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    補中益氣湯聯(lián)合不同營養(yǎng)方式對肝癌切除術后大鼠免疫功能的影響

    2019-09-10 19:58:44宋新梅馬曉勇曹磊吳煜龍郭志學王穎
    世界中醫(yī)藥 2019年11期
    關鍵詞:益氣湯中西淋巴細胞

    宋新梅 馬曉勇 曹磊 吳煜龍 郭志學 王穎

    摘要 目的:觀察補中益氣湯聯(lián)合不同營養(yǎng)方式對肝癌切除術后大鼠免疫功能的影響。方法:選取45只成功復制肝硬化肝癌并成功用Higgins法行肝部分切除術的大鼠,隨機分為常規(guī)組、中西結合A組及中西結合B組,每組15只,其中常規(guī)組大鼠接受經(jīng)口進食,中西結合A組采用補中益氣湯+腸外營養(yǎng),中西結合B組采用補充益氣湯+腸內(nèi)營養(yǎng),連續(xù)干預10 d,比較3組大鼠營養(yǎng)指標如血紅蛋白(Hb)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白LDL)以及免疫指標如CD3+、CD4+、CD8+、IgG、IgM、IgA表達差異。結果:1)3組大鼠Hb、TC、TG、LDL水平低于正常值,3組中中西結合組高于常規(guī)組,其中中西醫(yī)結合B組較A組升高(P<0.05)。2)3組大鼠治療前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、IgG、IgM、IgA、IL-4、IL-6、TNF-ɑ比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),干預后3組以上指標較治療前均顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),中西結合組低于高于常規(guī)組,其中中西醫(yī)結合B組較A組升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),干預后3組CD8+較治療前顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),中西結合組低于高于常規(guī)組,其中中西醫(yī)結合B組較A組降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論:補中益氣湯聯(lián)合腸內(nèi)營養(yǎng)既可改善肝硬化肝癌術后的營養(yǎng)狀況,又可提升其免疫功能。

    關鍵詞 肝硬化;肝癌切除術;動物模型;不同營養(yǎng)方式;補中益氣湯;營養(yǎng)狀況;免疫;機制

    Effects of Buzhong Yiqi Decoction Combined with Different Nutritional Methods on Immune Function in Rats after Hepatectomy

    Song Xinmei1,Ma Xiaoyong2,Cao Lei1,Wu Yulong1,Guo Zhixue1,Wang Ying1

    Abstract Objective:To observe effects of Buzhong Yiqi Decoction combined with different nutritional methods on immune function in rats after hepatectomy.Methods:Forty-five rats with successfully duplicated cirrhotic hepatoma and successful hepatectomy by Higgins method were included in the study.They were randomly divided into routine group,integrated Chinese and western group A and integrated Chinese and western group B,with 15 rats in each group.The routine group received oral feeding,the integrated Chinese and western group A was used Buzhong Yiqi Decoction+ parenteral nutrition,and the integrated Chinese and western group B was treated with Buzhong Yiqi Decoction+ enteral nutrition.They were intervened continuously for 10 d.Expression differences of nutritional indexes[hemoglobin(Hb),total cholesterol(TC),triglyceride(TG)and low density lipoprotein(LDL)]and immune indexes(CD3+,CD4+,CD8+,IgG,IgM and IgA)were compared among the groups.Results:1)The levels of Hb,TC,TG and LDL in the 3 groups were lower than the normal values.Among the 3 groups,those in the integrated Chinese and western groups were higher than those in the routine group,and those in the integrated Chinese and western group B were higher than those in the group A(P<0.05).2)There was no significant difference in the CD3+,CD4+,CD4+/CD8+,IgG,IgM,IgA,IL-4,IL-6 and TNF-α among the 3 groups before the treatment(P>0.05).After the intervention,the above indicators in the 3 groups were significantly lower than those before the treatment(P<0.05).Those in the integrated Chinese and western groups were lower than those in the routine group,and those in the integrated Chinese and western group B were higher than those in the group A(P<0.05).After the intervention,the CD8+ in the 3 groups was increased significantly compared with that before the treatment(P<0.05).That in the integrated Chinese and western groups was lower than that in the routine group,and that in the integrated Chinese and western group B was lower than that in the group A(P<0.05).Conclusion:Buzhong Yiqi Decoction combined with enteral nutrition can improve nutritional status and immune function of cirrhotic hepatoma patients after operation.

    Key Words Liver cirrhosis; Hepatectomy; Animal model; Different nutritional methods; Buzhong Yiqi Decoction; Nutritional status; Immunity; Mechanism

    中圖分類號:R289.4;R735.7文獻標識碼:Adoi:10.3969/j.issn.1673-7202.2019.11.016

    肝硬化、肝癌機體均存在肝代謝功能障礙,機體發(fā)生營養(yǎng)不良的風險極大,而肝硬化合并肝癌的患者尤為明顯[1-2]。目前手術切除是治療肝硬化肝癌的有效治療方案,但術后常因營養(yǎng)不良或機體免疫功能紊亂而出現(xiàn)肝衰竭或復發(fā)等,故我們認為加強肝硬化肝癌術后營養(yǎng),提升機體免疫功能具有重要的臨床意義。補中益氣湯首載金元時期醫(yī)學家李杲之《內(nèi)外傷辨惑論》,具有補中益氣、升陽舉陷之功。臨床不乏其有效促進患者免疫功能的報道[3-5],但其作用機制目前尚無統(tǒng)一定論,此外,補中益氣湯與何種營養(yǎng)攝入方式結合更有利于提高機體免疫及營養(yǎng)狀況,目前尚不可知?;诖耍覀儗⒏斡不伟┣谐g后大鼠作為研究對象,結合不同營養(yǎng)方式,探討其療效及作用機制。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 動物

    選取45只清潔級雄性SD大鼠納入研究,均購自濟南金豐動物實驗有限公司(許可證號:SCXK(魯)20140006),鼠齡3~4個月,平均鼠齡(3.22±0.28)個月,體質量230~250 g,平均體質量(241.00±4.21)g。飼養(yǎng)條件:溫度(25±0.5)℃,濕度(50±1.5)%,12 h/12 h晝夜交替。3組大鼠在鼠齡、體質量等差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。具有可比性。本研究實驗過程中動物的處理均嚴格按照國際道德準則和國家健康指南關于維護和使用實驗動物先關條例進行。

    1.1.2 藥物

    補中益氣湯由本院中藥研究院提供,中藥組成:黃芪18 g、甘草9 g、人參6 g、當歸3 g、橘皮6 g、升麻6 g、柴胡6 g、白術9 g。

    1.1.3 試劑與儀器

    大鼠血紅蛋白(Hb)試劑盒(購自博士康生物有限公司,編號230924145)、總膽固醇(TC)試劑盒(購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司,編號39283928)、三酰甘油(TG)試劑盒(購自博士康生物有限公司,編號232208823)、低密度脂蛋白(LDL)試劑盒(購自上海邦奕商貿(mào)有限公司,編號8328823)。大鼠IgM試劑盒(購自上海西唐生物有限公司,編號F15770)、大鼠IgG試劑盒(購自上海西唐生物有限公司,編號F15760)、大鼠IgA試劑盒(購自上海西唐生物有限公司,編號F1574)。大鼠IL-4試劑盒(購自上海邦奕商貿(mào)有限公司,編號8281823)、IL-6試劑盒(購自上海邦奕商貿(mào)有限公司,編號8311823)、TNF-ɑ試劑盒(購自上海邦奕商貿(mào)有限公司,編號892833);營養(yǎng)液(瑞代,華瑞制藥有限公司,編號:140297),顯微剪刀、顯微鑷、手術刀(均購自上海醫(yī)療器械有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 分組與模型制備

    選取45只SD大鼠并成功制備肝硬化肝癌大鼠模型,并接受按Higgins法切除帶瘤的大鼠肝中葉。將45只大鼠隨機分為常規(guī)組、中西結合A組及中西結合B組,每組15只。

    1.2.2 給藥方法

    常規(guī)組大鼠予常規(guī)經(jīng)口進食,普通飼料及自由飲水;中西結合A組采用補中益氣湯聯(lián)合腸外營養(yǎng),按大鼠與人體間等效劑量換算將補中益氣湯制備成0.66 g/mL藥液,每日灌胃1次,同時予以恒流微泵持續(xù)輸注靜脈營養(yǎng)液,連續(xù)干預10 d;中西結合B組采用補中益氣湯聯(lián)合腸內(nèi)營養(yǎng),按大鼠與人體間等效劑量換算將補中益氣湯制備成0.66 g/mL藥液,每日灌胃1次,同時予以營養(yǎng)液灌胃,熱量及含氮量同中西結合A組,連續(xù)干預10 d。

    1.2.3 檢測指標與方法

    Hb、TC、TG、LDL、IgM、IgA、IgG、IL-4、IL-6、TNF-ɑ檢測:干預結束后取各組大鼠尾緣靜脈血5 mL,使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測,利用抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合原理進行相關因子濃度的檢測。具體步驟如下:用0.05 mol/L pH值9.6碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10 μg/mL。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1 mL,4 ℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,3 min/次。加一定稀釋的待檢樣品0.1 mL于上述已包被之反應孔中,置37 ℃孵育1 h。然后洗滌。同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔。隨后在各反應孔中加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1 mL。37 ℃孵育0.5~1 h,洗滌。再于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1 mL,37 ℃10~30 min。于各反應孔中加入2 mol/L的硫酸溶液0.05 mL。試劑盒由廣州達安基因股份有限公司提供,顯色后采用492 nm波長,TMB反應產(chǎn)物檢測需要450 nm波長。檢測時一定要首先進行空白孔系統(tǒng)調零,用測定標本孔的吸收值與一組陰性標本測定孔平均值的比值(P/N)表示。以空白對照孔調零后測各孔A值,若大于規(guī)定的陰性對照A值的2.1倍,即為陽性。操作過程全部按照試劑盒說明書進行檢測。

    流式細胞檢測法T淋巴細胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)測定:干預結束后取各組大鼠尾緣靜脈血5 mL,提取外周血單核細胞(PBMC,1×106/mL)200 μL,置于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中,加入刺激劑佛波醇乙酯(PMA)及離子霉素、莫能霉素等工作液并混勻,置于37 ℃,5%CO2。培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4~6 h。用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗,離心收集細胞,加人5 μL異硫氰酸熒光素標記的CD3+、CD4+、CD8+,操作按試劑盒說明書進行。

    1.3 統(tǒng)計學方法

    采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行研究數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。計量資料用均數(shù)±標準差(±s)表示,組間比較采用兩樣本t檢驗或兩樣本秩和檢驗;組內(nèi)比較采用配對t檢驗或配對秩和檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 3組Hb、TC、TG、LDL比較

    3組大鼠Hb、TC、TG、LDL水平均低于正常值,中西結合組高于常規(guī)組,中西醫(yī)結合B組較A組升高(P<0.05)。見表1。

    2.2 3組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、IgG、IgM、IgA、IL-4、IL-6、TNF-ɑ比較

    3組大鼠干預前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、IgG、IgM、IgA、IL-4、IL-6、TNF-ɑ比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),干預后3組以上指標較治療前均顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),中西結合組低于高于常規(guī)組,其中中西醫(yī)結合B組較A組升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),干預后3組CD8+較治療前均顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),中西結合組低于高于常規(guī)組,其中中西醫(yī)結合B組較A組降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2~4。

    3 討論

    據(jù)目前臨床資料顯示肝硬化、肝癌患者多數(shù)合并營養(yǎng)不良及免疫系統(tǒng)紊亂,早期營養(yǎng)支持可有效促進患者病情恢復已被證實[7-9],目前臨床營養(yǎng)支持方式包括腸內(nèi)營養(yǎng)及腸外營養(yǎng)。本研究結果顯示補中益氣湯結合腸內(nèi)營養(yǎng)方式更可提高肝硬化肝癌切除術后機體的免疫功能,改善營養(yǎng)狀況。補中益氣湯首載金元時期醫(yī)學家李杲之《內(nèi)外傷辨惑論》,是益氣健脾之經(jīng)典名方。方中黃芪為君藥,入脾肺兩經(jīng),有補中益氣、升陽固表之功;人參、甘草、白術合用,共奏補氣健脾,為臣藥;君臣合用,可增強黃芪補益中氣之功,血為氣之母,癌癥患者病情日久傷津耗氣,加之手術二次損傷,更加氣虛之證,氣虛日久,營血亦虧,故加當歸養(yǎng)血和營,協(xié)人參、黃芪以補氣養(yǎng)血;陳皮理氣和胃,使諸藥補而不滯,共為佐藥[10-12]。方中加少量的升麻、柴胡升陽舉陷,協(xié)助君藥以提升中氣,《本草綱目》云:“升高引陽明之清氣上升,柴胡引少陽清氣上升,此乃稟賦虛弱,元氣虛餒,及勞役饑飽,生冷內(nèi)傷,脾胃引經(jīng)最要藥也”。諸藥合用,使氣虛得補,病體得安。研究證實,補中益氣湯可明顯提高重癥患者的營養(yǎng)狀態(tài),促進病情恢復[13]。

    機體的T淋巴細胞及B淋巴細胞是免疫系統(tǒng)的重要組成部分,二者相互協(xié)調、相互作用,共同調控機體的免疫。CD3+、CD4+、CD8+是T淋巴細胞亞群重要成員,參與機體的細胞免疫調節(jié),其中CD4+可有效提升機體抗腫瘤效應,CD8+是機體發(fā)揮免疫抑制的關鍵,CD4+/CD8+是可客觀體現(xiàn)肝癌術后患者免疫抑制程度的高低[14-16]。B淋巴細胞參與的是機體的體液免疫,IgA、IgM、IgG是B淋巴細胞重要成員[17-18]。機體的單核巨噬細胞系統(tǒng)及內(nèi)皮細胞均可分泌TNF-α,從而參與機體多種生物活性反應,其中最顯著的是免疫調節(jié),TNF-α廣泛參與機體免疫系統(tǒng)的多個環(huán)節(jié);IL-4及IL-6是機體重要的炎性反應遞質,與TNF-α均是機體重要的免疫細胞因子,是免疫調控的主要執(zhí)行者[19-20]。本研究結果顯示肝硬化肝癌模型大鼠接受Higgins法切除瘤體后免疫功能出現(xiàn)紊亂,3組大鼠治療前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、IgG、IgM、IgA、IL-4、IL-6、TNF-ɑ比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),干預后3組以上指標較治療前均顯著降低(P<0.05),中西結合組低于高于常規(guī)組,其中中西醫(yī)結合B組較A組升高(P<0.05),干預后3組CD8+較治療前均顯著升高(P<0.05),中西結合組低于高于常規(guī)組,其中中西醫(yī)結合B組較A組降低(P<0.05)。這一結果充分說明了補中益氣湯聯(lián)合營養(yǎng)支持確可明顯改善肝硬化肝癌術后大鼠的免疫功能,改善其營養(yǎng)狀態(tài),其中補中益氣湯結合腸內(nèi)營養(yǎng)方式療效更優(yōu)。

    經(jīng)過實驗研究證實補中益氣湯聯(lián)合腸內(nèi)營養(yǎng)即可改善肝硬化肝癌術后的營養(yǎng)狀況,又可提升其免疫功能。

    參考文獻

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    (2018-12-29收稿 責任編輯:楊覺雄)

    基金項目:河北省衛(wèi)生廳科研基金項目(07269)作者簡介:宋新梅(1977.05—),女,本科,副主任醫(yī)師,研究方向:臨床營養(yǎng)學,E-mail:2069638754@qq.com通信作者:馬曉勇(1976.10—),男,碩士,副主任醫(yī)師,研究方向:骨科疾病的治療,E-mail:811423587@qq.com

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