云南地區(qū)T-SPOT.TB檢測技術(shù)斑點計數(shù)與涂陽肺結(jié)核病人排菌量的相關(guān)性研究

李才信 王霖 劉子龍 李曉琴 孟文卿

[摘要] 目的 探討云南地區(qū)T-SPOT.TB檢測技術(shù)斑點計數(shù)與涂陽肺結(jié)核病人排菌量的相關(guān)性。方法 方便選取云南地區(qū)300例T-SPOT.TB檢測技術(shù)斑點計數(shù)與涂陽肺結(jié)核病人，進行排菌量的相關(guān)性分析，探討血清T-spot檢測技術(shù)在肺結(jié)核診斷中的特異性和敏感性。結(jié)果 活動性肺結(jié)核組觀察到T細胞斑點為67.0（32.8，133.5），相比老年肺結(jié)核組5.0（1.0，18.5）。 結(jié)核組中位T細胞斑點為85.0（37.0，140.0），相比肺外結(jié)核組40.4（8.0，106.0））（P=0.001）要高。試者工作特性曲線（ROC曲線）分析顯示，在活動性結(jié)核組中T-SPOT.TB的ROC曲線下面積（0.887）大于抗原A（0.874）和抗原B（0.868），以T細胞斑點數(shù)25.5為最佳邊界值，活動性結(jié)核分枝桿菌感染與潛伏性結(jié)核分枝桿菌感染（簡稱潛伏性結(jié)核感染）的鑒別，敏感性和特異性分別為79.9%和79.4%。 結(jié)論 ①T細胞斑點數(shù)可反映體內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌負荷;②T-SPOT.TB在肺結(jié)核的診斷中具有較高的靈敏度和特異度。

[關(guān)鍵詞] 云南地區(qū);T-SPOT.TB檢測技術(shù);斑點計數(shù);肺結(jié)核病人;排菌量;相關(guān)性

[中圖分類號] R521 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1674-0742（2019）06（c）-0186-03

[Abstract] Objective To investigate the correlation between the spot count of T-SPOT.TB detection technology in Yunnan and the bacterial count of smear-positive pulmonary tuberculosis patients. Methods To convenient select the correlation between the T-SPOT.TB detection technique and the bacterial count of smear-positive pulmonary tuberculosis in 300 cases in Yunnan， and to explore the specificity and sensitivity of serum T-spot detection technology in the diagnosis of tuberculosis. Results T cell spots were observed in the active tuberculosis group at 67.0 （32.8， 133.5）， which was much higher than in the elderly tuberculosis group 5.0（1.0，18.5）（P=0.000）. The median T cell spot in the tuberculosis group was 85.0 （37.0， 140.0）， which was higher than the extrapulmonary tuberculosis group 40.4 （8.0， 106.0） （P=0.001）. The tester's operating characteristic curve （ROC curve） analysis showed that the area under the ROC curve of T-SPOT.TB in the active tuberculosis group （0.887） was larger than that of antigen A （0.874） and antigen B （0.868）， and the number of T cells was 25.5. For the optimal boundary value， the identification， sensitivity and specificity of active M. tuberculosis infection and latent M. tuberculosis infection （abbreviated as latent tuberculosis infection） were 79.9% and 79.4%， respectively. Conclusion 1.The number of T cell spots can reflect the Mycobacterium tuberculosis load in vivo; 2.T-SPOT.TB has higher sensitivity and specificity in the diagnosis of tuberculosis.

[Key words] Yunnan region; T-SPOT.TB detection technology; Spot count; Tuberculosis patients; Bacterial count; Correlation

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌（MycobacteriumTuberculosis， MTB）感染的一種病，流行范圍廣、危害程度高、造成死亡人數(shù)最多的一類慢性傳染病。全世界每年約有900萬新增結(jié)核病病人，死亡人數(shù)約150萬。中國是全球結(jié)核病發(fā)病率最高的國家之一，排名世界第二。2010年，第五次全國結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查，活動性肺結(jié)核499萬例，涂片陽性肺結(jié)核72萬例，細菌性肺結(jié)核129萬例。因此，結(jié)核病的早期診斷和治療是非常關(guān)鍵的。結(jié)核病診斷方法涂片顯微鏡具有較低的陽性率，分離培養(yǎng)法具有培養(yǎng)時間長的缺點，這2種方法是目前最準確、可靠的結(jié)核病診斷方法，其是通過從病人的分泌物、血液、體液和活檢組織中檢測或分離結(jié)核分枝桿菌來完成的。結(jié)核分枝桿菌感染的免疫檢測結(jié)核菌素試驗假陽性和假陰性高，結(jié)核抗體試驗特異性和敏感性不高。

結(jié)核分枝桿菌能侵入人體的各組織和器官，同時對致病菌造成免疫損傷。免疫類型主要是T細胞介導(dǎo)的細胞免疫。人感染結(jié)核桿菌時，巨噬細胞的抗原呈遞功能致T淋巴細胞敏化，產(chǎn)生INF-γ等淋巴因子，殺死結(jié)核桿菌。再感染時，記憶T淋巴被激活，分泌INF-γ，并細胞免疫。基于此發(fā)展起來的T細胞INF-γ釋放試驗是目前臨床上檢測結(jié)核病的血清學(xué)優(yōu)選方法：通過檢測免疫斑點的數(shù)量，可快速判斷結(jié)核分枝桿菌的感染。T-spot.TB在輔助診斷結(jié)核感染中其診斷敏感性和特異性可高達96.60%和84.70%。該法有助于預(yù)防性抗結(jié)核治療，斑點越多則發(fā)生活動性結(jié)核的可能性越大。報道如下。

1 ?對象與方法

1.1 ?研究對象

方便選取該院收治的300例疑似肺結(jié)核成人病人進行T-SPOT.TB結(jié)核病檢查。根據(jù)診斷結(jié)果，將病人分為活動性肺結(jié)核組、老年性肺結(jié)核組和非肺結(jié)核組。

1.2 ?納入和排除標準

入選標準：①18歲以上;②肺結(jié)核中毒癥狀：咳嗽、咯血、發(fā)熱、盜汗等;③具有典型影像學(xué)表現(xiàn)：如空洞、樹芽征象、結(jié)核結(jié)節(jié)、結(jié)核斑、胸膜等;④曾接觸結(jié)核病人，治療后好轉(zhuǎn)。

排除標準：①無明確診斷;②沒病因或組織病理學(xué)依據(jù);③T-SPOT.TB或PPD結(jié)果不明確;④近3 d服抗結(jié)核藥;①長期服用免疫抑制劑或心、腦、肺、肝腎功能障礙。

1.3 ?診斷和分組標準

診斷參照《中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)結(jié)核病診斷標準》（ws288-2008）。①TB：病因或組織病理學(xué)明確診斷;改善了抗結(jié)核癥狀，改善了肺部CT成像。②陳舊性結(jié)核：病人有陳舊性肺結(jié)核病史，影像表現(xiàn)異常，無中毒癥狀，細菌學(xué)（痰涂片）檢查陰性。③非結(jié)核病者：無密切接觸結(jié)核病史;診斷為其他疾病，結(jié)核組織病理學(xué)陰性。

1.4 ?T-SPOT.TB結(jié)核病檢測及結(jié)果

TB檢測5 mL外周靜脈血。結(jié)果： ①斑點計數(shù)，空白對照孔的斑點<10個，陽性對照孔的斑點>20個。實驗可行。②T-SPOT.TB陽性標準：空白對照孔數(shù)為0～5 （抗原A或B孔數(shù)）-（空白對照孔數(shù)） 6以上時為陽性。空白對照孔數(shù)6～10個，（抗原A或B孔數(shù)）2以上（空白對照孔數(shù)）;結(jié)果陽性。③T-SPOT.TB陰性標準：質(zhì)控陽性結(jié)果良好（20個斑點以上），但抗原A或B斑點不符合陽性。計算T細胞抗原A、B與空白對照孔差，得到最大值。

1.5 ?結(jié)核菌素皮膚試驗（TST）

結(jié)核感染意味著人體已經(jīng)感染了結(jié)核病，但體內(nèi)的細菌受到人體強烈免疫力的抑制，細菌停止繁殖或處于“休眠”狀態(tài)，因此感染者本身沒有臨床癥狀結(jié)核病，但這些受感染的人通過細胞介導(dǎo)的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生對結(jié)核病的特異性免疫反應(yīng)，這通常導(dǎo)致1～2個月的結(jié)核菌素（PPD）皮膚試驗陽性。此時，胸部X線片在肺部未發(fā)現(xiàn)活動性肺結(jié)核，在細菌學(xué)檢查中未發(fā)現(xiàn)結(jié)核病。結(jié)核病病人不會將疾病傳染給他人，但一旦這些人的抵抗力（免疫力）下降，結(jié)核病仍可能發(fā)生。肺結(jié)核病人有明顯結(jié)核病癥狀，如咳嗽和咳嗽兩周以上，發(fā)熱，體重減輕等，胸部X線片發(fā)現(xiàn)肺部活動性肺結(jié)核，痰細菌學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核細菌或其他病理檢查已經(jīng)有結(jié)核病灶，他們很可能將疾病傳染給他人，特別是有抑菌（痰）的結(jié)核病病人。

1.6 ?統(tǒng)計方法

采用SPSS 10.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 ?結(jié)果

2.1 ?各組病人年齡、性別分布情況的比較

在這項研究中，298（29%）活動性結(jié)核病，155名男性和143名女性，中位年齡為62.0歲。結(jié)核病330例（33%），男性180例，女性150例，中位年齡61.5歲。非結(jié)核病病人384例（38%），男性200例，女性184例，中位年齡59.0歲。方差分析和Kruskal-Wallis檢驗后，3組間性別和年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義（F= 0.001，P=0.971;χ2= 0.055，P=0.973），表明3組病人的性別和年齡分布不影響研究結(jié)果。

2.2 ?抗原A，抗原B和T-SPOT.TB的T細胞斑點數(shù)

各組的分布活動性TB組T細胞斑點的中位數(shù)為67.0（32.8，133.5），顯著高于舊TB組的5.0（1.0，18.5）（P =0.000）;中位數(shù)為85.0（37.0，140.0），顯著高于肺外結(jié)核組的40.4（8.0，106.0）（P=0.001）;組間重疊的T細胞斑點數(shù)。

3 ?討論

肺結(jié)核病人在治療中易由于細菌耐藥性、服藥自主性缺乏等因素影響，導(dǎo)致其轉(zhuǎn)化為復(fù)治涂陽肺結(jié)核，加劇病人病情，增加治療難度.臨床中對于復(fù)治涂陽肺結(jié)核病人的治療多采用多類藥物聯(lián)合治療法，但易隨著治療時間的延長，增加細菌耐藥性，影響治療效果，且大部分病人需不斷增加服藥劑量以確保療效，易引發(fā)各類毒副反應(yīng)。

經(jīng)研究所得：相較對照組，研究組治療后肺部病灶及空洞治療效果具有顯著性優(yōu)勢（P>0.05）;且研究組病人治療后毒副反應(yīng)率明顯低于對照組（P<0.05）。分析原因：卷曲霉素進入人體后可與核糖桿菌進行結(jié)合，可對結(jié)核病桿菌的形成起到有效抑制、阻斷作用，控制其病情的發(fā)展;左氧氟沙星廣譜抗菌藥的應(yīng)用可對結(jié)核桿菌的復(fù)治、轉(zhuǎn)錄作用起到較好的阻斷作用，實現(xiàn)對細菌活性及數(shù)量的有效抑制，從而起到治療的作用。兩類藥物的聯(lián)合應(yīng)用可配合常規(guī)治療有效提升治療效果，減少細菌數(shù)量，并通過藥物使用劑量的維持或減少，降低細菌耐藥性，進一步穩(wěn)固療效。綜上所述，在臨床中予以涂陽肺結(jié)核復(fù)治病人卷曲霉素、左氧氟沙星聯(lián)合治療，可有效促進病人肺部病變改善緩解，且安全性較高，值得在臨床治療中應(yīng)用推廣。該研究中T-SPOT.TB在活動性肺結(jié)核中的陰性預(yù)測值和陽性預(yù)測值分別為87.375%和68.241%，表明當(dāng)T-SPOT.TB值為陰性時，對排除具有重要價值。

目前，臨床上有大量肺外結(jié)核病人。由于起病隱匿，臨床癥狀不典型，缺乏細菌學(xué)基礎(chǔ)導(dǎo)致誤診，漏診或無法確診。結(jié)果表明，胸水T-SPOT.TB的敏感性高于外周血，胸水陽性細胞計數(shù)為外周血陽性細胞數(shù)的8到10倍。為了驗證上述結(jié)論，將活動性TB組分為肺結(jié)核和肺外TB兩個亞組。結(jié)果顯示，肺外TB組（78.161%）小于肺TB組（91.000%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。因此，該研究證實肺結(jié)核組T-SPOT.TB陽性率高于肺外TB組。

綜上所述，T細胞斑點數(shù)可反映體內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌負荷。T-SPOT.TB在肺結(jié)核的診斷中具有較高的靈敏度和特異度。

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（收稿日期：2019-03-21）