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    革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法及PCR法在陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用比較

    2019-09-10 16:25:45吳斌楊巧榮
    甘肅科技縱橫 2019年5期

    吳斌 楊巧榮

    【摘要】目的:探討在陰道細(xì)菌檢驗(yàn)過(guò)程中分別采用革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法及PCR法所能收獲的效果。方法:本次研究對(duì)象為2017年1月~2019年1月期間在本院就診的97例陰道疾病患者,對(duì)其陰道分泌物標(biāo)本均完成革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法及PCR法三種檢驗(yàn),對(duì)比檢出率。結(jié)果:革蘭染色法組總檢出率明顯低于細(xì)菌培養(yǎng)法組、PCR法組,細(xì)菌培養(yǎng)法組總檢出率與PCR法組對(duì)比結(jié)果顯示,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:陰道細(xì)菌檢驗(yàn)過(guò)程中,細(xì)菌培養(yǎng)法及PCR法均能獲得滿意且較高的準(zhǔn)確度,在疾病診斷、指導(dǎo)治療方面意義深遠(yuǎn),但考慮時(shí)效性、普遍性要求,則PCR法更為適宜,耗時(shí)短且適宜基層醫(yī)院普遍應(yīng)用。

    【關(guān)鍵詞】革蘭染色法;細(xì)菌培養(yǎng)法;PCR法;陰道細(xì)菌檢驗(yàn)

    個(gè)人簡(jiǎn)歷:吳斌(1984.5-),男,漢族,甘肅敦煌人,敦煌市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科工作,主管檢驗(yàn)技師,本科學(xué)歷,主要從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作。

    陰道細(xì)菌感染是引起陰道炎等在內(nèi)多種婦科疾病最為常見(jiàn)的影響因素,陰道內(nèi)環(huán)境遭到破壞,酸堿失衡情況突出,對(duì)其生活困擾十分明顯,對(duì)其健康危害巨大,隨著陰道細(xì)菌感染不斷加劇,甚至?xí)M(jìn)展成盆腔炎、導(dǎo)致不孕等,臨床認(rèn)為進(jìn)行必要的陰道細(xì)菌檢查,盡早發(fā)現(xiàn)病變跡象可對(duì)機(jī)體發(fā)生細(xì)菌性陰道疾病起到預(yù)防作用[1]?;诖耍狙芯吭陉幍兰?xì)菌檢驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)用革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法及PCR法等三種不同實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)方法,現(xiàn)報(bào)告如下。

    1臨床資料與方法

    1.1臨床資料

    97例陰道疾病患者均于2017年1月~2019年1月期間在本院就診,經(jīng)證實(shí)均存在不同程度的陰道疾病,伴隨陰道存在明顯瘙癢感、陰道分泌物呈現(xiàn)明顯異常狀態(tài)等癥狀。年齡25~45歲,平均年齡(36.72±2.25)歲。97例陰道疾病患者均符合:日常月經(jīng)正常;納入本次研究前15d并未使用抗生素;納入本次研究前15d并未進(jìn)行陰道用藥;3周內(nèi)未進(jìn)行性生活;均知情本次研究,且自愿參與。排除婦科器質(zhì)性疾病者;心、腎等重要臟器疾病者;妊娠期、月經(jīng)期、哺乳期女性患者。

    1.2方法

    采集全部研究對(duì)象的陰道分泌物,對(duì)其陰道分泌物標(biāo)本均完成革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法及PCR法三種檢驗(yàn)。

    ①陰道分泌物標(biāo)本采集。取截石位,在無(wú)菌陰道鏡的輔助作用下促使患者宮頸部位能夠有效顯露,在此狀態(tài)下,取無(wú)菌棉簽蘸取陰道分泌物,陰道分泌物標(biāo)本取好之后應(yīng)予以良好保存,臨床建議將其放置于預(yù)先準(zhǔn)備好的無(wú)菌試管中,對(duì)無(wú)菌試管要求提前存放適宜生理鹽水。

    ②革蘭染色法。用紗布事先完成所用載玻片的擦拭清潔工作,完成后進(jìn)行浸泡步驟,浸泡要求于乙醇中進(jìn)行,浸泡步驟完成后,正確手法將其取出、晾干,之后應(yīng)將陰道分泌物標(biāo)本涂抹于載玻片上,要求涂抹以均勻?yàn)橐?,涂抹步驟完成后,取蓋玻片加以固定,固定完成后進(jìn)行正確革蘭染色,借助醫(yī)用顯微鏡作進(jìn)一步的觀察、分析工作。

    ③細(xì)菌培養(yǎng)法。取陰道分泌物標(biāo)本,在確保無(wú)菌條件下開展檢驗(yàn)工作,首先利用無(wú)菌接種環(huán)開展接種,于細(xì)菌分離專用培養(yǎng)基上完成接種,其次將其放置于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi),此步驟為的是完成孵育,需要注意的是,培養(yǎng)箱溫度應(yīng)控制在35℃,在歷時(shí)48h后觀察培養(yǎng)物,最后選擇滿足生化檢驗(yàn)要求之菌落,具體要求有三:一是半透明狀,二是灰色光滑,三是水滴狀。

    ④PCR法。預(yù)先準(zhǔn)備好離心機(jī),用其完成陰道分泌物離心工作,離心要求有二:一是12000r/min轉(zhuǎn)速,二是10min離心時(shí)間;之后取上層清液,添加適宜劑量的堿性裂解液完成加熱工作,加熱要求有二:一是溫度98℃,二是加熱時(shí)間10min;接下來(lái)進(jìn)行再次離心,離心要求有二:一是12000r/min轉(zhuǎn)速,二是5min離心時(shí)間;取上層清液,按照相關(guān)要求將其制成臨床DNA模板,DNA模板制作完成后,如果添加有DNA模板,則其為陽(yáng)性組,如沒(méi)有添加則為陰性組,對(duì)比分析陽(yáng)性組與陰性組,完成PCR產(chǎn)物檢測(cè)與擴(kuò)增步驟,最后完成提取,則需要借助無(wú)菌去離子水進(jìn)行,在其表面用石蠟予以良好規(guī)范覆蓋,目的在于完成PCR反應(yīng)循環(huán),共計(jì)32環(huán)。

    1.3觀察指標(biāo)

    陰道細(xì)菌陽(yáng)性檢出率比較。

    1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    對(duì)本研究所得數(shù)據(jù)均采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS21.0進(jìn)行分析,計(jì)數(shù)資料采用百分?jǐn)?shù)表示,并行卡方檢驗(yàn),以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2結(jié)果 ?革蘭染色法組總檢出率明顯低于細(xì)菌培養(yǎng)法組、PCR法組(P<0.05),細(xì)菌培養(yǎng)法組總檢出率與PCR法組對(duì)比結(jié)果顯示,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表1。

    3討論

    陰道細(xì)菌感染引起的婦科疾病,多速度緩慢且無(wú)癥狀表現(xiàn),在感染初期多不能及時(shí)被發(fā)現(xiàn),隨著感染加劇,治療困難程度隨之增大,缺乏恰當(dāng)、有效的治療,則易進(jìn)展成盆腔炎、出現(xiàn)腹腔感染等一系列病癥,甚至造成生育能力喪失[2]。正常生理狀態(tài)下,在女性陰道部位會(huì)存在許多上皮細(xì)胞,與之并存的是革蘭陽(yáng)性球菌等,上述諸多物質(zhì)的存在有其合理性,但當(dāng)機(jī)體自身抵抗力下降或者機(jī)體因遭受其它環(huán)境因素的影響造成感染事件迅速蔓延,短時(shí)間內(nèi)打破陰道內(nèi)寄生菌群平衡之狀態(tài),其陰道功能受到影響,自凈能力明顯降低甚至出現(xiàn)消失跡象,隨之不利于系統(tǒng)穩(wěn)定性保持,在此過(guò)程中,益生菌易受到不利影響,開始出現(xiàn)大量死亡情況,進(jìn)而更為適宜致病菌生存、使其得以快速繁殖,陰道酸堿不平衡,紊亂情況尤為嚴(yán)重,隨之而來(lái)的是一系列臨床癥狀。由此可見(jiàn),對(duì)女性患者來(lái)說(shuō),其健康的陰道內(nèi)環(huán)境依賴于陰道菌群的變化,只有準(zhǔn)確、有效的了解復(fù)雜陰道菌群變化情況,方能為陰道內(nèi)環(huán)境之健康、穩(wěn)定狀態(tài)提供強(qiáng)力有效保證,所以檢測(cè)陰道細(xì)菌感染情況在恰當(dāng)科學(xué)治療細(xì)菌性陰道疾病中所起到的作用不容小覷[3]。

    細(xì)菌性陰道疾病臨床治療強(qiáng)調(diào)早期診斷,而陰道分泌物檢查所發(fā)揮的作用不容忽視,據(jù)此能夠更為清晰全面了解陰道菌群失調(diào)情況、感染情況等,故而其應(yīng)用范圍甚是廣泛,其檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性與細(xì)菌性陰道疾病的診斷、恰當(dāng)科學(xué)的治療、良好的預(yù)后之間的關(guān)系不言而喻。但此項(xiàng)輔助檢查因具體檢測(cè)方法具有多樣化之突出特點(diǎn),臨床迫切尋求一種兼具準(zhǔn)確度可靠、便捷易操作、時(shí)效性理想之多重特點(diǎn)的檢測(cè)方法,旨在通過(guò)此檢測(cè)手段獲得有利依據(jù)以制定恰當(dāng)適宜的治療方案,更為良好維護(hù)女性健康。其中革蘭染色法因操作簡(jiǎn)便故而在臨床上有著較為良好的認(rèn)可度,應(yīng)用范圍也比較廣,但其在檢驗(yàn)操作過(guò)程中易受諸多因素的影響,比如染色時(shí)間把握情況、觀察誤差程度等,這些因素的影響導(dǎo)致準(zhǔn)確度不甚理想,并不適宜陰道細(xì)菌感染的檢驗(yàn)[4]。細(xì)菌培養(yǎng)法與PCR法均能獲得滿意的準(zhǔn)確度,但考慮到細(xì)菌培養(yǎng)法在保證取得成效的同時(shí),執(zhí)行過(guò)于繁瑣,步驟繁多,其凸顯出過(guò)程復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)等諸多特征,使其無(wú)法普遍推廣,尤其是對(duì)于基層醫(yī)院來(lái)說(shuō)并不適宜,但PCR法與之不同,臨床研究證實(shí)其體現(xiàn)出“高特異性、強(qiáng)靈敏度、便捷快速”之優(yōu)勢(shì),其整個(gè)檢驗(yàn)過(guò)程耗時(shí)多控制在2~4h,用時(shí)較短,易被接受,更重要的是,其對(duì)檢驗(yàn)標(biāo)本的純度并未作特別要求,一方面融合DNA雜交特異性之優(yōu)點(diǎn),另一方面融合RCP敏感性性之優(yōu)點(diǎn),使得其測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確度甚佳[5]。

    本研究結(jié)果顯示,革蘭染色法組總檢出率明顯低于細(xì)菌培養(yǎng)法組、PCR法組,細(xì)菌培養(yǎng)法組總檢出率與PCR法組對(duì)比結(jié)果顯示,差異并不顯著。提示臨床在開展陰道細(xì)菌檢驗(yàn)過(guò)程中,細(xì)菌培養(yǎng)法及PCR法準(zhǔn)確性更令人滿意,若檢驗(yàn)更強(qiáng)調(diào)時(shí)效性、普遍性時(shí),PCR法更容易滿足需求。

    參考文獻(xiàn)

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    [2] 寧詠梅. 細(xì)菌培養(yǎng)法、PCR檢驗(yàn)法及革蘭染色法檢驗(yàn)陰道細(xì)菌的對(duì)比研究[J]. 醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床, 2016, 27(1):35-37.

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