腸道病毒性腦炎兒童外周血NK細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞亞群及相關(guān)細(xì)胞因子水平的變化

李永春，李小芹，張迎輝

1. 鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院，河南省兒童醫(yī)院，鄭州兒童醫(yī)院消化科，鄭州 450000 2.鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院，河南省兒童醫(yī)院，鄭州兒童醫(yī)院腎病科，鄭州 450000

病毒性腦炎是常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，常年均可發(fā)生，有時(shí)呈暴發(fā)流行，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、腹瀉、惡心等，嚴(yán)重者出現(xiàn)意識(shí)障礙、腦膜刺激征等，甚至死亡，存活者也可能存在不同程度后遺癥[1-2]。病毒性腦炎病原學(xué)包括腸道病毒、皰疹病毒、腮腺炎病毒等，其中，80%以上可明確病原學(xué)的病毒性腦炎由人類(lèi)腸道病毒引起，兒童為高發(fā)人群[3]。早期診斷腸道病毒性腦炎(enteroviral encephalitis，EVE)并早期治療是最有效的減少患兒后遺癥發(fā)生、死亡的方法。有研究[4]報(bào)道，免疫功能紊亂與EVE發(fā)生、進(jìn)展密切相關(guān)，因感染而活化的T淋巴細(xì)胞可通過(guò)血腦屏障進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，產(chǎn)生大量的炎性介質(zhì)，介導(dǎo)中樞神經(jīng)損傷。但目前有關(guān)EVE患兒免疫功能的報(bào)道相對(duì)較少。因此，本研究擬探討NK細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞亞群水平變化在EVE中的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年10月至2017年10月河南省兒童醫(yī)院神經(jīng)科住院的EVE患兒136例，所有患兒符合病毒性腦膜炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，腦脊液腸道病毒核酸檢測(cè)陽(yáng)性，咽拭子、糞便等標(biāo)本腸道病毒核酸檢測(cè)陽(yáng)性，伴隨出現(xiàn)頭痛、發(fā)熱(≥37.5℃)、嘔吐等癥狀。136例患兒中，男性81例，女性55例，年齡5個(gè)月～15歲，平均(5.61±1.71)歲。入院時(shí)病情嚴(yán)重程度：輕度91例，重度45例，其中2例輕度患兒入院后病情由輕轉(zhuǎn)重。出院時(shí)12例遺留神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙，2例死亡。選取同期門(mén)診體檢的年齡、性別相匹配的健康兒童90例作為對(duì)照組，男性59例，女性31例，年齡4個(gè)月～13歲，平均(5.27±1.55)歲。所有研究對(duì)象均排除合并其他免疫系統(tǒng)疾病；入組前30 d有免疫抑制劑、皮質(zhì)激素使用史；嚴(yán)重肝腎功能障礙；近期有輸血史。

1.2 治療方法及預(yù)后評(píng)估 EVE患兒入院后給予抗病毒治療、20%甘露醇降顱內(nèi)壓治療，根據(jù)患兒癥狀給予對(duì)癥治療，高熱者用物理降溫、藥物降溫，驚厥用安定、苯巴比妥肌注；病情嚴(yán)重者給予甲基強(qiáng)的松龍(輝瑞制藥有限公司，MG0629200509)沖擊治療、靜脈注射用丙種球蛋白(成都蓉生藥業(yè)有限責(zé)任公司，S19993042)等治療。以出院時(shí)未出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)功能異常為預(yù)后良好，出院時(shí)遺留神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙或死亡為預(yù)后不良。

1.3 標(biāo)本采集及檢驗(yàn) 標(biāo)本采集均經(jīng)患兒家屬知情同意。EVE組患兒于入院第2天采集空腹靜脈血5 mL，對(duì)照組患兒于體檢當(dāng)天采集空腹靜脈血5 mL，采用美國(guó)BD公司FACS Calibur流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群(CD4+細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞及CD4+/CD8+比值)和NK細(xì)胞水平，試劑盒購(gòu)自美國(guó)BD公司；采用放射免疫分析法檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞因子IL-2、IL-6、TNF-α水平，試劑盒均購(gòu)自上海信帆生物科技有限公司。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1 預(yù)后情況分析 136例EVE患兒，122例(89.71%)預(yù)后良好，患兒頭痛、發(fā)熱、嘔吐等臨床癥狀完全或基本消失，肌力與肢體功能基本恢復(fù)正常，未遺留后遺癥。14例(10.29%)預(yù)后不良，患兒頭痛、發(fā)熱、嘔吐等臨床癥狀無(wú)明顯改善，肌力與肢體功能無(wú)好轉(zhuǎn)或加重，有明顯后遺癥。

2.2 EVE組和對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞水平比較 結(jié)果(表1)表明：EVE組CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+比值及NK細(xì)胞水平低于對(duì)照組，CD8+T細(xì)胞水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

指標(biāo)EVE組(N=136)對(duì)照組(N=90)T淋巴細(xì)胞(%) CD4+34.61±4.18**41.03±5.37 CD8+25.16±2.66**20.09±2.03CD4+/CD8+1.29±0.82**2.13±1.06NK細(xì)胞(%)12.71±3.18**15.97±4.96細(xì)胞因子ρB/(pg·mL-1) IL-23.31±1.06**4.23±1.26 IL-642.16±5.31**13.29±3.18 TNF-α3.01±1.52**2.18±1.33

**P<0.01與對(duì)照組相比

2.3 EVE組和對(duì)照組患兒細(xì)胞因子水平比較 結(jié)果(表1)表明：EVE組IL-2水平低于對(duì)照組，IL-6、TNF-α水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.4 不同預(yù)后EVE患兒T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞比較 結(jié)果(表2)表明：預(yù)后良好組CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+比值及NK細(xì)胞水平高于預(yù)后不良組，CD8+T細(xì)胞水平低于預(yù)后不良組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.5 不同預(yù)后EVE患兒炎性細(xì)胞因子水平比較 結(jié)果(表2)表明：預(yù)后良好組IL-2水平高于預(yù)后不良組(P<0.05)，IL-6、TNF-α水平低于預(yù)后不良組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

指標(biāo)預(yù)后良好(N=122)預(yù)后不良(N=14)t值P值T淋巴細(xì)胞(%) CD4+36.56±1.0532.01±0.9415.507<0.01 CD8+23.15±2.7128.06±2.346.502<0.01CD4+/CD8+1.61±0.891.12±0.671.9980.048NK細(xì)胞(%)13.05±3.5110.58±2.342.5640.012細(xì)胞因子ρB/(pg·mL-1) IL-23.59±1.092.94±1.022.1260.035 IL-640.96±4.6450.64±6.337.102<0.01 TNF-α2.81±1.253.62±1.532.2430.027

3 討 論

EVE全年均可發(fā)病，以腦膜腦炎為主要癥候群，發(fā)病期不僅會(huì)侵犯腦部，還常累及心臟、肺、腎等臟器官。EVE可通過(guò)唾液、糞便污染物品的密切接觸傳播，兒童為疾病高發(fā)人群，但其臨床表現(xiàn)多樣而復(fù)雜，缺乏特異性，常有誤診、漏診發(fā)生[6]。目前，EVE的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。隨著對(duì)免疫機(jī)制的深入研究，多項(xiàng)報(bào)道[7-8]指出，免疫功能紊亂與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)生密切相關(guān)。有研究[9]認(rèn)為，機(jī)體免疫力低下時(shí)，腸道病毒進(jìn)入機(jī)體后在淋巴系統(tǒng)內(nèi)繁殖，繼而入侵中樞神經(jīng)系統(tǒng)，導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)性腦損傷。

外周血淋巴細(xì)胞亞群主要包括T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞，三者共同維持機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)。其中，T淋巴細(xì)胞在調(diào)節(jié)人體免疫系統(tǒng)中起重要作用，可分泌多種細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)并引起免疫系統(tǒng)中巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞活化等一系列免疫反應(yīng)。T淋巴細(xì)胞按照表面分化群抗原分為CD4+、CD8+兩大亞群，其中CD4+T細(xì)胞作為輔助性T淋巴細(xì)胞，可促進(jìn)B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞功能，分泌IL-2、IL-4、IL-10等免疫抑制因子；CD8+T細(xì)胞作為抑制性T細(xì)胞，具有靶細(xì)胞殺傷抑制功能，CD4+/CD8+比值是反映機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo)，CD4+/CD8+比值下降越低，提示免疫功能低下。NK細(xì)胞主要分布于外周淋巴器官和血液循環(huán)系統(tǒng)，具有抗腫瘤、抗病毒感染、免疫調(diào)節(jié)等生物學(xué)活性。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照組相比，EVE組患兒存在免疫功能紊亂，且預(yù)后不良組尤為明顯(P<0.05)，說(shuō)明EVE存在廣泛的T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞數(shù)量及功能的降低。Pillai等[10]指出，病毒性腦炎患兒多伴隨免疫功能低下，其中，CD4+/CD8+比值與患兒臨床結(jié)局有關(guān)，本研究結(jié)果與其一致。

免疫細(xì)胞因子具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、免疫應(yīng)答和參與免疫反應(yīng)等多種生物學(xué)功能[11]。IL-2由被抗原激活的CD4+、CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生，生物學(xué)功能包括促進(jìn)T細(xì)胞的增殖和分化、增強(qiáng)細(xì)胞毒性T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞活性的作用。IL-6是由多種淋巴細(xì)胞和非淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，具有廣泛的生物學(xué)活性，在機(jī)體炎性反應(yīng)、抗感染、自身免疫方面均起重要作用。關(guān)于細(xì)胞因子變化方面，EVE組IL-2水平低于對(duì)照組，IL-6、TNF-α水平高于對(duì)照組(P<0.05)，預(yù)后不良組變化尤為明顯(P<0.05)，說(shuō)明EVE患兒伴隨機(jī)體炎癥程度加重。有研究[12]報(bào)道，與正常兒童相比，腸道病毒71型感染引起的腦炎、手足口病等神經(jīng)系統(tǒng)疾病患兒，腦脊液和血清中IL-6、TNF-α水平顯著上升，與本研究結(jié)果一致。

綜上所述，與正常對(duì)照組相比，EVE患兒外周血CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+比值、NK細(xì)胞降低，CD8+T細(xì)胞、IL-6、TNF-α水平升高，且可能與患兒預(yù)后有關(guān)。