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    體外誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向成纖維細(xì)胞分化的研究

    2024-01-01 00:00:00曾尹貝立譚文松蔡海波
    關(guān)鍵詞:成纖維細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞分化

    摘要:成纖維細(xì)胞 (Fibroblast,F(xiàn)B) 在美容醫(yī)學(xué)和再生醫(yī)學(xué)中展現(xiàn)出前所未有的潛力,然而成纖維細(xì)胞的獲取以及數(shù)量有限是限制其臨床應(yīng)用的瓶頸。使用實(shí)驗(yàn)室自主設(shè)計(jì)的成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基DFM 誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞 (Mesenchymal Stem Cells, MSCs) 向成纖維細(xì)胞分化,并以誘導(dǎo)后的總細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)、成纖維細(xì)胞相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)以及細(xì)胞的遷移能力為指標(biāo),建立了一個(gè)全面的分化效果評(píng)價(jià)體系。結(jié)果表明:成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基DFM 中細(xì)胞的累計(jì)擴(kuò)增倍數(shù)顯著高于對(duì)照組;成纖維細(xì)胞相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)顯著高于對(duì)照組;細(xì)胞遷移能力也較對(duì)照組有顯著提升。

    關(guān)鍵詞:成纖維細(xì)胞;間充質(zhì)干細(xì)胞;培養(yǎng)基;分化;細(xì)胞遷移

    中圖分類(lèi)號(hào):Q813.1+1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

    成纖維細(xì)胞 (Fibroblast,F(xiàn)B) 又名纖維母細(xì)胞,起源于胚胎中胚層的間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal StemCells, MSCs),是結(jié)締組織中最常見(jiàn)的細(xì)胞類(lèi)型,幾乎在所有器官中都可以找到[1]。成纖維細(xì)胞在組織發(fā)育、維護(hù)和修復(fù)中發(fā)揮重要的作用。當(dāng)皮膚受損時(shí),損傷部位細(xì)胞通過(guò)旁分泌及自分泌的方式,促進(jìn)相鄰組織中的成纖維細(xì)胞從G0 期進(jìn)入增殖期,從而增加傷口處成纖維細(xì)胞的數(shù)量[2]。成纖維細(xì)胞還可以通過(guò)自分泌的方式促進(jìn)膠原合成和成纖維細(xì)胞增殖[3],并且它對(duì)保持皮膚彈性與韌性具有重要作用,在醫(yī)療領(lǐng)域也經(jīng)常被用于各種傷口的愈合治療[4-5]。

    MSCs 是一種成纖維細(xì)胞樣的多能干細(xì)胞,具有多向分化的潛能[6-8],是細(xì)胞治療和組織修復(fù)中最常用的干細(xì)胞之一,在再生醫(yī)學(xué)中具有極大的應(yīng)用潛力[9]。MSCs可以從許多組織來(lái)源中分離,最常見(jiàn)的3 個(gè)來(lái)源為骨髓[10]、脂肪[11] 與新生兒組織[12-15]。雖然MSCs 與成纖維細(xì)胞均可以從多種組織中獲取,但MSCs 的獲取方式對(duì)供者更加友好,且獲得的細(xì)胞具有更高的增殖與分化活性[16],這也將影響成纖維細(xì)胞用于細(xì)胞治療的效果[17]。因此,從MSCs 誘導(dǎo)分化制備成纖維細(xì)胞可以為組織工程提供新的思路。

    誘導(dǎo)MSCs 分化為成纖維細(xì)胞的方法主要分為兩種。一是二維培養(yǎng)的方法:通過(guò)向MSCs 的培養(yǎng)基中添加細(xì)胞因子[18],或?qū)SCs 與其他細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)[19],促使MSCs 向成纖維細(xì)胞分化;二是構(gòu)建相關(guān)立體支架結(jié)構(gòu)將MSCs 誘導(dǎo)分化為成纖維細(xì)胞[16-17]。其中添加細(xì)胞因子可以為MSCs 向成纖維細(xì)胞的分化提供合適的培養(yǎng)條件。在培養(yǎng)基中,影響細(xì)胞生長(zhǎng)分化的主要因素有微量元素、維生素、激素和細(xì)胞因子等。

    研究表明,轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 (Transforming GrowthFactor-β, TGF-β)、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子 (ConnectiveTissue Growth Factor, CTGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 (Basic Fibroblast Growth Factor, bFGF)、表皮生長(zhǎng)因子 (Epidermal Growth Factor, EGF) 等細(xì)胞因子可以顯著影響MSCs 的成纖維分化[18,20-23]。大量的研究表明,根據(jù)細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞標(biāo)記、分化潛能或免疫調(diào)節(jié)特性,難以將成纖維細(xì)胞和MSCs 區(qū)分開(kāi)來(lái)[24-26],因此目前對(duì)于成纖維細(xì)胞的定義仍不明確,但已有一些標(biāo)記物被用于成纖維細(xì)胞的鑒定[27-29],如平滑肌肌動(dòng)蛋白 (α-Smooth Muscle Actin, α-SMA)、I 型膠原(Collagen type I, COL-I)、波形蛋白 (Vimentin, VIM)、層黏連蛋白 (Laminin, LN) 和成纖維細(xì)胞特異性蛋白1 (Fibroblast-Specific Protein 1, FSP-1) 等。

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