金雞毛草葉總黃酮大孔樹(shù)脂的富集及抗氧化活性研究

韋琴，梅輝，江詠雪，劉少藝，陳卓

（1.武漢工商學(xué)院環(huán)境與生物工程學(xué)院，湖北武漢430065；2.武漢生物工程學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，湖北武漢430415）

金雞毛草，又名白背三七、白子菜、明月草、雞毛菜等，為宿根多年生長(zhǎng)常綠直立草本植物，直根系，側(cè)根多，嫩莖淺綠色，分枝力強(qiáng)，該植物只開(kāi)花，不結(jié)籽，莖部具有很強(qiáng)的不定根形成能力，原產(chǎn)于新加坡，盛產(chǎn)于我國(guó)云南、海南、廣東等地，生長(zhǎng)在潮濕的陰地上，耐熱喜濕[1]。傳統(tǒng)中草藥治療糖尿病歷史悠久，金雞毛草是一種具有較高的藥用和食用價(jià)值的天然植物，開(kāi)發(fā)前景非常廣闊，目前金雞毛草已實(shí)現(xiàn)人工栽培，具有降血糖、降血脂、降血壓、抗炎、抗腫瘤及抗氧化等藥理作用[2-4]。糖尿病是一種常見(jiàn)的慢性代謝性疾病，隨著我國(guó)人民生活水平的提高、人口老齡化，其發(fā)病率逐年升高，已成為嚴(yán)重威脅人們健康的主要疾病之一，研究表明[5-6]金雞毛草提取液對(duì)糖尿病有一定的治療作用。黃酮類(lèi)化合物是一類(lèi)含有酚羥基的還原性化合物，其對(duì)自由基有較強(qiáng)的捕捉作用，抗氧化作用與其組分或聚合度都密切相關(guān)[7-8]。

大孔吸附樹(shù)脂因成本低、選擇性好和再生處理，近年來(lái)被廣泛用于中草藥活性成分的研究[9-10]，王沙沙等[11]研究了大孔吸附樹(shù)脂分離純化豬毛菜總黃酮，發(fā)現(xiàn)AB-8 型樹(shù)脂分離純化效果較好，賴(lài)紅芳等[12]研究大孔樹(shù)脂純化翠云草中穗花杉雙黃酮，表明NKA-9型大孔吸附樹(shù)脂比較適用于穗花杉雙黃酮的純化。但對(duì)金雞毛草總黃酮的大孔樹(shù)脂純化工藝研究卻很少有報(bào)道。

本團(tuán)隊(duì)前期在對(duì)金雞毛草的葉和莖總黃酮進(jìn)行超聲波提取工藝優(yōu)化時(shí)發(fā)現(xiàn)[13]，總黃酮成分主要存在于金雞毛草的葉的部位而不是莖，因此本研究對(duì)金雞毛草葉的部分進(jìn)行了后續(xù)研究，優(yōu)選金雞毛草葉大孔樹(shù)脂純化的工藝條件并測(cè)定純化產(chǎn)物在體外的抗氧化活性，可為金雞毛草的開(kāi)發(fā)利用提供一定的試驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

干燥的金雞毛草葉藥材用粉碎機(jī)粉碎成粉末，過(guò)80 目的鋼篩，密封保存。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（含量≥98%）：天津一方科技有限公司；水為超純水；無(wú)水乙醇、甲醇、雙氧水、氫氧化鈉、硝酸鋁、亞硝酸鈉（均為分析純）：天津市凱通化學(xué)試劑有限公司。AB-8、D101、，D301、D315、HPD450、HPD600、X-5 型大孔樹(shù)脂：天津市海光化工有限公司；抗壞血酸：上海山浦化工有限公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基：熱默爾生物科技有限公司；2，2-聯(lián)氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽自由基：西亞試劑化學(xué)試劑有限公司。

B220 型恒溫水浴鍋、RE-52 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；752 型紫外分光光度計(jì)：上海光譜儀器有限公司；FD-1A-50 冷凍干燥機(jī)：北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作

精密稱(chēng)取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用30 %乙醇配制成0.15 mg/mL 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照液，精確量取對(duì)照液0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL 分別移入標(biāo)有 0、1、2、3、4、5 號(hào)的10 mL 刻度比色管中，分別加入30 %乙醇至5 mL，各加入5 %亞硝酸鈉溶液0.3 mL，搖勻，靜置6 min，再各加入10%硝酸鋁溶液0.3 mL，搖勻，靜置6 min，分別加入4%氫氧化鈉溶液2.0 mL，再加30%乙醇至刻度，搖勻，靜置15 min 后以0 號(hào)為空白對(duì)照，于510 nm 處測(cè)吸光度[14]。繪制總黃酮含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。測(cè)定得到回歸方程y=9.626 7x+0.007 1（x 為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度，mg/mL；y 為吸光度值A(chǔ)），相關(guān)系數(shù)R2=0.999 6。結(jié)果表明，蘆丁對(duì)照品在所試質(zhì)量濃度0.007 5 mg/mL～0.06 mg/mL 呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

1.2.2 供試品溶液的制備

稱(chēng)取金雞毛草葉藥材粉末200 g，加入20 倍量的60%乙醇，于60 ℃、150 W 功率下超聲波提取30 min，離心取上清液得粗提液，取一部分用抽真空冷凍干燥機(jī)凍干成干干浸膏狀，冷藏備用，按需配取。

1.2.3 樹(shù)脂的預(yù)處理

將大孔樹(shù)脂浸泡于95%乙醇中，浸泡24 h，倒去懸浮物，更換95%乙醇溶液浸泡樹(shù)脂，直至上清液加水無(wú)白色渾濁現(xiàn)象為止，再用蒸餾水沖洗樹(shù)脂直至無(wú)醇，然后進(jìn)行酸洗堿洗處理，最后用大量蒸餾水沖洗至上清液pH 呈中性[15-16]。

1.2.4 大孔樹(shù)脂純化金雞毛草葉總黃酮的工藝優(yōu)化

以金雞毛草葉總黃酮的吸附率及解吸率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過(guò)靜態(tài)吸附篩選最優(yōu)的樹(shù)脂；采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)選總黃酮的最佳純化工藝。

式中：Co為樣品液質(zhì)量濃度，mg/mL；Ca為上樣吸附后流出液總黃酮質(zhì)量濃度，mg/mL；Cd為解吸液中總黃酮濃度，mg/mL；Vs為樣品液體積，mL；Vd為解吸液體積，mL；Va為解吸流出液體積，mL。

1.2.4.1 大孔樹(shù)脂的靜態(tài)吸附篩選

準(zhǔn)確稱(chēng)取7 種已經(jīng)過(guò)預(yù)處理的大孔樹(shù)脂各1 g，用少量乙醇濕潤(rùn)后，以蒸餾水洗去乙醇，再吸干其表面水分置于150 mL 三角瓶中，各加入50 mL 金雞毛草葉提取物，置于全溫振蕩培養(yǎng)箱中，于30 ℃，120 r/min 震蕩?kù)o態(tài)吸附24 h 后過(guò)濾，吸取一定體積上清液測(cè)定溶液中的總黃酮濃度，計(jì)算吸附率，將上述吸附飽和的大孔樹(shù)脂過(guò)濾后放入150 mL 三角瓶中，加入50 mL 60%無(wú)水乙醇溶液對(duì)已吸附飽和的樹(shù)脂進(jìn)行靜態(tài)解吸24 h，然后測(cè)定解吸液中黃酮類(lèi)化合物的含量計(jì)算解吸率。

1.2.4.2 上樣濃度對(duì)樹(shù)脂吸附率的影響

稱(chēng)取8 份AB-8 型大孔樹(shù)脂1 g 于50 mL 三角瓶中，分別加入 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 mg/mL的上樣液6 mL，將其置于全溫振蕩培養(yǎng)箱中，于30 ℃，120 r/min 振蕩進(jìn)行靜態(tài)吸附24 h 過(guò)濾，取上清液測(cè)定總黃酮濃度計(jì)算吸附率。

1.2.4.3 上樣液pH 值對(duì)總黃酮吸附率的影響

準(zhǔn)確稱(chēng)取7 份AB-8 型大孔樹(shù)脂5.0 g（濕重），分別加入50 mL 三角燒瓶中，加入4.0 mg/mL 上樣液25.0 mL，調(diào)節(jié) pH 值為 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0，置于全溫振蕩培養(yǎng)箱中，于30 ℃，120 r/min 震蕩?kù)o態(tài)吸附24 h 過(guò)濾，取上清液測(cè)總黃酮濃度計(jì)算吸附率。

1.2.4.4 上樣流速對(duì)總黃酮保留率的影響

稱(chēng)取適量AB-8 型大孔樹(shù)脂進(jìn)行濕法上柱，維持柱體積為12 mL，裝入等體積，濃度為4 mg/mL 上樣液，分別以 1.5、3.0、4.5、6.0、7.5 BV/h 的體積流量通過(guò)樹(shù)脂柱，水洗后用60%乙醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液計(jì)算保留率。

1.2.4.5 上樣體積的考察

稱(chēng)取適量AB-8 型大孔樹(shù)脂進(jìn)行濕法上柱，控制上樣流速為1.5 BV/h，分批收集流出液測(cè)定流出液總黃酮濃度。

1.2.4.6 水洗用量考察

以2 BV/h 的流速水洗已達(dá)到吸附平衡的大孔樹(shù)脂，分批收集流出液，測(cè)定流出液中總黃酮的含量，繪制水洗用量曲線(xiàn)。

1.2.4.7 洗脫液濃度對(duì)樹(shù)脂解吸率的影響

稱(chēng)取適量AB-8 型大孔樹(shù)脂進(jìn)行濕法上柱，維持柱體積為12 mL，加入1.2 BV 的4 mg/mL 上樣液到色譜柱中進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，調(diào)節(jié)上樣流速為1.5 BV/h 上樣pH 值為6，吸附完成后加入3.5 BV 蒸餾水進(jìn)行洗脫，再分別用濃度在10%～90%的乙醇，每10%一個(gè)濃度梯度在2 BV/h 流速下解吸，收集流出液測(cè)定解吸率。

1.2.4.8 乙醇洗脫用量考察

水洗后用60%的乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫流速調(diào)節(jié)為2 BV/h，分批收集一管流出液，測(cè)定洗脫液中總黃酮的濃度，繪制洗脫曲線(xiàn)。

1.2.4.9 驗(yàn)證性試驗(yàn)

在1.2.4.2～1.2.4.8 單因素研究最佳條件下，以總黃酮的保留率為考察指標(biāo)做五次平行試驗(yàn)，計(jì)算平均值和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）值。

1.2.5 金雞毛草葉總黃酮純度的測(cè)定

將總黃酮純化液先濃縮后用抽真空冷凍干燥機(jī)凍干成干浸膏狀，測(cè)定總黃酮質(zhì)量和干浸膏質(zhì)量，并計(jì)算所得總黃酮的純度，按同樣的方法得到總黃酮粗提液純度，計(jì)算純化前后純度。

1.2.6 DPPH 自由基清除活性

稱(chēng)取24.00 mgDPPH 用100 mL 無(wú)水乙醇溶解，定容于100 mL 容量瓶中，搖勻，倒入棕色磨口瓶，作為儲(chǔ)備液保存于4 ℃冰箱中，濃度為6×10-4moL/L，在比色管中依次加入干浸膏質(zhì)量濃度為20 μg/mL～100 μg/mL樣品1 mL 及濃度為 0.6 mmoL/L DPPH 乙醇溶液0.5 mL，然后再添加乙醇溶液補(bǔ)充體積至5 mL，使樣品最終濃度分別為 4、8、12、16、20 μg/mL，搖勻，室溫避光反應(yīng)30 min 后于517 nm 處測(cè)定吸光值A(chǔ)，計(jì)算其DPPH 自由基清除能力[17-20]。VC測(cè)定方法同1.2.6。

式中：A0為不加樣時(shí)的吸光度；A1為加樣組的吸光度。

1.2.7 ·OH 清除率的測(cè)定

本試驗(yàn)采用Fenton 體系[17-20]對(duì)金雞毛草葉總黃酮的·OH 清除率進(jìn)行測(cè)定。取濃度為5.0 mmoL/L 的鄰二氮菲溶液0.5 mL，加入濃度為150 mmoL/L 磷酸鹽緩沖液（pH7.4）1.0 mL，混勻后加入濃度為 5.0 mmoL/L 的FeSO4溶液0.5 mL，充分混勻，加入干浸膏質(zhì)量濃度為100 μg/mL 樣品液 1.0 mL，再加入 0.1 mol/L H2O20.2 mL，搖勻，37 ℃保溫60 min，在508 nm 處測(cè)定吸光度（As）。按照上述操作，用蒸餾水代替樣品液，測(cè)定得A1，用蒸餾水代替樣品液和H2O2溶液，測(cè)定得A0。計(jì)算待測(cè)液對(duì)羥自由基的清除率Y。計(jì)算待測(cè)液對(duì)羥自由基的清除率。VC測(cè)定方法同1.2.7。

式中：As為樣品液測(cè)得吸光度；A1為蒸餾水代替樣品液所測(cè)得吸光度；A0為蒸餾水代替樣品液和H2O2溶液所測(cè)得吸光度。

1.2.8 ABTS+·清除率測(cè)定

ABTS+·工作液的制備[17-20]：將 7 mmoL/L ABTS 水溶液與2.45 mmoL/L K2S2O8（終濃度）混合，在室溫暗處存放12 h～16 h，生成ABTS+·陽(yáng)離子自由基，作為儲(chǔ)存液，使用前，用80%乙醇將ABTS+儲(chǔ)存液稀釋到734 nm處吸光值為0.70±0.02，反應(yīng)體系是具塞比色管中依次加入 0.5 mL 干浸膏質(zhì)量濃度為 40 μg/mL～200 μg/mL，及5 mL ABTS+·工作液，使樣品最終濃度分別為3.6、7.2、10.9、14.5、18.2 μg/mL，室溫避光反應(yīng) 6 min 后于 734 nm測(cè)定吸光值A(chǔ)，計(jì)算其抗氧化能力。VC測(cè)定方法同上。

式中：A0為不加樣時(shí)的吸光度；A1為加樣組的吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 大孔樹(shù)脂的靜態(tài)吸附篩選

7 種型號(hào)大孔樹(shù)脂篩選結(jié)果見(jiàn)表1。

由表1 可知，7 種樹(shù)脂的吸附中，HPD600 型大孔樹(shù)脂的吸附率最佳為71.2%，但其解吸率是中等水平為70.9%；AB-8 型大孔樹(shù)脂的解吸率最佳為81.5%，且AB-8 型大孔樹(shù)脂的吸附率是上等水平為69.9%，綜合以上因素，最佳樹(shù)脂篩選為AB-8 型大孔樹(shù)脂。

2.2 AB-8型大孔樹(shù)脂對(duì)金雞毛草葉總黃酮的吸附性能考察

2.2.1 上樣濃度對(duì)總黃酮吸附率的影響

上樣液中總黃酮的濃度對(duì)吸附率的影響見(jiàn)表2。

表2 上樣液中總黃酮的濃度對(duì)吸附率的影響Table 2 Effect of the concentration of total flavonoids in the sample solution on the adsorption rate

由表2 可知，隨著上樣濃度的增加，樹(shù)脂的吸附率也增加，而當(dāng)上樣濃度達(dá)到4.0 mg/mL 時(shí)，樹(shù)脂的吸附率達(dá)到最大為52.8%。而當(dāng)樣品液濃度再次增加時(shí)，上樣液中雜質(zhì)也隨之增加，雜質(zhì)與黃酮產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)吸附反而抑制了黃酮在樹(shù)脂中的擴(kuò)散。因此，最佳上樣濃度為4 mg/mL。

2.2.2 上樣液pH 值對(duì)樹(shù)脂吸附率的影響

pH 值對(duì)總黃酮吸附率的影響見(jiàn)表3。

表3 pH 值對(duì)總黃酮吸附率的影響Table 3 Effect of pH on the adsorption rate of total flavonoids

由表3 可知，上樣pH 值對(duì)大孔樹(shù)脂純化總黃酮的吸附率影響較大，大孔樹(shù)脂純化總黃酮吸附率隨著pH 值的增大而逐漸增大，在pH 值為6 時(shí)最大，其后逐漸降低，故后續(xù)單因素試驗(yàn)選取吸附pH 值為6。

2.2.3 上樣流速對(duì)總黃酮保留率的影響

上樣流速對(duì)總黃酮保留率的影響見(jiàn)表4。

表4 上樣流速對(duì)保留率的影響Table 4 Effect of loading flow rate on retention rate

由表4 可知，當(dāng)以越低的上樣流速通過(guò)色譜柱時(shí)，總黃酮就越能和樹(shù)脂充分接觸，總黃酮保留率越高。因此本試驗(yàn)中選取1.5 BV/h 作為試驗(yàn)最佳上樣流速。

2.2.4 上樣體積的考察

上樣體積對(duì)流出液總黃酮濃度的影響見(jiàn)圖1。

圖1 上樣體積的考察Fig.1 Investigation of the loading volume

結(jié)果如圖1，當(dāng)上樣體積達(dá)到0.3 BV 時(shí)流出液開(kāi)始有總黃酮泄露，而后總黃酮濃度隨著上樣液體積的增加而逐漸增加，當(dāng)柱床體積達(dá)到1.8 BV 以上時(shí)，AB-8 型大孔樹(shù)脂對(duì)總黃酮的吸附量達(dá)到吸附平衡，但考慮到泄露過(guò)多造成浪費(fèi)，故綜合考量最佳上樣體積為1.2 BV。

2.2.5 水洗用量考察

水洗用量對(duì)流出液總黃酮濃度的影響見(jiàn)圖2。

圖2 水洗用量曲線(xiàn)Fig.2 Washing dosage curve

結(jié)果見(jiàn)圖2，洗脫開(kāi)始時(shí)便有總黃酮的泄露，而當(dāng)蒸餾水洗脫用量達(dá)到3.5 BV 時(shí)，總黃酮的流出基本達(dá)到平衡，所以確定洗脫蒸餾水用量為3.5 BV。

2.2.6 洗脫液濃度對(duì)樹(shù)脂解吸率的影響

洗脫液濃度對(duì)解吸率影響見(jiàn)表5。

由表5 可知，解吸率隨著洗脫液濃度的增加而增加，而當(dāng)洗脫液濃度達(dá)到60%時(shí)解吸率達(dá)到最大，其后逐漸降低但降幅不大，可能是總黃酮的極性與60%乙醇的極性更為相似，因此選取60%作為洗脫液濃度。

表5 洗脫液濃度對(duì)解吸率影響Table 5 Effect of eluent concentration on desorption rate

2.2.7 乙醇洗脫用量考察

洗脫液體積對(duì)流出液總黃酮濃度的影響見(jiàn)圖3。

圖3 洗脫曲線(xiàn)Fig.3 Elution curve

由圖3 可知，當(dāng)洗脫體積達(dá)到3 BV 時(shí)可以基本解吸完全，再添加洗脫液時(shí)，也會(huì)有總黃酮的流出，但濃度很低。從成本方面考慮，選取3 BV 洗脫液進(jìn)行洗脫。

2.2.8 驗(yàn)證性試驗(yàn)

稱(chēng)取適量AB-8 型大孔樹(shù)脂進(jìn)行濕法上柱，維持柱體積為12 mL，加入1.2 BV 的4 mg/mL 的上樣液到樹(shù)脂柱中進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，調(diào)節(jié)上樣流速為1.5 BV/h，上樣pH 值為6，吸附完成后加入3.5 BV 蒸餾水水洗，用3 BV 的60%乙醇對(duì)大孔樹(shù)脂進(jìn)行洗脫。5 次平行試驗(yàn)總黃酮保留率分別為60.4%、61.0%、61.6%、61.5%、61.2%，平均值為61.1%，RSD 值為0.78%，表明重復(fù)性較好。

2.3 金雞毛草葉總黃酮純度的測(cè)定

經(jīng)過(guò)AB-8 型大孔樹(shù)脂純化后，金雞毛草葉總黃酮的純度由5.83%提升至30.54%，純化液總黃酮純度是粗提液的5.24 倍。

2.4 抗氧化活性研究

2.4.1 DPPH·清除活性

AB-8 型樹(shù)脂總黃酮純化液和VC對(duì)DPPH·的清除率見(jiàn)圖4。

圖4 AB-8 型樹(shù)脂總黃酮純化液和VC 對(duì)DPPH·的清除率Fig.4 Clearance of DPPH·by total flavonoids purified by AB-8 resin and VC

結(jié)果見(jiàn)圖4，對(duì)照品純度為100%的維生素C 在20 μg/mL～100 μg/mL 濃度范圍內(nèi)對(duì) DPPH 自由基清除率為 83.33%～95.13%，在 100 μg/mL 時(shí)對(duì) DPPH 自由基清除率已達(dá)到最大為95.13%。經(jīng)AB-8 型大孔樹(shù)脂純化的純度為30.54%的金雞毛草葉總黃酮，其DPPH 清除率隨濃度增大而增大，在干浸膏質(zhì)量濃度20 μg/mL～100 μg/mL 濃度范圍內(nèi)對(duì) DPPH 自由基清除率為23.10%～57.76%，在 100 μg/mL 時(shí)對(duì) DPPH 自由基清除率達(dá)到最大為57.76%，為VC的DPPH 自由基清除率的0.61 倍。因此DPPH 自由基清除率：VC（純度100%）>AB-8 型大孔樹(shù)脂純化的總黃酮（純度30.54%）。

2.4.2 ·OH 清除率

濃度為100μg/mLVC溶液的·OH 清除率是10.20%，經(jīng)大孔樹(shù)脂純化的純度為30.53%的金雞毛草葉總黃酮在干浸膏質(zhì)量濃度為100 μg/mL 溶液時(shí)對(duì)于·OH 清除率為3.76%，是VC的0.37 倍。而·OH 自由基清除率越大則證明抗氧化活性越強(qiáng)，因此·OH 清除率：VC（純度100 %）>AB-8 型大孔樹(shù)脂純化的總黃酮（純度30.54%）。

2.4.3 ABTS+·清除率測(cè)定

AB-8 型樹(shù)脂總黃酮純化液和VC對(duì)ABTS+·的清除率見(jiàn)圖5。

結(jié)果見(jiàn)圖5，純度為100%的對(duì)照品VC在3.6 μg/mL～18.2 μg/mL 濃度范圍內(nèi)對(duì) ABTS+·清除率為 49.51%～100%，VC的濃度為 10.8 μg/mL 時(shí) ABTS+·清除率已經(jīng)到了100 %。經(jīng)AB-8 型大孔樹(shù)脂純化的純度為30.54%的金雞毛草葉總黃酮ABTS+·清除率隨濃度的升高而升高，在干浸膏質(zhì)量濃度3.6 μg/mL～18.2 μg/mL濃度范圍內(nèi)對(duì)ABTS+·清除率為33.27%～87.90%，在18.2 μg/mL 時(shí)對(duì) ABTS+·清除率達(dá)到最大為 87.90%，是VC的0.88 倍。ABTS+·清除率越大則證明抗氧化力越強(qiáng)，因此ABTS+·清除率：VC（純度100%）>AB-8 型大孔樹(shù)脂純化的總黃酮（純度30.54%）。

圖5 AB-8 型樹(shù)脂總黃酮純化液和VC 對(duì)ABTS+·的清除率Fig.5 Clearance of ABTS+·by total flavonoids purified by AB-8 resin and VC

3 結(jié)論

用靜態(tài)吸附試驗(yàn)篩選出最佳樹(shù)脂為AB-8 型，經(jīng)過(guò)單因素試驗(yàn)考察，動(dòng)態(tài)吸附最優(yōu)條件為上樣濃度為4 mg/mL、上樣體積為1.2 BVmL、上樣流速為1.5 BV/h、上樣pH 為6、洗脫水用量為3.5 BV、乙醇洗脫濃度為60%，乙醇洗脫用量為3 BV。在此條件下純化后總黃酮的保留率為61.1%，純度由5.83%提升至30.54%，提高至5.24 倍，林秋鳳等[21]報(bào)道經(jīng)大孔樹(shù)脂純化后的金蓮花總黃酮的純度提高了2.88 倍相比較，本研究中的大孔樹(shù)脂純化工藝對(duì)金雞毛草葉總黃酮的純化效果較好。

抗氧化活性數(shù)據(jù)顯示，經(jīng)大孔樹(shù)脂純化的純度為30.54 %的金雞毛草葉總黃酮在干浸膏質(zhì)量濃度100 μg/mL 時(shí)對(duì)DPPH 自由基清除率達(dá)到最大清除率為57.76 %，為VC的0.61 倍；在干浸膏質(zhì)量濃度18.2 μg/mL 時(shí)對(duì) ABTS+·清除率達(dá)到最大為 87.90%，是VC的0.88 倍；在干浸膏質(zhì)量濃度100 μg/mL 時(shí)對(duì)·OH 的清除率為3.76%，是VC的0.37 倍。因此金雞毛草葉總黃酮經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂純化后在純度為30.54%時(shí)有一定的抗氧化能力，對(duì)于DPPH 自由基、·OH 自由基及總抗氧化能力隨抗氧化劑濃度增強(qiáng)而增強(qiáng)，該試驗(yàn)可為金雞毛草的深入開(kāi)發(fā)、產(chǎn)業(yè)附加值的提高提供參考依據(jù)。

本試驗(yàn)是基于相同干浸膏質(zhì)量濃度條件下，比較了金雞毛草葉總黃酮純化物與VC的抗氧化性能，雖然金雞毛草葉總黃酮純化物在純度為30.54%情況下抗氧化能力不比上純度100%的VC，但是并不表示金雞毛草葉總黃酮的抗氧化能力比不上VC，因?yàn)榭寡趸芰€與純度有關(guān)，所以后續(xù)試驗(yàn)將繼續(xù)探討對(duì)相同純度下金雞毛草葉總黃酮純化物與VC的抗氧化性能進(jìn)行比較，比便于進(jìn)一步衡量金雞毛草葉總黃酮在體外的抗氧化活性。