冷沉淀凝血因子制備質(zhì)量的影響因素分析

仇嚴(yán)妹

[摘要]目的 研究采血時(shí)間、制備時(shí)間、制備方法、速凍方法對冷沉淀凝血因子質(zhì)量的影響。方法 隨機(jī)選取2017年10月～2018年3月采集的200 ml全血，分別在6、8、13、18 h這四個(gè)時(shí)間段內(nèi)制備成新鮮冰凍血漿，每段為25份新鮮冰凍血漿，相應(yīng)做好標(biāo)識(shí)，之后加工成冷沉淀凝血因子，對其中的Ⅷ因子含量、纖維蛋白原含量進(jìn)行檢測。結(jié)果 各個(gè)時(shí)間段下由新鮮冰凍血漿制備而成的冷沉淀凝血因子中的Ⅷ因子含量活性隨著制備時(shí)間的延長明顯下降（P<0.05），而各時(shí)間段的纖維蛋白原含量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與18 h的質(zhì)量合格率比較，采血后6、8、13 h的質(zhì)量合格率均顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。6、8、13 h這三個(gè)時(shí)間段的質(zhì)量合格率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 為保證冷沉淀凝血因子制備質(zhì)量，應(yīng)對全血采集時(shí)間進(jìn)行控制，200 ml要求在7 min以內(nèi)采完，400 ml要求在13 min內(nèi)采完，并在6～8 h內(nèi)、最長不要超過13 h分離新鮮冰凍血漿作為原料漿，同時(shí)建議使用平板速凍機(jī)的制備方法，以滿足臨床輸注應(yīng)用的有效性和安全性。

[關(guān)鍵詞]冷沉淀凝血因子;采血因素;制備因素;時(shí)間因素

[中圖分類號] R331? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2019）7（b）-0199-03

[Abstract] Objective To study the influence of blood collecting time， preparation time， preparation method and quick freezing method on the quality of cryoprecipitated coagulation factor. Methods A total of 200 ml whole blood collected from October 2017 to March 2018 was randomly selected to prepare fresh frozen plasma within 6， 8， 13 and 18 hours， each of which contained 25 fresh frozen plasma samples， which were marked accordingly， and then processed into cryoprecipitated coagulation factors. The content of factor Ⅷ and fibrinogen were detected. Results The activity content of factor Ⅷ in cryoprecipitated coagulation factor prepared from fresh frozen plasma decreased significantly with the prolongation of preparation time （P<0.05）. There was no significant difference in fibrinogen content among different time periods （P>0.05）. Compared with the qualified rate of 18 hours， the qualified rate of 6， 8 and 13 hours after blood collection was significantly higher， and the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no significant difference in the quality qualification rate among the three periods of 6， 8 and 13 hours （P>0.05）. Conclusion In order to ensure the preparation quality of the cryoprecipitated coagulation factor， the collection time of whole blood should be controlled， of which 200 ml whole blood should be collected within 7 minutes， 400 ml within 13 minutes， and fresh frozen plasma should be separated into material plasma within 6-8 hours， no longer than 13 hours after blood collection. At the same time， it is also suggested to use the preparation method of plate freezer so as to satisfy the validity and safety of clinical transfusion and application.

[Key words] Cryoprecipitated coagulation factor; Blood collection factors; Preparation factors; Time factor

自1964年朱迪斯·普爾博士發(fā)現(xiàn)冷沉淀以來，冷沉淀作為一種血液制品，在臨床中得到了越來越廣泛的推廣與使用[1]。冷沉淀即把新鮮冰凍的血漿解凍之后進(jìn)行離心處理，血漿全部移除之后余下不溶的沉淀物這一過程[2]。冷沉淀中富含的凝血因子、纖維蛋白原是可以治療血友病、糾正凝血功能障礙等的有效因子[3]。近年來，無償獻(xiàn)血得到了很好的推廣，來自于街頭、鄉(xiāng)村的血液捐獻(xiàn)越來越多，而隨之出現(xiàn)的問題則是血液檢測、分離的延遲，繼而影響到新鮮冰凍血漿的制備[4]，在制備時(shí)間、制備溫度以及制備方法等因素影響下，其產(chǎn)生較大的質(zhì)量差異，從而影響到臨床使用效果。為了能制備出高質(zhì)量的冷沉淀制品，本研究就影響冷沉淀凝血因子制備質(zhì)量的因素與對策進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1標(biāo)本來源

隨機(jī)選取2017年10月～2018年3月采集的200 ml全血，分別在6、8、13、18 h這四個(gè)時(shí)間段內(nèi)制備成新鮮冰凍血漿，每段為25份新鮮冰凍血漿，相應(yīng)做好標(biāo)識(shí)，之后加工成冷沉淀凝血因子。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：被采集全血者均符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》，排除不符合上述標(biāo)準(zhǔn)者全血。

1.2方法

1.2.1制備新鮮冰凍血漿的方法? 應(yīng)當(dāng)對采血時(shí)間進(jìn)行控制，200 ml全血采集時(shí)間>7 min，400 ml全血采集時(shí)間>13 min，所采集的全血不可用于制備新鮮冰凍血漿[5]。對這部分全血進(jìn)行特殊標(biāo)識(shí)，將血漿分離出來制備成冰凍血漿，這部分血漿不可用于制備冷沉淀。對在正常采血時(shí)間內(nèi)的全血，采集后儲(chǔ)存于冷藏環(huán)境中，采集之后按照6、8、13、18 h這四個(gè)時(shí)間段內(nèi)做好標(biāo)識(shí)并分離血漿，以每分鐘3800轉(zhuǎn)的速度持續(xù)進(jìn)行15 min的離心處理，分理出新鮮冰凍血漿，采血時(shí)間超過18 h后分離的血漿，制備成冰凍血漿。把新鮮冰凍血漿用傳統(tǒng)低溫冰箱、平板速凍機(jī)速凍成固態(tài)，然后分成A組、B組，A組血漿平鋪放到平板速凍機(jī)當(dāng)中，進(jìn)行30 min的速凍;B組血漿平鋪放到低溫保存箱中，速凍2 h，之后取出放置到溫度為-18℃的低溫冰箱中。

1.2.2制備冷沉淀凝血因子的方法? 使用虹吸法[6]制備冷沉淀凝血因子，注意將容量控制在標(biāo)示量（ml）±10%，熱合之后第一時(shí)間放置到溫度設(shè)定在-50℃以下的血漿速凍機(jī)中，1 h之后取出，轉(zhuǎn)移放置到溫度為-18℃以下的低溫冰箱中存儲(chǔ)。

1.2.3 Ⅷ因子含量、纖維蛋白原含量測定方法? 把冷沉淀凝血因子放入到溫度調(diào)控在37℃的恒溫水浴箱當(dāng)中，融化之后嚴(yán)格按照有關(guān)檢測操作規(guī)程標(biāo)準(zhǔn)，采用凝固法測定Ⅷ因子含量、纖維蛋白原含量[7-8]。

1.3觀察指標(biāo)

對各個(gè)時(shí)間段以及不同速凍方法下冷沉淀凝血因子當(dāng)中包含的Ⅷ因子含量、纖維蛋白原含量進(jìn)行差異對比，另外對各時(shí)間段制備冷沉淀凝血因子的質(zhì)量檢測結(jié)果進(jìn)行比較。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各個(gè)時(shí)間段下冷沉淀凝血因子中Ⅷ因子、纖維蛋白原含量的比較

各個(gè)時(shí)間段下由新鮮冰凍血漿制備而成的冷沉淀凝血因子中的Ⅷ因子含量活性隨著制備時(shí)間的延長明顯下降（P<0.05），而纖維蛋白原含量的比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.2各時(shí)間段制備冷沉淀凝血因子質(zhì)量檢測結(jié)果的比較

與18 h的質(zhì)量合格率比較，6、8、13 h時(shí)間段的質(zhì)量合格率均顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;6、8、13 h時(shí)間段的質(zhì)量合格率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表2）。

3討論

新鮮冰凍血漿是臨床中廣泛應(yīng)用的一種血液成分，主要用來治療凝血疾病，同時(shí)在手術(shù)和急性失血的治療方面，也有顯著的止血、促進(jìn)組織修復(fù)作用[9-10]。冷沉淀凝血因子是新鮮冰凍血漿在保存期內(nèi)基于1～6℃封閉狀態(tài)下進(jìn)行融化，同時(shí)將血漿中含有的冷不溶解物質(zhì)進(jìn)行分析，并在1 h內(nèi)進(jìn)行凍結(jié)而成的一種成分血。對在8～18 h這幾個(gè)時(shí)間段內(nèi)分離出來的新鮮冰凍血漿經(jīng)不同速凍方法制備而成的冷沉淀凝血因子是否能夠滿足質(zhì)量控制要求，目前臨床有關(guān)研究報(bào)道較少，因此，研究影響到冷沉淀凝血因子制備質(zhì)量的時(shí)間因素、速凍方法因素對臨床更好地應(yīng)用具有積極的指導(dǎo)意義。

冷沉淀凝血因子中的Ⅷ因子屬于性質(zhì)極不穩(wěn)定的一種凝血因子，其半衰期很短，只有8～12 h，而且活性在很大程度上會(huì)受到獻(xiàn)血者自身凝血因子水平、血液采集過程中的各項(xiàng)因素、制備時(shí)間和溫度以及運(yùn)輸?shù)戎T多因素的影響，例如，血液應(yīng)為EDTA抗凝血、運(yùn)輸期間不能出現(xiàn)劇烈震動(dòng)、不能出現(xiàn)融血、采集至送至實(shí)驗(yàn)室的時(shí)間需要在4 h內(nèi)完成、保存溫度最低為2℃、最高不能超過24℃等[11-13]。本研究結(jié)果顯示，各個(gè)時(shí)間段下由新鮮冰凍血漿制備而成的冷沉淀凝血因子，其中Ⅷ因子含量活性隨著制備時(shí)間的延長明顯下降（P<0.05），而纖維蛋白原含量的比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示在最佳的制備時(shí)間段制備新鮮冰凍血漿，對冷沉淀凝血因子中的Ⅷ因子含量有著很大的影響。

本研究結(jié)果還顯示，在采血后6 h內(nèi)制備出的新鮮冰凍血漿所分離出來的冷沉淀凝血因子合格率為96.0%，8 h這一時(shí)間段內(nèi)的合格率為92.0%，13 h這一時(shí)間段內(nèi)的合格率也達(dá)到了84.0%，均符合質(zhì)控要求的75%受控標(biāo)準(zhǔn);但是在18 h這一時(shí)間段內(nèi)所制備冷沉淀凝血因子的質(zhì)量合格率僅為52.0%。與18 h這一時(shí)間段內(nèi)所制備的冷沉淀凝血因子質(zhì)量合格率相比，6、8、13 h這三個(gè)時(shí)間段的質(zhì)量合格率均顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。用于制備冷沉淀凝血因子的血漿最佳選擇在采集之后6～8 h內(nèi)，最長不能超過13 h分離速凍的血漿作為原料漿，然后將研究結(jié)果用到制備血漿工作之中，這樣制備冷沉淀凝血因子的血漿制備每年大大增加，不僅可以滿足臨床輸注的安全性，同時(shí)還能滿足不斷增長的冷沉淀凝血因子需求量[14-15]。以往臨床使用的低溫冰箱制備法雖然在較短時(shí)間內(nèi)制備的冷沉淀凝血因子活性較高，可滿足冷沉淀質(zhì)量要求，但隨著制備時(shí)間的延長，其顯著性也會(huì)有所下降。

綜上所述，影響到冷沉淀凝血因子制備質(zhì)量的因素主要是全血采集時(shí)間的控制和制備新鮮冰凍血漿操作時(shí)間的長短以及速凍方法的選擇，為保證冷沉淀凝血因子制備質(zhì)量，應(yīng)對全血采集時(shí)間進(jìn)行控制，200 ml要求在7 min以內(nèi)采完，400 ml要求在13 min內(nèi)采完，并在6～8 h內(nèi)、最長不要超過13 h分離新鮮冰凍血漿作為原料漿，同時(shí)建議使用平板速凍機(jī)的制備方法，以滿足臨床輸注應(yīng)用的有效性和安全性。

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（收稿日期：2019-01-02? 本文編輯：祁海文）