GC-MS/MS法測定金牛眼藥、撥云散眼藥、特靈眼藥中麝香酮的含量

王曉蕾　袁浩　王常順　劉永利

摘 要：為了全面有效地評價眼藥的內(nèi)在質(zhì)量，針對眼藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中均未設(shè)置與人工麝香相關(guān)質(zhì)控指標(biāo)的現(xiàn)狀，研究了GC-MS/MS法測定金牛眼藥、撥云散眼藥、特靈眼藥中麝香酮含量的方法。采用P-5MS毛細(xì)管柱（30 m×025 mm×025 μm），分流進(jìn)樣，分流比為3∶1，進(jìn)樣量為1 μL，程序升溫，選擇電子轟擊源（EI源），多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）進(jìn)行測定，監(jiān)測離子對及電壓為m/z 23830>9810（CE6），m/z 20920>9520（CE 12），m/z 20920>10920（CE 9）。結(jié)果表明，麝香酮保留時間為1030 min，線性范圍為5318～1 3296 ng（r=0999 4），金牛眼藥、撥云散眼藥、特靈眼藥的加樣回收率（n=9）分別為952%，955%和951%，RSD值分別為15%，19%和12%。研究方法簡便準(zhǔn)確，重復(fù)性良好，可用于金牛眼藥、撥云散眼藥、特靈眼藥中人工麝香含量的控制，為全面評價眼藥質(zhì)量提供技術(shù)支撐。

關(guān)鍵詞：中藥化學(xué);麝香酮;含量測定;GC-MS/MS法;眼藥

中圖分類號：R282.5?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Abstract：In order to comprehensively and effectively evaluate the internal quality of eye drops， a GC-MS/MS method is established to determine the content of muscone in inniu eye medicine， Boyunsan eye medicine and Teling eye medicine in view of the current situation that no quality control index related to artificial musk is set in the quality standard of eye medicines. P-5MS capillary column （30 m×0.25 mm×0.25 μm） is used for split injection with a split ratio of 3∶1， an injection volume of 1 μL， and programmed temperature. The electron bombardment source （EI source） and the multiple reaction monitoring mode （MRM） are selected. The monitored ions and voltage are： m/z 238.30>9810 （CE6），m/z 209.20>95.20 （CE 12），m/z 209.20>109.20 （CE 9）. The results show when the retention time of muscone is 10.30 min，the linear range is of 53.18～1 329.6 ng（r=0.999 4）. The recovery rate （n=9） of inniu eye medicine， Boyunsan eye medicine and Teling eye medicine are 95.2%， 95.5% and 95.1%， with RSD of 1.5%， 1.9% and 1.2%， respectively. The method is simple， accurate and has good repeatability. It can be used to control the content of artificial musk in inniu eye medicine， Boyunsan eye medicine and Teling eye medicine， providing technical support for comprehensive evaluation of the quality of eye medicine.

Keywords：chemistry of Chinese material medica;muscone;determination of content;GC-MS/MS method;eye medicine

金牛眼藥、撥云散眼藥、特靈眼藥為傳統(tǒng)眼用制劑，三者的處方中含有大量爐甘石、冰片，且皆含有人工麝香。人工麝香為天然麝香的代用品，以麝香酮為主要成分，其主要藥理作用、物理性狀與天然麝香相似，具有開竅醒神、活血通經(jīng)、消腫止痛等功效[1-7]。金牛眼藥、撥云散眼藥、特靈眼藥的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)

準(zhǔn)中大多是關(guān)于測定處方量較大的冰片的方法[4]，均未設(shè)置與人工麝香相關(guān)的質(zhì)控指標(biāo)，故無法全面控制眼藥的內(nèi)在質(zhì)量。本研究采用GC-MS/MS法測定眼藥中麝香酮的含量，以期全面有效地評價藥品質(zhì)量。

1 主要儀器與試藥

1.1 儀器

GCMS-TQ8040氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，日本島津公司提供;P-5MS毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），美國Agilent公司提供;AE240，AE163電子天平，Mettler公司提供;超純水儀，美國Millipore公司提供。

1.2 試劑試藥

正己烷、乙酸乙酯，均為GC純，Merck公司提供;水，超純水，美國Millipore公司提供;其余試劑均為分析純。

對照品：麝香酮，中國食品藥品檢定研究院提供，批號為110719-201716，標(biāo)示含量為99.9%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同）。

1.3 樣品

金牛眼藥4批，批號為08160301，08160302，08160303，20141201;撥云散眼藥4批，批號為8160701，8160702，8160703，20140902;特靈眼藥3批，批號為8160701，8160702，8160703。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

取麝香酮對照品適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每1 mL含麝香酮500 ng的溶液，搖勻，即得對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取樣品0.1 g，加乙酸乙酯3 mL，渦旋15 min，離心（4 000 r/min）5 min。精密吸取上清液1 mL，置于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.3 色譜條件

進(jìn)樣口溫度為200 ℃，采用分流進(jìn)樣方式，分流比為3∶1，載氣為高純氦氣，恒線速度模式，流速為2 mL/min，進(jìn)樣量為1 μL。升溫程序如下：初始100 ℃（保持1 min），以12 ℃/min升至200 ℃（保持3 min），再以20 ℃/min升至280 ℃（保持8 min）。

2.4 質(zhì)譜參考條件

離子源：電子轟擊源（EI源）;采集方式：多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）;離子源溫度：280 ℃;質(zhì)譜傳輸接口溫度：250 ℃;碰撞氣體：氬氣;檢測器電壓：07 kV;溶劑延遲時間：20 min。監(jiān)測離子對及電壓：

[WTBX]m/z 23830>9810（CE6），m/z 20920>9520（CE 12），m/z 20920>10920（CE 9）。采集時間為1001～1061 min。在上述條件下測得的圖譜如圖1所示。

2.5 線性關(guān)系考察

精密量取麝香酮對照品溶液適量，加入乙酸乙酯，稀釋成系列對照品溶液，質(zhì)量濃度分別為53.18，106.37，265.92，531.84，1 329.6 ng/mL。按擬定的色譜條件進(jìn)行測定，以[WTBX]對照品進(jìn)樣量X為橫坐標(biāo)，峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，麝香酮量在53.18～1 329.6 ng/mL之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y= 461.4X- 7 422.1（r=0999 4）。

2.6 精密度試驗

取同一批樣品：金牛眼藥（批號為8160303）、撥云散眼藥（批號為8160701）、特靈眼藥（批號為8160701），分別精密稱取0.05，0.10，0.15 g各3份，按“2.2”項方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定。結(jié)果表明，金牛眼藥、撥云散眼藥、特靈眼藥中麝香酮的含量分別為0.072，0.077和0.071 mg/g，RSD值分別為2.2%，1.6%和2.2%，表明本方法的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，分別于0，1，3，7，20，24 h進(jìn)樣測定，記錄峰面積積分值。結(jié)果表明，金牛眼藥、撥云散眼藥、特靈眼藥的麝香酮峰面積積分值的RSD值分別為1.9%，1.5%和1.9%，表明供試品溶液室溫下放置，至少在24 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.8 準(zhǔn)確度試驗

取已知含量的金牛眼藥（批號為8160303）、撥云散眼藥（批號為8160701）、特靈眼藥（批號為8160701），各精密稱取9份，每份約0.05 g，每3份為1組，分別精密加入用乙酸乙酯配制的低、中、高3個濃度的麝香酮對照品溶液3 mL，按“2.2”項方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，計算回收率。結(jié)果表明，金牛眼藥、撥云散眼藥、特靈眼藥的回收率分別為95.20%，95.50%和95.10%，RSD值分別為15%，19%和1.2%，表明本方法的回收率良好。詳見表1—表3。

3 樣品測定

取金牛眼藥、撥云散眼藥、特靈眼藥樣品共11批，根據(jù)“2.2”項方法制備供試品溶液，

按“2.3”和“2.4”項條件進(jìn)行測定，用外標(biāo)法計算麝香酮含量，結(jié)果見表4。

4 討 論

4.1 方法選擇

文獻(xiàn)報道中關(guān)于麝香酮的檢測分析方法很多[8-14]，如高效液相衍生化法、薄層雙波長掃描法、氣相色譜法等[15-20]，但未見眼用散劑中關(guān)于人工麝香含量測定的報道。金牛眼藥、撥云散眼藥、特靈眼藥處方中均含有大量礦物類藥、冰片及多味貴細(xì)藥，其中人工麝香處方量很小，用氣相色譜法測定時消耗的樣品量較大，且色譜圖中雜質(zhì)較多，尤其是冰片量大，造成色譜圖中的干擾大。采用GC-MS/MS法，在很大程度上減少了樣品的消耗，通過優(yōu)化升溫程序，可保證麝香酮具有良好的峰形和響應(yīng)性。選用多反應(yīng)監(jiān)測模式進(jìn)行測定，通過設(shè)置監(jiān)測離子對及采集時間段，避免了雜質(zhì)的干擾，具有更高的選擇性。

4.2 提取方法考察

金牛眼藥、撥云散眼藥、特靈眼藥的處方中均含有大量礦物類藥、冰片及多味貴細(xì)藥，用氣相色譜法測定時消耗樣品量較大。在選擇提取溶劑時考察了極性較小的正己烷、乙酸乙酯兩種溶劑，兩種溶劑對樣品含量的測定基本沒有影響，但正己烷提取液易析出晶體，干擾測定結(jié)果且不易保存，故最終選用乙酸乙酯作為提取溶劑。采用超聲、渦旋兩種提取方式對3種眼藥中麝香酮含量的影響進(jìn)行了考察，結(jié)果表明兩種方式相差不大，故選擇提取方式為渦旋15 min。對渦旋10，15，20 min的考察結(jié)果表明，10 min時提取的含量略低，而15 min和20 min時提取的含量基本無差別，為確保提取完全且又能節(jié)約資源，選擇提取時間為15 min。

4.3 質(zhì)譜參數(shù)選擇?

一級質(zhì)譜全掃描時得到麝香酮的分子離子峰238.30，在二級質(zhì)譜掃描時發(fā)現(xiàn)其碎片離子的靈敏度較低，故又在一級質(zhì)譜圖中的223.30與209.30中選擇了較高的209.30，即將失掉C25的結(jié)構(gòu)作為定性離子對的母離子，最終通過二級質(zhì)譜掃描優(yōu)化了質(zhì)譜參數(shù)，確定了最終方法中的測定離子對及電壓。

5 結(jié) 論

金牛眼藥、撥云散眼藥、特靈眼藥處方中均含有多味名貴藥材，用氣相色譜法測定時樣品的消耗量較大。本文探索了一種采用GC-MS/MS測定金牛眼藥、撥云散眼藥、特靈眼藥中麝香酮含量的方法，選用多反應(yīng)監(jiān)測模式進(jìn)行測定，通過設(shè)置監(jiān)測離子對及采集時間段，避免了雜質(zhì)的干擾，具有更高的選擇性，且通過了方法學(xué)驗證。研究方法可同時應(yīng)用于金牛眼藥、撥云散眼藥、特靈眼藥中人工麝香的質(zhì)量控制，為全面控制藥品質(zhì)量提供了技術(shù)支撐。

鑒于本方法在研究過程中收集到的樣品數(shù)量較少，后期將繼續(xù)收集不同批次的樣品進(jìn)行深入研究，對處方中的

其他味藥進(jìn)行相應(yīng)研究，以獲取更多統(tǒng)計數(shù)據(jù)，為全面評價眼藥質(zhì)量提供技術(shù)支撐。

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