• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    光調(diào)控因子HY5、HYH在蔗糖誘導(dǎo)花青素積累中作用王立光

    2019-09-10 17:01:45李靜雯葉春雷陳軍羅俊杰
    甘肅農(nóng)業(yè)科技 2019年1期
    關(guān)鍵詞:花青素

    李靜雯 葉春雷 陳軍 羅俊杰

    摘要:以擬南芥為材料,研究了光調(diào)控因子HY5、HYH在蔗糖脅迫下花青素積累過程中的作用。結(jié)果表明,蔗糖脅迫環(huán)境下誘導(dǎo)的花青素(Anthocyanin)的積累依賴于光,糖脅迫誘導(dǎo)花青素的積累過程必須在光存在的條件下進(jìn)行,在暗處,即使施加高濃度的糖脅迫,也不能明顯的誘導(dǎo)花青素的產(chǎn)生,且在暗處短期內(nèi)不會(huì)因脅迫時(shí)間的延長而改變花青素的積累量。在這個(gè)過程中光調(diào)控因子HY5、HYH起了重要作用。與野生型擬南芥Col-0、WS相比,缺失突變體在糖脅迫環(huán)境下花青素積累明顯減少。

    關(guān)鍵詞:蔗糖誘導(dǎo);花青素;HY5;HYH

    中圖分類號(hào):Q503 ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A ? ? 文章編號(hào):1001-1463(2019)01-0021-05

    Abstract:Arabidopsis thaliana was used as the material, the effect of light regulator HY5、HYH on anthocyanin accumulation under sucrose stress were studied. The results indicated that the accumulation of anthocyanin induced by sucrose stress depended on light, and the process of anthocyanin accumulation induced by sucrose stress must be carried out in the presence of light. When high concentration of sucrose stress was applied in the dark, the production of anthocyanin could not be obviously induced. The experiment also proved that the accumulation of anthocyanin in the dark would not change with the prolongation of stress time in a short term. In addition, the ?light regulator HY5 and HYH played an important role in this process. Compared with wild type control, the anthocyanin accumulation of deletion mutants decreased significantly under sugar stress.

    Key words:Sucrose-induction;Anthocyanin;HY5;HYH

    植物在遭受逆境脅迫時(shí)會(huì)表現(xiàn)出一系列的表型特征,通常糖脅迫時(shí)花青素的積累就是一個(gè)重要的表現(xiàn)。已有很多研究表明,花青素對(duì)植物抵抗逆境脅迫起到一定的防御作用,雖然植物本身有一套自己的防御自由基和活性氧威脅的防御系統(tǒng),但是在逆境脅迫下有時(shí)這套系統(tǒng)不足以抵抗活性氧或者自由基的攻擊,此時(shí)需要花青素發(fā)揮作用,對(duì)細(xì)胞膜和DNA進(jìn)行保護(hù)[1 - 2 ]?;ㄇ嗨氐姆e累情況可以反映植物遭受逆境脅迫的程度,同時(shí)具有對(duì)逆境脅迫所造成的傷害進(jìn)行抵御的作用。目前,一方面由于花青素的純天然特性可以使其在生產(chǎn)、生活等領(lǐng)域得到廣泛的安全利用;另一方面由于其在植物生理方面的有益作用,使對(duì)花青素的研究也得到足夠的重視,尤其花青素對(duì)紫外具有特殊的防護(hù)作用,可以使植物免受紫外的傷害,故很多研究者做了大量的研究工作[3 - 6 ]?;ㄇ嗨氐姆e累受光、溫度、激素等外界因素影響已被證 ? 實(shí)[7 - 10 ]。植物光形態(tài)建成中COP1調(diào)節(jié)的調(diào)控因子HY5、HYH是參與光影響植物的一個(gè)重要的組分[11 - 12 ],光形態(tài)建成相關(guān)的光調(diào)控因子HY5、HYH在逆境脅迫下對(duì)花青素的積累所起的作用也就不得不引起人們的關(guān)注。我們研究了光調(diào)控因子HY5、HYH在糖脅迫環(huán)境下對(duì)花青素積累的作用,為進(jìn)一步研究HY5、HYH在調(diào)節(jié)花青素抵御逆境的作用提供參考。

    1 ? 材料與方法

    1.1 ? 植物材料與培養(yǎng)

    以野生型擬南芥Col-0、WS及相應(yīng)的突變體hy5、hyh、hy5 hyh為供試材料。擬南芥種子經(jīng)20%次氯酸鈉消毒13 min,用無菌水沖洗6次,選取均勻飽滿的種子點(diǎn)于直徑10 cm含有25 mL 1/2MS培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中,4 ℃暗處春化2 d后移入21 ℃的溫室萌發(fā)培養(yǎng)4 d。用1/2 MS溶液配制含有不同濃度糖的培養(yǎng)基,對(duì)幼苗處理,進(jìn)行花青素提取測(cè)定。

    1.2 ? 花青素的提取與測(cè)定

    花青素提取與測(cè)定參照Vandenbussche F方法[13 ],略有改動(dòng)。取10 mg的整株擬南芥幼苗放入1.5 mL離心管,加入300 μL酸性甲醇(無水甲醇與HCl的體積比為99∶1),于4 ℃冰箱放置24 h,取出后加入氯仿和蒸餾水各200 μL,稍微振蕩后5 000 r/min離心10 min,吸取上清液350 μL加入700 μL 60%(無水甲醇、HCl、水的體積比為99∶1∶200/3)的酸性甲醇稀釋,530 nm波長下測(cè)定吸光值。

    1.3 ? 數(shù)據(jù)分析

    利用Microsoft Excel軟件對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,通過SPSS 20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因子方差分析,用新復(fù)極差法(Duncan)做顯著性分析,利用軟件sigmaplot 10.0和Adobe Photoshop作圖。

    2 ? 結(jié)果與分析

    2.1 ? 光照條件下蔗糖對(duì)花青素的積累影響

    圖1顯示了蔗糖與光對(duì)花青素積累的影響。在蔗糖與光同時(shí)存在的情況下,花青素得到了明顯的積累,且隨著處理天數(shù)的增加效果更為明顯。在只有蔗糖或者只有光存在的情況下,花青素并未得到明顯的積累,這說明蔗糖對(duì)花青素誘導(dǎo)的積累必須在光存在的情況下才可以得到實(shí)現(xiàn),這也與有關(guān)糖誘導(dǎo)調(diào)節(jié)花青素合成相關(guān)基因的研究相一致[14 - 15 ]。

    2.2 ? 蔗糖濃度對(duì)花青素積累的影響

    蔗糖濃度不同所引起的糖脅迫程度不同,對(duì)花青素積累的影響程度也就不同。為了選擇合適的糖脅迫濃度,利于花青素的測(cè)定,選擇0、30、60、90、150 mmol/L的蔗糖濃度進(jìn)行觀察,結(jié)果如圖2所示。在低濃度蔗糖(≤90 mmol/L)有光存在下,隨著蔗糖濃度的增加,花青素積累也隨著明顯增加,當(dāng)蔗糖濃度達(dá)到90 mmol/L時(shí)花青素積累已經(jīng)非常明顯,當(dāng)蔗糖濃度再增加時(shí)花青素含量卻沒有再明顯升高。這說明,在90 mmol/L蔗糖濃度下,花青素積累已達(dá)顯著效果,故未特殊說明,均采用90 mmol/L的蔗糖處理。從圖2也可以看出,在暗處雖然也加入了不同濃度蔗糖,但花青素幾乎沒有變化,這也就進(jìn)一步說明糖所誘導(dǎo)的花青素積累依賴于光。

    2.3 ? 蔗糖及葡萄糖、 果糖、 山梨醇對(duì)花青素積累影響的比較

    在植物的代謝過程中,葡萄糖、果糖是最易利用的單糖。由圖3可知,與二糖(蔗糖)比較,在相同濃度下,對(duì)擬南芥花青素合成影響最大的是蔗糖,而非果糖或葡萄糖,這也為選取蔗糖進(jìn)行處理提供了依據(jù)。另外,無論光下還是暗處,山梨醇所造成的干旱脅迫幾乎不能對(duì)花青素的積累產(chǎn)生影響。圖3還顯示,雖然葡萄糖或果糖在光下與對(duì)照相比花青素的積累有所增加,但是與蔗糖相比,對(duì)花青素合成的影響要微弱的多,也就是說雖然不同的糖脅迫都會(huì)導(dǎo)致花青素產(chǎn)生和積累,但是同濃度的糖的脅迫程度不同,這從花青素的積累程度可以得到驗(yàn)證。這3種糖所誘導(dǎo)的花青素的積累都是依賴于光的,在暗處處理的花青素含量與暗處的對(duì)照幾乎相同。

    2.4 ? HY5、 HYH對(duì)蔗糖誘導(dǎo)的花青素的影響

    為了進(jìn)一步研究光在蔗糖誘導(dǎo)花青素積累中的作用,用以野生型Col-0為背景的突變體hy5進(jìn)行觀察。結(jié)果表明,當(dāng)光調(diào)節(jié)因子HY5缺失,在蔗糖處理?xiàng)l件下,花青素的積累量明顯減少,只有對(duì)照組花青素含量的1/2。在未加入蔗糖條件下,突變體hy5與相應(yīng)對(duì)照的花青素含量沒有差別(圖4),這也就說明光調(diào)控因子HY5在蔗糖脅迫誘導(dǎo)的花青素積累過程中起一定的作用,雖然HY5的缺失不能完全抑制蔗糖誘導(dǎo)花青素的產(chǎn)生,但是HY5在此過程中的作用十分重要。

    HY5同源基因編碼的光調(diào)控因子HYH對(duì)HY5有一定的互補(bǔ)作用[16 ],為了進(jìn)一步驗(yàn)證HY5的作用,我們采用野生型WS及相應(yīng)的單突變體hyh和雙突變體hy5 hyh進(jìn)一步進(jìn)行研究。圖5的結(jié)果表明,當(dāng)缺失HYH,在光下蔗糖誘導(dǎo)的花青素的產(chǎn)生量也會(huì)較對(duì)照相應(yīng)的減少,也就是說HYH在蔗糖誘導(dǎo)的花青素積累過程中也是起作用的。從圖5中可以看出,雙突變體與相應(yīng)的野生型和單突變體相比較,花青素的積累量進(jìn)一步降低,這也就進(jìn)一步證實(shí)2個(gè)光調(diào)控因子在蔗糖誘導(dǎo)產(chǎn)生花青素的過程中起到了協(xié)同作用。但是,在2個(gè)因子都缺失的情況下,也不能完全消除蔗糖誘導(dǎo)產(chǎn)生的花青素,使花青素含量達(dá)到未脅迫的水平。這表明,除了2個(gè)重要的光調(diào)節(jié)因子之外,還存在其它介導(dǎo)途徑的因子存在,有文獻(xiàn)已經(jīng)表明這些調(diào)節(jié)因子在其中的作用[17 ]。

    3 ? 結(jié)論與討論

    我們通過試驗(yàn)研究了糖脅迫條件下花青素積累對(duì)光的要求,并進(jìn)一步證實(shí)光調(diào)控因子HY5、HYH在這個(gè)過程當(dāng)中所起的作用。結(jié)果表明,糖脅迫誘導(dǎo)花青素的積累過程就必須在光存在的情況下進(jìn)行。在暗處時(shí),即使施加高濃度的糖脅迫,也不能明顯的誘導(dǎo)花青素的產(chǎn)生,且在暗處短期內(nèi)不會(huì)因脅迫時(shí)間的延長而改變花青素的積累量。有研究認(rèn)為,糖含量的增加有利于花青素的合成[14 ],但用相同濃度的葡萄糖、果糖處理時(shí)并未達(dá)到采用蔗糖處理的程度,也就是說蔗糖在為花青素合成提供糖源的同時(shí)也造成嚴(yán)重的糖脅迫,進(jìn)而造成花青素的積累。

    在負(fù)調(diào)控HY5、HYH的光調(diào)控因子COP1缺失的情況下,擬南芥突變體cop1幼苗黑暗條件下糖處理表現(xiàn)出明顯的花青素積累現(xiàn)象[18 ]。這是由于野生型COP1在暗處能迅速進(jìn)入核內(nèi)降解HY5和HYH,而缺失突變體不具備降解能力,這也間接證明HY5、HYH在調(diào)控花青素積累過程中起到重要作用。我們的研究也表明,調(diào)控因子HY5、HYH在光下低溫引起的花青素積累中具有重要作用,調(diào)節(jié)低溫脅迫下花青素合成基因的表達(dá),從而影響花青素的積累量[19 ],這與先前的研究類似。在蔗糖誘導(dǎo)的花青素積累過程中,光形態(tài)建成過程中的這2個(gè)重要調(diào)控因子也起重要作用,但并不是唯一的作用途徑,這也符合植物適應(yīng)復(fù)雜環(huán)境從而有多條調(diào)節(jié)路徑的進(jìn)化選擇。

    參考文獻(xiàn):

    [1] KEVIN S. GOULD. Functioal role of anthocyanins in the leaves of Quintinia serrata A. Cunn[J]. ?Journal of Experimental Botany,2000,51(347):1107-1115.

    [2] MARK N. MERZLYAK. Light absorption by anthocyanins in juvenile,stressed,and senescing leaves[J]. ?Journal of Experimental Botany,2008,59(14):3903-3911.

    [3] 劉 ? 薇,黃 ? 瑛. 植物花青素與生物學(xué)適應(yīng)性關(guān)系研究進(jìn)展[J]. ?作物研究,2005,22(5):319-322.

    [4] 趙云榮,王世雷. ?植物花青素研究進(jìn)展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(8):3095-3097.

    [5] N M HUGHES,H S NEUFELD. ?Functional role of anthocyanins in high-light winter leaves of the evergreen herb Galax urceolata[J]. ?New Phytologist,2005,168:575-587.

    [6] Velissarios-Phaedon Kytridis,Yiannis Manetas. Mesophyll versus epidermal anthocyanins as potential in vivo antioxidants:evidence linking the putative antioxidant role to the proximity of oxy-radical source[J]. ?Journal of Experimental Botany,2006,57(10):2203-2210.

    [7] ELENA LORETI,GIOVANNI PIVEROL. ?Gibberellins,jasmonate and abscisic acid modulate the sucrose-induced expression of anthocyanin biosynthetic genes in Arabidopsis[J]. ? New Phytologist,2008,179:1004-1016.

    [8] FABRIZIO PIETRINI,ANGELO MASSACCI. Leaf anthocyanin content changes in Zea mays L. grown at low temperature:Significance for the relationship between the quantum yield of PS II and the apparent quantum yield of CO2 assimilation[J]. ?Photosynthesis Research,1998,58:213-219

    [9] CHALKER-SCOTT L. Environmental signi cance of anthocyanins in plant responses[J]. ?Photochemistry and Photobiology,1999,70:1-9.

    [10] DEMMIG-ADAMS B. Survey of thermal energy dissipation and pigment composition in sun and shade leaves[J]. ?Plant Cell Physiology, 1998,39:474-482.

    [11] CHATTOPADHYAY S. ?Arabidopsis bZIP protein HY5 directly interacts with light-responsive promoters in mediating light control of gene expression[J]. ?Plant Cell,1998,10(5):673-683.

    [12] XING WANG DENG,PETER H QUAIL. Signalling in light-controlled development[J]. Cell and Developmental ?Biology,1999,10:121-129.

    [13] VANDENBUSSCHE F,HABRICOT Y. HY5 is a point of convergence between cryptochrome and cytokinin signalling pathways in Arabidopsis thaliana[J]. ?Plant Journal,2007,49:428-441.

    [14] CINZIA SOLFANELLI,ALESSANDRA POGGI. Sucrose-specific induction of the anthocyanin biosynthetic pathway in Arabidopsis[J]. Plant Physiology,2006,140:637-646.

    [15] JIEUN SHIN,EUNAE PARK. PIF3 regulates anthocyanin biosynthesis in an HY5-dependent manner with both factors directly binding anthocyanin biosynthetic gene promoters in Arabidopsis[J]. ? The Plant Journal,2007,

    49:981-994.

    [16] JONASSEN EM,LEA US,LILLO C. HY5 and HYH are positive regulators of nitrate reductase in seedlings and rosette stage plants[J]. ?Planta,2008,227(3):559-64.

    [17] SHENG TENG,JOOST KEURENTJES. Sucrose-specific Induction of anthocyanin biosynthesis in Arabidopsis requires the MYB 75/PAP1Gene[J]. ?Plant Physiology,2005,

    139:1840-1852.

    [18] CHEN Q F,DAI L Y,XIAO S,et al. The COI1 ?and DFR ?genes are essential for regulation of jasmonate-induced anthocyanin accumulation in Arabidopsis[J] . ?Chinese Bulletin of Botany,2007,49 (9):1370-1377.

    [19] ZHANG Y,Z LIU. ?Gibberellins negatively regulate low temperature-induced anthocyanin accumulation in a HY5/HYH-dependent manner[J]. Plant Signal Behav.,2011,6(5):632-644.

    (本文責(zé)編:陳 ? ?珩)

    收稿日期:2018 - 09 - 19

    基金項(xiàng)目:甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院中青年基金(2016GAAS53);國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(GARS-17-SYZ-6);甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程(2015GAAS02);國家自然科學(xué)基金(31660391、31460350)。

    作者簡(jiǎn)介:王立光(1982 — ),男,山東臨沂人,助理研究員,博士,主要從事植物分子與生理研究工作。Email:wodepengyouwlg@163.com。

    通信作者:羅俊杰(1962 — ),男,陜西華縣人,研究員,主要從事作物栽培與生態(tài)研究工作。 Email: sjsljjie@gsagr.ac.cn。

    執(zhí) ?筆 ?人:葉春雷

    猜你喜歡
    花青素
    藍(lán)紫色的藍(lán)莓
    山葡萄原花青素在食品中的穩(wěn)定性研究
    藍(lán)靛果花青素穩(wěn)定性研究
    原花青素B2通過Akt/FoxO4通路拮抗內(nèi)皮細(xì)胞衰老的實(shí)驗(yàn)研究
    不同處理對(duì)刺葡萄愈傷組織花青素和原花青素生物合成的影響
    紫甘薯花青素對(duì)肝癌的影響及其機(jī)制的研究
    花青素對(duì)非小細(xì)胞肺癌組織細(xì)胞GST-π表達(dá)的影響
    中成藥(2017年5期)2017-06-13 13:01:12
    山楸梅漿果中花青素提取方法的優(yōu)化和測(cè)定
    中成藥(2016年8期)2016-05-17 06:08:41
    原花青素對(duì)腦缺血再灌注損傷后腸道功能的保護(hù)作用
    神奇的花青素
    女士(2014年10期)2014-10-20 02:28:29
    久久这里只有精品19| 丁香六月天网| 激情视频va一区二区三区| 不卡av一区二区三区| 精品国产国语对白av| 色播在线永久视频| av在线播放精品| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 大片电影免费在线观看免费| 成人国语在线视频| 最黄视频免费看| 女警被强在线播放| 久久精品亚洲av国产电影网| 在线观看免费日韩欧美大片| 亚洲欧美精品自产自拍| 五月开心婷婷网| 日本黄色日本黄色录像| 免费在线观看完整版高清| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 高清视频免费观看一区二区| 免费在线观看完整版高清| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 波野结衣二区三区在线| 99国产综合亚洲精品| 51午夜福利影视在线观看| 在线看a的网站| 欧美日韩综合久久久久久| videosex国产| 久久鲁丝午夜福利片| 99精国产麻豆久久婷婷| 欧美xxⅹ黑人| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久人人97超碰香蕉20202| 中文字幕亚洲精品专区| 18禁观看日本| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产真人三级小视频在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产精品免费视频内射| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产精品欧美亚洲77777| 9色porny在线观看| 精品国产国语对白av| 9热在线视频观看99| 久久这里只有精品19| 婷婷丁香在线五月| 亚洲国产欧美在线一区| 免费观看a级毛片全部| 一二三四在线观看免费中文在| 国产成人免费无遮挡视频| 日本av手机在线免费观看| 夫妻午夜视频| 国产视频首页在线观看| 久久久久久久精品精品| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 美国免费a级毛片| 男人爽女人下面视频在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 韩国精品一区二区三区| av在线老鸭窝| 亚洲男人天堂网一区| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 欧美日韩综合久久久久久| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产精品偷伦视频观看了| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 在线av久久热| 亚洲成国产人片在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久 | 国产成人精品在线电影| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 搡老岳熟女国产| 少妇被粗大的猛进出69影院| 在线精品无人区一区二区三| 久久国产精品大桥未久av| a级毛片在线看网站| 最黄视频免费看| 日韩中文字幕视频在线看片| 久久影院123| 国产成人a∨麻豆精品| 日本欧美国产在线视频| 激情视频va一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲第一av免费看| 美女高潮到喷水免费观看| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲,欧美,日韩| 国产伦人伦偷精品视频| 一级,二级,三级黄色视频| av又黄又爽大尺度在线免费看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲五月色婷婷综合| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 美女中出高潮动态图| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 十八禁人妻一区二区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久久久久免费高清国产稀缺| 久久久国产欧美日韩av| avwww免费| 91精品三级在线观看| 天天添夜夜摸| 又大又爽又粗| 美女主播在线视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 免费av中文字幕在线| 人妻人人澡人人爽人人| 飞空精品影院首页| 久久亚洲精品不卡| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 久久天堂一区二区三区四区| 国产一区二区三区综合在线观看| 最近中文字幕2019免费版| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产熟女午夜一区二区三区| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 一边亲一边摸免费视频| 国产成人av激情在线播放| 97人妻天天添夜夜摸| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产伦人伦偷精品视频| 最黄视频免费看| 夫妻午夜视频| 91精品伊人久久大香线蕉| 色综合欧美亚洲国产小说| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 首页视频小说图片口味搜索 | 涩涩av久久男人的天堂| 18禁国产床啪视频网站| 欧美精品一区二区大全| 欧美日韩视频精品一区| 日韩制服骚丝袜av| av天堂久久9| 亚洲欧美清纯卡通| 欧美亚洲日本最大视频资源| av线在线观看网站| kizo精华| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 男女免费视频国产| 国产精品一国产av| 国产精品国产三级专区第一集| 18在线观看网站| e午夜精品久久久久久久| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美精品亚洲一区二区| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 亚洲视频免费观看视频| 亚洲七黄色美女视频| 99热网站在线观看| 两个人看的免费小视频| 国产精品熟女久久久久浪| 纯流量卡能插随身wifi吗| 欧美精品高潮呻吟av久久| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲免费av在线视频| 国产99久久九九免费精品| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产爽快片一区二区三区| 尾随美女入室| 电影成人av| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 天堂8中文在线网| 手机成人av网站| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲av美国av| av网站免费在线观看视频| 亚洲国产欧美在线一区| 色播在线永久视频| 18禁观看日本| 男女床上黄色一级片免费看| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲免费av在线视频| 国产1区2区3区精品| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产91精品成人一区二区三区 | 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 午夜福利,免费看| 交换朋友夫妻互换小说| 日韩大片免费观看网站| 丁香六月欧美| 国产亚洲一区二区精品| 男人添女人高潮全过程视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 免费在线观看黄色视频的| 国产视频首页在线观看| 欧美人与性动交α欧美软件| 91字幕亚洲| 午夜福利,免费看| 日韩一本色道免费dvd| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产1区2区3区精品| 免费看av在线观看网站| 精品人妻在线不人妻| 免费观看人在逋| 女警被强在线播放| 国产精品一区二区免费欧美 | 又紧又爽又黄一区二区| 日本欧美视频一区| 黄频高清免费视频| av福利片在线| 精品一区在线观看国产| 99九九在线精品视频| 妹子高潮喷水视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久国产精品人妻蜜桃| www日本在线高清视频| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| a级片在线免费高清观看视频| 大话2 男鬼变身卡| 精品国产一区二区久久| 亚洲国产精品一区三区| 欧美日韩精品网址| 少妇精品久久久久久久| 国产av精品麻豆| 视频区图区小说| 日日爽夜夜爽网站| 久久精品久久久久久久性| 免费看不卡的av| 免费观看av网站的网址| 日本午夜av视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 99国产精品免费福利视频| 中国美女看黄片| 色综合欧美亚洲国产小说| 美国免费a级毛片| 美女视频免费永久观看网站| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 人成视频在线观看免费观看| 成人三级做爰电影| 亚洲欧美一区二区三区久久| 好男人电影高清在线观看| 十八禁网站网址无遮挡| 欧美日韩成人在线一区二区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 日本欧美视频一区| 国产免费现黄频在线看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲国产精品一区三区| 99热全是精品| 久久鲁丝午夜福利片| 最黄视频免费看| 午夜福利乱码中文字幕| 国产在线视频一区二区| 国产一区二区三区av在线| 国产片内射在线| 一二三四在线观看免费中文在| 日本91视频免费播放| 99精国产麻豆久久婷婷| 成人国产av品久久久| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产又色又爽无遮挡免| 男女之事视频高清在线观看 | 精品久久久精品久久久| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲成色77777| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 99香蕉大伊视频| 精品少妇久久久久久888优播| 另类精品久久| 十八禁网站网址无遮挡| 欧美成狂野欧美在线观看| 黄片播放在线免费| 性色av一级| 欧美日本中文国产一区发布| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 亚洲 欧美一区二区三区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲,欧美精品.| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 久热爱精品视频在线9| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 男女下面插进去视频免费观看| xxx大片免费视频| 国产精品久久久久成人av| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲欧美一区二区三区久久| 久久久国产欧美日韩av| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 久久久久视频综合| 亚洲国产精品成人久久小说| 日韩精品免费视频一区二区三区| 免费观看av网站的网址| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 下体分泌物呈黄色| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲五月婷婷丁香| 国产av国产精品国产| 欧美亚洲日本最大视频资源| 99re6热这里在线精品视频| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲 欧美一区二区三区| www.自偷自拍.com| 国产精品av久久久久免费| 一本色道久久久久久精品综合| 午夜91福利影院| videos熟女内射| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 亚洲 国产 在线| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 精品国产一区二区久久| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 男女边摸边吃奶| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 欧美日韩黄片免| av有码第一页| 精品久久蜜臀av无| 成年人午夜在线观看视频| 免费看不卡的av| 制服诱惑二区| 咕卡用的链子| av欧美777| 男女边摸边吃奶| 高清不卡的av网站| 天天影视国产精品| 1024视频免费在线观看| 9色porny在线观看| 亚洲国产精品国产精品| 一级片免费观看大全| 我的亚洲天堂| 亚洲精品一区蜜桃| 男女下面插进去视频免费观看| 黄色怎么调成土黄色| 免费少妇av软件| 99香蕉大伊视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 欧美黄色片欧美黄色片| 老司机午夜十八禁免费视频| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲视频免费观看视频| 后天国语完整版免费观看| 久久精品国产综合久久久| 搡老岳熟女国产| 在线观看免费日韩欧美大片| 男男h啪啪无遮挡| 国产野战对白在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 亚洲伊人色综图| 男女免费视频国产| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 高清不卡的av网站| 免费黄频网站在线观看国产| 男的添女的下面高潮视频| 色视频在线一区二区三区| 久久久国产欧美日韩av| 中国美女看黄片| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久狼人影院| 久久九九热精品免费| 午夜福利影视在线免费观看| 美女中出高潮动态图| 一区在线观看完整版| 日本欧美国产在线视频| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲国产av新网站| 老司机亚洲免费影院| 亚洲精品美女久久av网站| 男女边吃奶边做爰视频| 嫩草影视91久久| 中国美女看黄片| 一本综合久久免费| 欧美激情极品国产一区二区三区| 亚洲精品国产一区二区精华液| 晚上一个人看的免费电影| 老鸭窝网址在线观看| 午夜91福利影院| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 成人国产av品久久久| 下体分泌物呈黄色| 国产黄色免费在线视频| 久久人人爽人人片av| 免费观看人在逋| 热99国产精品久久久久久7| 大型av网站在线播放| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 美女大奶头黄色视频| 精品久久久精品久久久| 丝袜美腿诱惑在线| a级毛片黄视频| 一级,二级,三级黄色视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久99一区二区三区| 美女国产高潮福利片在线看| 美女大奶头黄色视频| 又紧又爽又黄一区二区| 日本色播在线视频| 乱人伦中国视频| 亚洲国产av影院在线观看| 老熟女久久久| 日韩大片免费观看网站| 午夜福利乱码中文字幕| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲国产欧美网| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产黄色视频一区二区在线观看| 亚洲人成电影观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 一级毛片 在线播放| 天天影视国产精品| 欧美精品av麻豆av| 国产一区二区三区综合在线观看| netflix在线观看网站| 免费观看av网站的网址| 日韩 亚洲 欧美在线| 大话2 男鬼变身卡| 99热全是精品| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲伊人色综图| 中文字幕色久视频| h视频一区二区三区| 精品一区在线观看国产| 成年人免费黄色播放视频| 91精品国产国语对白视频| 国产av精品麻豆| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久免费观看电影| 免费看av在线观看网站| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产精品久久久av美女十八| 男女边吃奶边做爰视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 91精品国产国语对白视频| 色网站视频免费| 在线 av 中文字幕| 丝袜人妻中文字幕| 中文字幕制服av| av片东京热男人的天堂| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 男女之事视频高清在线观看 | www.av在线官网国产| 亚洲欧美一区二区三区久久| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 国产在视频线精品| 亚洲九九香蕉| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 亚洲av成人精品一二三区| 国产野战对白在线观看| 精品一区在线观看国产| 国产三级黄色录像| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 欧美日韩福利视频一区二区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| www.精华液| 在线精品无人区一区二区三| 午夜91福利影院| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产淫语在线视频| 国产成人91sexporn| 婷婷成人精品国产| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲成人免费av在线播放| 国产男女超爽视频在线观看| 日本av手机在线免费观看| tube8黄色片| 免费高清在线观看视频在线观看| 欧美日韩精品网址| 欧美在线一区亚洲| 2021少妇久久久久久久久久久| 叶爱在线成人免费视频播放| 精品高清国产在线一区| 国产在线免费精品| 亚洲色图综合在线观看| 考比视频在线观看| 成人三级做爰电影| 国产成人系列免费观看| 两人在一起打扑克的视频| 精品人妻1区二区| 国产麻豆69| 老熟女久久久| 亚洲国产av影院在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 日本色播在线视频| 热re99久久精品国产66热6| 国产黄频视频在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲成人免费电影在线观看 | 亚洲国产精品成人久久小说| 国产成人精品久久久久久| 不卡av一区二区三区| 成年美女黄网站色视频大全免费| 99国产精品一区二区三区| 国产精品av久久久久免费| 狂野欧美激情性bbbbbb| 操出白浆在线播放| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 成人亚洲精品一区在线观看| 下体分泌物呈黄色| 操出白浆在线播放| 久久亚洲精品不卡| 高清不卡的av网站| 美女大奶头黄色视频| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲综合色网址| 精品少妇黑人巨大在线播放| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 后天国语完整版免费观看| 日本91视频免费播放| 精品第一国产精品| 免费观看人在逋| 一区二区三区激情视频| 午夜激情久久久久久久| 十八禁网站网址无遮挡| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 男人操女人黄网站| 青春草视频在线免费观看| 久久99热这里只频精品6学生| 51午夜福利影视在线观看| 99热全是精品| 少妇人妻久久综合中文| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国精品久久久久久国模美| 欧美在线一区亚洲| 自线自在国产av| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 久久久国产精品麻豆| 午夜激情av网站| 一区二区av电影网| 国产欧美日韩一区二区三 | 黄片播放在线免费| 成年人免费黄色播放视频| 91精品伊人久久大香线蕉| 欧美日韩综合久久久久久| 老司机深夜福利视频在线观看 | 中国美女看黄片| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 亚洲成人免费电影在线观看 | 老司机靠b影院| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲精品一区蜜桃| 各种免费的搞黄视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 一级片'在线观看视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 欧美大码av| 国产精品九九99| 美女福利国产在线| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产精品久久久av美女十八| 日韩av免费高清视频| 亚洲,欧美精品.| 丁香六月欧美| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 成年人黄色毛片网站| 久久久久久久国产电影| 在线av久久热| 国产精品国产av在线观看| 日日夜夜操网爽| 国产熟女欧美一区二区| 下体分泌物呈黄色| 国产精品偷伦视频观看了| 纯流量卡能插随身wifi吗| 美女主播在线视频| 自线自在国产av| xxx大片免费视频| 亚洲视频免费观看视频| 亚洲色图综合在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 精品福利观看| 日本av免费视频播放| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 大码成人一级视频| 国产精品国产av在线观看| 久久99热这里只频精品6学生| 久久女婷五月综合色啪小说| 亚洲五月色婷婷综合| 国产成人欧美在线观看 | 男人爽女人下面视频在线观看| 午夜老司机福利片| 国产伦理片在线播放av一区| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 成人亚洲精品一区在线观看| 日韩一区二区三区影片| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 欧美日本中文国产一区发布| 曰老女人黄片| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲av美国av| 下体分泌物呈黄色|