅肉,只采白肉,防止影響魚糜的色澤。

    (3) 制備魚糜凝膠:將魚肉在斬拌機(jī)中空斬1 min,加入2.5%食鹽斬拌2 min,再加入不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的SPI、木薯淀粉和TG斬拌5 min(斬拌過程中應(yīng)控制溫度在10 ℃ 以下)。將魚糜填充到聚乙烯腸衣中,排除氣泡,采用二段加熱(45 ℃,30 min;90 ℃,20 min),加熱結(jié)束后置于流水下冷卻,于4 ℃冰箱中過夜,待用。

    1.3.3 蛋白質(zhì)的測(cè)定 參照GB 5009.5—2016的凱氏定氮法。

    1.3.4 蒸煮損失 根據(jù)Yang等[6]的方法略做修改,將魚糜凝膠切成凝膠圓柱體并稱重(G1)后放入蒸煮袋內(nèi)且封口,90 ℃水浴鍋蒸煮20 min。蒸煮結(jié)束擦干水分后稱重(G2),每組測(cè)量平行5次,試驗(yàn)重復(fù)3次,取平均值。按式(1)進(jìn)行計(jì)算。

    (1)

    式中:

    CL——蒸煮損失,%;

    G1——魚糜凝膠蒸煮前的質(zhì)量,g;

    G2——魚糜凝膠蒸煮后的質(zhì)量,g。

    1.3.5 持水性測(cè)定 將樣品切成圓柱,稱其質(zhì)量M1,用濾紙包裹于離心管中,3 000 r/min離心10 min,稱重M2,每組測(cè)量平行3次,試驗(yàn)重復(fù)3次,取平均值。按式(2) 進(jìn)行計(jì)算[7]。

    (2)

    式中:

    WHC——持水率,%;

    M1——魚糜凝膠離心前的質(zhì)量,g;

    M2——魚糜凝膠離心后的質(zhì)量,g。

    1.3.6 白度測(cè)定 用色差計(jì)測(cè)定樣品L*、a*、b*,每組測(cè)量平行5次以上,試驗(yàn)重復(fù)3次,取平均值。按式(3)進(jìn)行計(jì)算[8]。

    (3)

    式中:

    W——白度,%;

    L*——亮度;

    a*——紅度值(表示有色物質(zhì)的紅綠偏向);

    b*——黃度值(表示有色物質(zhì)的黃藍(lán)偏向)。

    1.3.7 魚糜制品凝膠強(qiáng)度的測(cè)定 根據(jù)文獻(xiàn)[9]進(jìn)行修改。采用質(zhì)構(gòu)儀進(jìn)行測(cè)定,參數(shù)設(shè)置為探頭P/0.5,測(cè)前速度0.5 mm/s,測(cè)中速度1 mm/s,測(cè)后速度10 mm/s,測(cè)量距離6 mm,觸發(fā)力5 g,每組測(cè)量平行4次以上,試驗(yàn)重復(fù)3次,結(jié)果取平均值。

    1.3.8 魚糜的水分分布及狀態(tài) 根據(jù)文獻(xiàn)[10]進(jìn)行修改。魚糜在室溫下放置30 min,切成10 mm×20 mm×5 mm,放入核磁管,采用CPMG序列,32 ℃條件下進(jìn)行自旋—自旋弛豫時(shí)間T2的測(cè)定。參數(shù)設(shè)定為SFI=18 MHz,P1=14 μs,SW=100 kHz,TR=2 000 ms,NS=8,NECH=4 000。

    1.3.9 微觀結(jié)構(gòu)分析 魚腸切成3 mm×3 mm×2 mm小塊;用體積分?jǐn)?shù)為2.5%戊二醛于4 ℃固定24 h;去除固定液,用磷酸鹽緩沖液(0.2 mol/L,pH 7.2)漂洗3次,15 min/次;去離子水沖洗1 h;50%,70%,90%乙醇梯度洗脫,15 min/次;100%乙醇脫水3次,10 min/次;真空冷凍干燥;離子濺射鍍金;掃描電鏡觀察。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    2 結(jié)果與分析

    2.1 大豆分離蛋白對(duì)鰱魚魚糜的影響

    2.1.1 持水性和蒸煮損失 由圖1可知,加入SPI后魚糜持水率增加,蒸煮損失降低。當(dāng)SPI添加量為6%時(shí),持水率趨于平穩(wěn),為90.46%,比空白組(84.14%)增加了7.5%;蒸煮損失也趨于平穩(wěn),為9.5%,比對(duì)照組(14.29%)降低了33.7%。當(dāng)SPI添加量增加至9%時(shí),持水率和蒸煮損失的變化均不明顯。由于SPI具有吸水性,能使魚糜的凝膠結(jié)構(gòu)更加緊致;SPI與魚糜自身的蛋白、糖等相互作用將水分子鎖在魚糜網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)[2],加強(qiáng)對(duì)水的吸附能力;SPI的7S伴球蛋白與11S球蛋白中的許多極性基團(tuán)能與水分子發(fā)生水化反應(yīng)[11],從而提高了魚糜的持水性,降低了蒸煮損失。

    圖1 大豆分離蛋白對(duì)魚糜持水性、蒸煮損失的影響

    2.1.2 色澤 由圖2可知,隨著SPI添加量的增加白度值逐漸下降。由于SPI為淡黃色,在魚糜重組制品中的添加量不宜過高,否則會(huì)影響魚糜制品的色澤品質(zhì)。

    2.1.3 凝膠強(qiáng)度 由圖3可知,魚糜的凝膠強(qiáng)度隨SPI添加量的增加而不斷提高。當(dāng)SPI添加量為6%時(shí),凝膠強(qiáng)度為1 942 g·mm,比對(duì)照組(1 145 g·mm)增加了41%;當(dāng)SPI添加量>6%時(shí),凝膠強(qiáng)度增加較為緩慢。SPI加入到魚糜中可與鹽溶性蛋白及不溶性蛋白在斬拌過程中混合,加熱后蛋白分子會(huì)展開形成致密穩(wěn)定的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)[12];同時(shí)SPI中存在魚肉內(nèi)源蛋白酶的抑制因子,能夠降低凝膠劣化對(duì)魚糜制品品質(zhì)的影響,從而提高和改善魚糜的凝膠特性[13]。

    圖2 大豆分離蛋白對(duì)魚糜白度的影響

    圖3 大豆分離蛋白對(duì)魚糜凝膠強(qiáng)度的影響

    2.2 木薯淀粉對(duì)鰱魚魚糜的影響

    2.2.1 持水性和蒸煮損失 由圖4可知,添加6% SPI后再添加木薯淀粉,魚糜的持水性先逐漸增大后趨于平穩(wěn),蒸煮損失逐漸降低并趨于穩(wěn)定。當(dāng)木薯淀粉添加量為9%時(shí),魚糜持水率為93.75%,比對(duì)照組(86.70%)增加了8%;當(dāng)木薯淀粉添加量>9%時(shí),持水率增加緩慢并趨于平穩(wěn),蒸煮損失為8.51%,比對(duì)照組(10.20%)降低了16.5%,添加量>9%時(shí),蒸煮損失變化不明顯。木薯淀粉與魚糜混合后,在二段加熱過程中受熱糊化與水結(jié)合形

    圖4 木薯淀粉對(duì)魚糜持水性、蒸煮損失的影響

    成的凝膠充斥在魚糜的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中,增大了魚糜的持水性[14],在蒸煮過程中持水性增強(qiáng),蒸煮損失降低;木薯淀粉中含有較直鏈淀粉更多的支鏈淀粉,能夠產(chǎn)生更強(qiáng)的黏性,使魚糜形成更強(qiáng)的凝膠,充分鎖住凝膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的水分,增加持水性,降低蒸煮損失。

    2.2.2 色澤 由圖5可知,添加6% SPI后再添加木薯淀粉,魚糜的白度值隨淀粉添加量的增加而降低,但變化不明顯。由于鰱魚魚糜本身白度較高,所以木薯淀粉對(duì)魚糜白度值影響較小。但木薯淀粉添加量不宜過高,否則會(huì)影響魚糜制品的口感。

    圖5 木薯淀粉對(duì)魚糜白度的變化

    2.2.3 凝膠強(qiáng)度 由圖6可知,魚糜的凝膠強(qiáng)度隨木薯淀粉添加量的增大而增大。當(dāng)添加量為9%時(shí),凝膠強(qiáng)度為2 910 g·mm,比對(duì)照組(1 975 g·mm)增加了47%;當(dāng)增加到12%時(shí),凝膠強(qiáng)度增加緩慢;故選取木薯淀粉添加量為9%。淀粉在加熱過程中糊化與水結(jié)合形成凝膠,同時(shí)淀粉顆粒填充在魚糜的蛋白網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中能進(jìn)一步加強(qiáng)凝膠結(jié)構(gòu);淀粉在斬拌過程中,與水及魚糜中蛋白形成淀粉—蛋白—水的復(fù)合型網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),與多糖交聯(lián)形成更大更復(fù)雜的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),從而增強(qiáng)魚糜的凝膠強(qiáng)度[15]。淀粉的添加能提高魚糜的凝膠強(qiáng)度,但不宜添加過多,過多

    圖6 木薯淀粉對(duì)魚糜凝膠強(qiáng)度的影響

    會(huì)影響口感且凝膠強(qiáng)度降低。Yang等[16]發(fā)現(xiàn),低濃度淀粉比高濃度淀粉能更有效地改善魚糜的凝膠強(qiáng)度。

    2.3 轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶對(duì)鰱魚魚糜的影響

    2.3.1 持水性和蒸煮損失 由圖7可知,添加6% SPI與9%木薯淀粉后再添加TG,魚糜的持水率隨TG的增加緩慢增加至穩(wěn)定,蒸煮損失隨TG的添加先降低后增加又降低。當(dāng)TG添加量≥4 U/g·蛋白時(shí),持水率無顯著變化(P>0.05),蒸煮損失在4 U/g·蛋白時(shí)達(dá)最低。加入TG能催化賴氨酸的ε-氨基和谷氨酸殘基上的γ-酰胺基發(fā)生轉(zhuǎn)酰胺反應(yīng)[17],促進(jìn)魚糜蛋白分子之間或分子內(nèi)的相互交聯(lián),對(duì)持水性和蒸煮損失有利,但如果加入過量的TG,會(huì)使蛋白質(zhì)分子過度地聚集,破壞魚糜的凝膠結(jié)構(gòu),對(duì)持水性和蒸煮損失不利[18]。由于TG會(huì)使7S與11S大豆分離蛋白發(fā)生交聯(lián),改變魚糜蛋白分子的交聯(lián)程度,故選取最適TG添加量為4 U/g·蛋白。

    圖7 TG對(duì)魚糜持水性、蒸煮損失的影響

    2.3.2 色澤 由圖8可知,隨著TG的添加,魚糜的白度值有逐漸下降的趨勢(shì),但變化不明顯。這可能是TG自身的暗白色改變了魚糜制品的顏色;也可能是TG促進(jìn)蛋白分子間相互交聯(lián)形成了較強(qiáng)的凝膠,改變了魚糜制品亮度[19]。

    圖8 TG對(duì)魚糜白度的變化

    2.3.3 凝膠強(qiáng)度 由圖9可知,添加6% SPI與9%木薯淀粉后,魚糜的凝膠強(qiáng)度隨TG增加逐漸增加并趨于平穩(wěn)。當(dāng)TG添加量為4 U/g·蛋白時(shí),魚糜的凝膠強(qiáng)度為5 195 g·mm,與未添加TG(4 179 g·mm)相比,增加了24%,但當(dāng)TG添加量超過4 U/g·蛋白時(shí),凝膠強(qiáng)度趨于穩(wěn)定。TG能促進(jìn)魚糜蛋白質(zhì)分子之間化學(xué)鍵的形成,使凝膠的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)更加緊密,但加入過多的TG,可能會(huì)使蛋白質(zhì)分子間過度交聯(lián)而破壞凝膠的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu);隨TG的添加,凝膠壁壘減小,轉(zhuǎn)酰胺反應(yīng)所生產(chǎn)的ε-(γ-谷酰胺)賴氨酸鍵增多,提高了魚糜的凝膠強(qiáng)度。故TG添加量在4 U/g·蛋白時(shí)最為合適。

    圖9 TG對(duì)魚糜凝膠強(qiáng)度的影響

    2.4 鰱魚魚糜T2峰比例變化

    由圖10可知,魚糜凝膠的水分存在4個(gè)T2區(qū)間(T21、T22、T23、T24),與M?ller等[20]研究相符。T21代表了與蛋白質(zhì)等大分子表面的極性基團(tuán)以氫鍵相結(jié)合的單層水;T22為與蛋白質(zhì)中的酰胺基、淀粉纖維中的羥基形成了較小的氫鍵的水,與T21區(qū)間水分相比,其結(jié)合程度較低,T21與T22可共同稱為結(jié)合水;T23為束縛在凝膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的水分,是魚糜凝膠中最主要的水分,約占總水分的90%;T24為凝膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)以外可自由移動(dòng)的水。

    圖10 試驗(yàn)組和對(duì)照組凍融過程中的橫向弛豫時(shí)間

    Figure 10 Transverse relaxation time during freezing and thawing in the experimental and control group

    由表1可知,隨凍融循環(huán)次數(shù)的增加,峰面積A21+A22及A23不斷降低,A24增加,說明魚糜凝膠在凍融循環(huán)過程中結(jié)合水與束縛水轉(zhuǎn)移成自由水。在凍融循環(huán)過程中添加輔料的樣品組A21+A22及A23降低緩慢,A24增加緩慢。T23作為魚糜中含量最多的水分,可顯示魚糜凝膠的持水性能,添加組A23從0次凍融(93.659%)到6次凍融(80.357%)降低了11%,未添加組降低了25%。魚糜在凍融循環(huán)過程中,魚糜中的肌原纖維蛋白發(fā)生變性,所以造成了魚糜中的結(jié)合水以及束縛在凝膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的水分轉(zhuǎn)移成自由流動(dòng)的水。蛋白、淀粉及轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶使魚糜凝膠的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)更加致密,且可能會(huì)有抗凍作用,故添加組比未添加組效果更好。

    表1添加與未添加輔料的魚糜在凍融循環(huán)過程中

    Table 1 The change of peak area ratio in freeze-thaw cycle of surimi with or without auxiliary materials%

    2.5 鰱魚魚糜凝膠的微觀結(jié)構(gòu)分析

    由圖11可知,添加輔料組0次凍融,魚糜凝膠表面不僅平整、光滑,凝膠孔洞較小,且形成了高度致密的凝膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu);3次凍融后,凝膠孔洞變大,網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)致密;6次凍融后,凝膠表面不平整,表面的凝膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)被破壞。未添加輔料組在0次凍融時(shí),表面不平整,結(jié)構(gòu)粗糙,為團(tuán)簇狀,未形成完整的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu);3次凍融后,表面平整,無明顯的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu);6次凍融后,表面平整,但形成了小氣泡,結(jié)構(gòu)被破壞。添加輔料組在凍融循環(huán)過程中,網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)在第6次凍融循環(huán)后被破壞,但仍有致密的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu);而未添加輔料組未凍融時(shí)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)已雜亂、疏松。SPI、木薯淀粉及TG能捕獲更多的游離水,減少水分等物質(zhì)流失,降低蒸煮過程中的損失,且能夠形成致密的凝膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。魚糜凝膠的微觀結(jié)構(gòu)和峰面積比例的變化驗(yàn)證了上述魚糜配方優(yōu)化的可行性。

    圖11 不同處理?xiàng)l件下鰱魚魚糜凝膠微觀結(jié)構(gòu)變化

    3 結(jié)論

    試驗(yàn)綜合評(píng)價(jià)了魚糜食用品質(zhì)(蒸煮損失、持水性、白度、凝膠強(qiáng)度),確定了當(dāng)大豆分離蛋白添加量4%、木薯淀粉添加量9%以及轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶添加量4 U/g·蛋白時(shí),可有效地增加魚糜的持水性,降低蒸煮損失,且不會(huì)使魚糜帶有大豆分離蛋白的淡黃色,同時(shí)提高了魚糜的凝膠強(qiáng)度。通過低場(chǎng)核磁共振和掃描電鏡驗(yàn)證此配方能保護(hù)魚糜在凍融循環(huán)過程中凝膠結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。試驗(yàn)為魚糜重組制品的配方優(yōu)化提供了新的思路,為工業(yè)化生產(chǎn)提供了科學(xué)依據(jù)。但在此基礎(chǔ)上能否以降低成本為目的,對(duì)魚糜制品配方進(jìn)一步優(yōu)化,使其達(dá)到與目前組合使用時(shí)的效果有待進(jìn)一步研究。

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