苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑?qū)λ炯y枯病室內(nèi)配方篩選試驗

陳紅丹,孟慶寶,范偉贈,楊明君，趙梅勤，徐雅飛

(浙江天豐生物科學(xué)有限公司，浙江 金華 321025)

苯醚甲環(huán)唑(Difenoconazole)是三唑類殺菌劑，具有保護(hù)、治療和內(nèi)吸活性。是甾醇脫甲基化抑制劑，抑制細(xì)胞壁甾醇的生物合成，阻止真菌的生長。殺菌譜廣，葉面處理或種子處理可提高作物的產(chǎn)量和保證品質(zhì)?？捎糜诜选⑻鸩?、香蕉、禾谷類作物、水稻、大豆、園藝作物及各種蔬萊等。丙環(huán)唑(Propiconazole)是一種具有保護(hù)和治療作用的內(nèi)吸性三唑類殺菌劑，可被根、莖、葉部吸收，并能很快地在植物株體內(nèi)向上傳導(dǎo)，防治子囊菌，擔(dān)子菌和半知菌引起的病害，特別是對小麥全蝕病、白粉病、銹病、根腐病，水稻惡菌病，香蕉葉斑病具有較好的防治效果。兩者混用可擴(kuò)大殺菌譜、降低各自單劑用量，減少使用成本。本試驗測定了其藥劑不同施藥劑量下的防除活性，為其工業(yè)化生產(chǎn)提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗靶標(biāo)

水稻紋枯病菌(R.solani AG-1 IA)由浙江天豐生物科學(xué)有限公司新產(chǎn)品開發(fā)與研究室提供。

1.2 單劑及其復(fù)配制劑對水稻紋枯病菌的抑菌測定

1.2.1 培養(yǎng)基的配制 先洗凈去皮，再稱取200g馬鈴薯切成小塊，加水煮爛(煮沸20～30min，能被玻璃棒戳破即可)，用八層紗布過濾，加熱，再據(jù)實(shí)際實(shí)驗需要加瓊脂，繼續(xù)加熱攪拌混勻，待瓊脂溶解完后，加入葡萄糖，攪拌均勻，稍冷卻后再補(bǔ)足水分至1000mL，分裝錐形瓶，加塞、包扎，(121℃)滅菌20min左右后取出試管擺斜面或者搖勻，冷卻后貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 含毒介質(zhì)法 首先將藥劑配制成不同濃度的含毒培養(yǎng)基平板，以沒有加藥的平板培養(yǎng)基為對照，每處理設(shè)置3皿。待含毒培養(yǎng)基平板冷卻凝固后，在每個平板上放入2個全蝕病菌菌餅(直徑為6mm)，用保鮮膜密封，寫好標(biāo)簽，在適宜條件下培養(yǎng)72～96h后，測定菌落直徑。

1.2.3 調(diào)查方法 每個菌落用直尺以十字交叉法測定菌落的凈生長量，計算其抑制率。

相對抑制率=(對照菌落凈生長量-含藥菌落凈生長量)/對照菌落凈生長量×100%，并建立回歸方程，進(jìn)行抑制中濃度EC50的比較。

根據(jù)各藥劑濃度對數(shù)值及對應(yīng)的防效幾率值作回歸分析，計算各藥劑的EC50、EC90等值及其95%置信限。

進(jìn)行藥劑聯(lián)合毒力測定時，根據(jù)Wadley法計算混劑的增效系數(shù)(SR)，評價混劑的聯(lián)合作用類型。

Wadley法：根據(jù)增效系數(shù)(SR)來評價藥劑混用的增效作用，即SR<0.5為拮抗作用，0.5≤SR≥1.5為相加作用，SR>1.5為增效作用。增效系數(shù)(SR)按式(1)、式(2)計算：X1=(PA+PB)/(PA/A+PB/B)×100 ………(1)

式中：X1—混劑的EC50理論值，單位為毫克每升(mg /L)；

PA—混劑中A的百分含量，單位為百分率(%)；

PB—混劑中B的百分含量，單位為百分率(%)；

A—混劑中A的EC50值，單位為毫克每升(mg /L)；

B—混劑中B的EC50值，單位為毫克每升(mg /L)。

SR=X1/X2 ………………………………(2)

式中：SR——混劑的增效系數(shù)；

X1—混劑EC50理論值，單位為毫克每升(mg /L)；

X2—混劑EC50實(shí)測值，單位為毫克每升(mg /L)。

1.3 儀器設(shè)備

電子天平(感量0.1mg)；人工氣候培養(yǎng)箱；生物培養(yǎng)箱；培養(yǎng)皿；接種器；移液槍；超凈工作臺；卡尺等。

1.4 試驗設(shè)計和安排

1.4.1 試驗藥劑及配制 97%苯醚甲環(huán)唑/TC、95%丙環(huán)唑/TC均由浙江天豐生物科學(xué)有限公司提供。將原藥用有機(jī)溶劑溶解配成母液，按設(shè)置劑量用含0.1%的吐溫-80的蒸餾水稀釋成試驗劑量進(jìn)行處理。苯醚甲環(huán)唑處理劑量為50、56.25、62.5、68.75、75mg/L (編號分別為A1～A5)；丙環(huán)唑處理劑量為50、60、70、80和90mg /L(編號分別為B1～B5)；苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑混劑分別設(shè)置50、56.25、62.5、68.75、75mg/L 5個濃度梯度，然后按照苯醚甲環(huán)唑與丙環(huán)唑9∶21、12∶18、15∶15、18∶12、21∶9，5個配比；另設(shè)空白對照，每一處理設(shè)4次重復(fù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑單劑及混劑對水稻紋枯病菌的毒力

2.1.1 苯醚甲環(huán)唑與丙環(huán)唑單劑的毒力 表1，隨著用藥劑量的增加苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑兩個藥劑對紋枯病菌的抑制作用逐漸增加。本試驗中苯醚甲環(huán)唑施用到最高劑量對水稻紋枯病菌的防效僅為53.50%。用藥梯度間防效下降差異不是很明顯，試驗中最低用藥劑量防效僅為15.00%。劑量與毒力成回歸相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.9917，回歸方程為y=7.0226+6.4912x，EC50為71.14mg/L。苯醚甲環(huán)唑施用到最高劑量對紋枯病菌的防效達(dá)到了99.13%，用藥劑量降至70mg/L防效差異下降并不明顯，當(dāng)用藥劑量從60mg/L降至50mg/L時，防效下降幅度達(dá)到了41%。用藥劑量與毒力成回歸相關(guān)，相關(guān)系數(shù)R為0.9958，回歸方程為y=14.5645+11.2493x x，EC50為54.85mg/L。

2.1.2 苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑混劑的毒力 表2是苯醚甲環(huán)唑與丙環(huán)唑不同配比不同施藥劑量下對水稻紋枯病菌的抑制作用。隨苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑混劑用藥劑量的增加，對水稻紋枯病菌的抑制作用均有不同程度的提高，混劑配比為15∶15用藥劑量為62.5mg/L時最高防效達(dá)到了100%。苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑配比為9∶21、12∶18、18∶12、21∶9抑制水稻紋枯病菌生長用藥劑量與毒力成回歸相關(guān)，其毒力回歸方程、抑制中濃度、和增效系數(shù)分別為：y=49.7050+31.2627x，EC50=56.21mg/L，SR=1.05；y=50.1507+31.5584x，EC50=55.92mg/L，SR=1.08；y=48.9616+31.4522x，EC50=51.96mg/L，SR=1.22；y=15.5359+11.5596x，EC50=59.77mg/L，SR=1.09。

表1 不同濃度苯醚甲環(huán)唑與丙環(huán)唑?qū)λ炯y枯病菌的毒力

表2 苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑復(fù)配對水稻紋枯病菌的毒力

3 結(jié)論

通過室內(nèi)測定苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑五種不同配比的混劑對抑制水稻紋枯病菌的中濃度EC50和增效系數(shù)SR。結(jié)果表明，二者復(fù)配對兩種靶標(biāo)均表現(xiàn)出一定的增效作用，其中苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑五種配比本試驗中對水稻紋枯病菌均表現(xiàn)出明顯的增效作用。苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑以15∶15進(jìn)行復(fù)配時對水稻紋枯病菌的中濃度最小，為41.20mg/L，增效系數(shù)SR為1.503，增效作用明顯。因此，綜合考量兩者復(fù)配對于兩種靶標(biāo)的增效作用，推薦苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑的最佳配比為苯醚甲環(huán)唑：丙環(huán)唑=12～18∶12～18，廠家推薦配比為15∶15，在該合理配比范圍之內(nèi)。可見，其配比基本科學(xué)合理。

試驗結(jié)果表明，在一定的用藥劑量范圍內(nèi)，苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑復(fù)配對水稻紋枯病菌均具有抑制作用。由于以上結(jié)果是在室內(nèi)完成，室內(nèi)各種環(huán)境條件同大田有一定的差異，有必要開展田間藥效試驗進(jìn)一步驗證配方的合理性及確定使用劑量范圍。