豬源沙門氏桿菌分離鑒定及體外抑菌試驗

侯美東

摘要：該文主要分析了中小規(guī)模養(yǎng)殖場保育豬出現腹瀉病的臨床癥狀，并結合病理學檢查采集相關病料，對致病菌進行分離培養(yǎng)，并將分離培養(yǎng)的致病菌進行進一步藥品試驗，確定高敏抗生素。細菌分離鑒定發(fā)現，從病死豬的肝臟腸系膜淋巴結中分離得到的致病菌形態(tài)一致，經過沙門氏菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)，確定分離得到的致病菌為沙門氏菌。將分離得到的致病菌進行紙片藥品試驗，發(fā)現該種致病菌對頭孢曲松鈉、氟苯尼考、氧氟沙星、卡那霉素、丁胺卡那霉素高敏。結合分離鑒定和體外抑菌試驗，要指導養(yǎng)殖戶在發(fā)生同樣疾病后，選擇高敏抗生素進行對癥治療，只有這樣才能提高治療效果，縮短發(fā)病周期，降低養(yǎng)殖場的經濟損失。

關鍵詞：豬源沙門氏菌;分離鑒定;體外抑菌試驗

中圖分類號：S858.28

文獻標識碼：B

doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.24.013

0引言

豬源沙門氏菌病又被稱為副傷寒，是由致病性沙門氏菌感染引起的一種消化道疾病，臨床上主要表現為急性敗血癥和壞死性腸炎。慢性病例還會表現為肺炎和大腸壞死性炎癥。豬沙門氏菌病造成的危害十分嚴重，會給生豬養(yǎng)殖產業(yè)造成巨大經濟損失。近年很多養(yǎng)殖戶在進行生豬養(yǎng)殖中，存在不合理的用藥行為，養(yǎng)殖場一旦出現發(fā)病情況，隨意使用抗生素進行治療，使很多致病原的耐藥性極大增強，多種藥物的防控效果逐漸下降。為進一步提高疾.病的診斷效率和治療效果，在明確具體在致病原的基礎上，一定要進行嚴格的藥品試驗，篩選出高敏抗生素，指導養(yǎng)殖戶科學用藥，合理用藥。只有這樣才能提高防控效果，降低發(fā)病率。

1材料與方法

1.1發(fā)病情況

2018年8月13日，某中小規(guī)模養(yǎng)殖場養(yǎng)殖的40頭保育豬突然出現發(fā)病情況，大部分患病豬主要表現為嘔吐腹瀉，體溫沒有表現出明顯的變化。通過對養(yǎng)殖場的免疫程序進一步檢查，養(yǎng)殖戶對保育豬免疫接種豬瘟、豬尾狂犬疫苗。發(fā)病后養(yǎng)殖戶交患病豬單獨隔離，但沒有及時將病情上報，自行選擇抗生素進行治療，沒有取得明顯的治療效果，發(fā)病2周后，養(yǎng)殖場死亡豬的數量進一步提升。結合養(yǎng)殖場患病豬的臨床表現，對病死豬進行妥善的病理學解剖，采集病料進行嚴格的試驗室診斷，分離得到致病原，并進行體外抑菌試驗，結合抑菌試驗篩選出高敏抗生素，很好地控制病情，避免病情進一步擴散蔓延，造成更為嚴重的損失。

1.2材料

待檢材料主要是在無菌條件下采集病死豬的病變臟器器官。在細菌分離鑒定和體外抑菌試驗中，運用到的材料主要為巧克力瓊脂培養(yǎng)基、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基及用于藥敏試驗檢測的各種材料。

1.3細菌分離鑒定和藥敏試驗

首先，細菌分離鑒定。將養(yǎng)殖場的病死豬解剖后，觀察各個臟器器官的病理學變化和腸道的病變情況。然后在無菌條件下采集病死豬的典型病變臟器組織，并在無菌條件下將病料進行充分的粉碎，用接種環(huán)采集病料后劃線接種到巧克力瓊脂培養(yǎng)基上，然后將巧克力瓊脂培養(yǎng)基放置在37°C的恒溫培養(yǎng)箱內，持續(xù)培養(yǎng)48h，將培養(yǎng)基取出觀察致病菌的形態(tài)，小心調取分離得到的致病菌，選擇使用革蘭氏染色劑進行充分染色，放置在顯微鏡下觀察致病菌的形態(tài)。將巧克力瓊脂培養(yǎng)基場分離得到的致病菌轉移到沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上，放置在37°C的恒溫培養(yǎng)箱內，持續(xù)培養(yǎng)24h觀察結果[1];其次，藥敏試驗。從沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上挑取紫色的致病菌菌落，將其轉移到血清肉湯培養(yǎng)劑當中，37°C震蕩培養(yǎng)24h，然后選擇使用紙片擴散法進行常見的抗生素藥敏檢測。

2結果

2.1病理解剖

將養(yǎng)殖場的病死豬解剖后，觀察各個臟器器官和腸道組織的病變情況，發(fā)現大腸粘膜顯著腫脹，聚集成縱向的褶皺狀[2]，嚴重的呈現紫紅色，腸道切面呈現油脂狀或者腦髓狀。脾臟顯著腫大，外觀呈現淡紫色或淡藍色，切面呈現紅色，肝臟腫脹，明顯淋巴結腫，大出血，肺臟充血明顯。

2.2細菌分離鑒定

將病死豬的病變組織接觸到巧克力瓊脂培養(yǎng)基上，持續(xù)培養(yǎng)48h后可以發(fā)現有菌落生長，并且各個臟器器官病料中分離得到的致病菌形態(tài)一致。致病菌呈現無色透明，濕潤，光滑圓形。小心挑取分離得到的致病菌常規(guī)涂片染色鏡檢，可以發(fā)現革蘭氏陰性染色的桿菌存在。從巧克力瓊脂培養(yǎng)基上挑取致病菌菌落轉移接種到沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上，放置在37°C的恒溫培養(yǎng)箱內，持續(xù)培養(yǎng)24h，可以發(fā)現菌落生長出特有的紫色[3]，結合上述特征性的變化，可以判定致病原為沙門氏菌。

2.3藥敏試驗

選取純化分離得到的治病菌進行常規(guī)抗生素敏感性檢測，檢測法為紙片擴散檢測法。檢測共選擇了9種常見的抗生素，主要包括頭孢曲松鈉、氟苯尼考、恩諾沙星、氨芐西林、氧氟沙星、多西環(huán)素、慶大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素。藥品試驗結果可以發(fā)現該種致病菌對頭孢曲松鈉、氟苯尼考、氧氟沙星、卡那霉素、丁胺卡那霉素高敏，抑菌圈直徑分別為22、23、21、20、19mm。

3討論

豬沙門氏菌病主要危害1～4月齡的仔豬，6月齡以上的仔豬感染該種疾病后所表現的臨床癥狀較輕，對該種致病菌的抵抗能力相對較強。結合前人的研究結果可以發(fā)現豬霍亂沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、豬傷寒沙門氏菌、德爾卑沙門氏菌、腸炎沙門氏菌等血清是引起該種疾病的主要致病原。研究采集的病料中分離形態(tài)一致的致病菌，并通過沙門氏菌顯色培養(yǎng)基鑒定致病原為沙門氏菌。由此可以確定養(yǎng)殖場是由沙門氏菌感染引起的傳染性疾病。確診為沙門氏菌病后，進行嚴格藥品試驗，最終發(fā)現該種致病菌對頭孢曲松鈉、氟苯尼考、氧氟沙星、卡那霉素、丁胺卡那霉素高敏，抑菌圈直徑分別為22、23、21、20、19mm。同時對多種抗生素的抵抗能力較強，抑菌效果較差，很多抗生素不會表現出任何的抑菌效果。由此可以看出，近年隨著生豬養(yǎng)殖產業(yè)不斷向前發(fā)展，沙門氏菌的耐藥性不斷增強。由于基層地區(qū)的動物試驗室檢測條件有限，沒有明確是哪種沙門氏菌，需要進一步完善。

4結束語

沙門氏菌是自然界中廣泛存在的一種條件性致病菌，隨著生豬養(yǎng)殖產業(yè)不斷向前發(fā)展，沙門氏菌對豬養(yǎng)殖業(yè)造成的危害日趨嚴重。并且沙門氏菌是極容易產生耐藥性的一種致病菌，加上生豬養(yǎng)殖中抗生素添加劑的胡亂使用，導致致病原的耐藥性顯著增強，耐藥譜嚴重擴大，加大對該種疾病源預防和治療的難度。養(yǎng)殖場的病情確診后，引導養(yǎng)殖戶選擇高敏抗生素進行對癥治療。選擇使用98%的左旋氧氟沙星，每千克飼料使用0.1g，連續(xù)使用1周。同時肌肉注射卡納霉素注射液，使用劑量為0.15mL/kg體重，2次/d，連續(xù)使用5d為1個療程。通過指導養(yǎng)殖戶采用高敏抗生素進行對癥治療，很好地控制病情，降低發(fā)病率和死亡率，養(yǎng)殖場患病豬在短時間內恢復健康。在生豬養(yǎng)殖中，應引導養(yǎng)殖戶充分做好該種疾病的預防工作，認識疾病的傳播流行和養(yǎng)殖場的飼養(yǎng)管理不當，衛(wèi)生條件有很大關系。在疾病防控中，應始終堅持預防為主的原則，改善整體的飼養(yǎng)管理條件，及時清理豬舍中的各種糞便污染物，始終堅持自繁自育、全進全出的養(yǎng)殖模式，減少疾病傳播流行途徑。

參考文獻

[1]王楊，豬沙門氏菌病的流行病學、鑒別診斷與防控措施[J].現代畜牧科技，2019（5）：94-95.

?[2]劉小蘭，邊彥超，康紹珠，等，雞唾液乳酸桿菌的分離鑒定及體外抑菌試驗[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2018（23）：169-173.

[3]李娟.豬沙門氏菌病的流行病學、臨床癥狀、診斷及其防控[J].現代畜牧科技，2018（12）：53.