• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    電針對神經根型頸椎病大鼠PI3K/AKT信號通路的影響

    2019-09-10 07:50:56段曉英丁宏曹振強李艷雙王明禮
    世界中醫(yī)藥 2019年12期
    關鍵詞:造模電針頸椎病

    段曉英 丁宏 曹振強 李艷雙 王明禮

    摘要?目的:觀察探討電針對神經根頸椎?。–SR)大鼠PI3K/AKT信號轉導通路及細胞凋亡的變化。方法:SD大鼠60只,按照隨機數字表法分為空白組、模型組和電針組3組,每組20只。造模后第3天開始電針,取雙側頸夾脊穴,以一側穴位為一組,兩側均通過針柄接電針治療儀,疏密波,頻率,強度以大鼠四肢輕度抖動為度。1次/d,30 min/次,連續(xù)治療14 d后處死。采用YLS-3E型痛分析儀檢測大鼠外周神經模型感覺功能,采用蛋白免疫印跡法檢測PI3K/AKT通路表達情況,采用免疫組化法檢測BAX和BCL-2,同時以DNA斷裂的原位末端標記法(Tunel法)檢測細胞凋亡情況。結果:1)與空白組比較,模型組和電針組大鼠外周神經疼痛感覺功能機械痛閾值均下降(P<0.05),其中電針組的機械痛閾值較模型組高(P<0.05)。2)與空白組比較,模型組和電針組大鼠PI3K、p-AKT的蛋白表達均下調(P<0.05),電針組PI3K、p-AKT較模型組明顯上調(P<0.05),而3組的AKT和GAPDH蛋白表達差異均無統計學意義(P>0.05)。3)與空白組比較,電針組和模型組BAX明顯上調(P<0.05),BCL-2則明顯下調(P<0.05);而電針組BAX表達程度低于模型組(P<0.05),電針組BCL-2的表達程度高于模型組(P<0.05)。4)與空白組比較,模型組和電針組細胞調亡比例均增高,差異有統計學意義(P<0.05);電針組細胞調亡比例低于模型組,差異有統計學意義(P<0.05)。結論:電針雙側頸夾脊穴對CSR大鼠具有明顯的鎮(zhèn)痛作用,其機制可能與激活PI3K/AKT通路,激活下游BAX、BCL-2等生物因子抗細胞凋亡有關。

    關鍵詞?電針;神經根型;頸椎病;大鼠;PI3K;AKT;信號通路;動物實驗

    Effects of Electroacupuncture on PI3K/AKT Signaling Pathway in Rats with Cervical Spondylotic Radiculopathy

    Duan Xiaoying,Ding Hong,Cao Zhenqiang,Li Yanshuang,Wang Mingli

    (The Second Hospital of Jilin University,Changchun 130041,China)

    Abstract?Objective:To observe the changes of PI3K/AKT signal transduction pathway and apoptosis in rats with cervical spondylotic radiculopathy(CSR)treated by electroacupuncture.Methods:A total of 60 SD rats,SPF grade,weighing(250±20)g,half male and half female,were randomly divided into 3 groups:a blank group,a model group and an electro-acupuncture group with 20 rats in each group.On the 3rd day after modeling,electro-acupuncture was started.Neck Jiaji(EX-B2)acupoints on both sides were taken.One side of the acupoints was used as a group.Both sides were connected with electro-acupuncture therapeutic apparatus by needle handle.The frequency of dilatational and the intensity was moderate to the slight shaking of the limbs of rats.Once a day,30 minutes each time,after 14 consecutive days of treatment,they were executed.The sensory function of rat peripheral nerve model was detected by YLS-3E pain analyzer.The expression of PI3K/AKT pathway was detected by protein immunoblotting.BAX and BCL-2 were detected by immunohistochemistry.Apoptosis was detected by in situ end labeling(Tunel)with DNA fragmentation.Results:1)Compared with the blank group,the mechanical pain threshold of peripheral nerve pain sensory function in model group and electro-acupuncture group decreased(P<0.05).The mechanical pain threshold in electro-acupuncture group was higher than that in model group(P<0.05),suggesting that electro-acupuncture could effectively improve the peripheral nerve pain sensory function in CSR rats.2)Compared with the blank group,the expression of PI3K and p-AKT protein in the model group and electro-acupuncture group were down-regulated(P<0.05).Among them,PI3K and p-AKT in the electro-acupuncture group were up-regulated significantly(P<0.05),while the expression of PI3K and p-AKT protein in the AKT and GAPDH groups were not significantly different(P>0.05),suggesting that electro-acupuncture CSR rats activated PI3K/AKT signal transduction pathway.3)Compared with the blank group,BAX increased significantly in EA group and model group(P<0.05),while BCL-2 decreased significantly(P<0.05).BAX expression in EA group was lower than that in model group(P<0.05),and BCL-2 expression in EA group was higher than that in model group(P<0.05).4)Compared with the blank group,the proportion of apoptotic cells in the model group and the electro-acupuncture group increased with statistical significance(P<0.05); compared with the model group,the proportion of apoptotic cells in the electro-acupuncture group was lower than that in the model group,with statistical significance(P<0.05).Conclusion:Electro-acupuncture at bilateral cervical Jiaji points has obvious analgesic effect on CSR rats.The mechanism may be related to activating PI3K/AKT pathway,activating downstream biological factors such as BAX,BCL-2 and so on to resist cell apoptosis.

    Key Words?Electroacupuncture; Nerve root type; Cervical spondylosis; Rats; PI3K; AKT; Signal pathway; Animal experiment

    中圖分類號:R246.9文獻標識碼:Adoi:10.3969/j.issn.1673-7202.2019.12.020

    神經根型頸椎?。–ervical Spondylosis Radiculopathy,CSR)的主要臨床癥狀是頸部神經根性疼痛,病因主要是由于椎間盤退行性病變壓迫或刺激神經根而出現一系列分子生物學反應造成的[1-3],其中炎性反應遞質是引起CSR根性疼痛的重要原因[4-5]。近期研究[6-7]表明,炎性反應主要與細胞內大量傳導通路的參與有關,其中被廣泛證實主要在細胞存活中起調控作用的是磷脂酰肌醇3-激酶/絲氧酸-蘇氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信號通路。PI3K/AKT在哺乳動物中有3個亞型,其中Ⅲ型為調控細胞增殖和調亡的關鍵,通過肌醇環(huán)第3位點磷酸化底物,激活PI3K信號傳導通路的關鍵下游靶點AKT。p-AKT由約480個氨基酸殘基組成,包括PH、激酶催化和羥基端調控的3部分結構域,其中羥基端是疏水性的,在調節(jié)域的40個氨基酸序列中,含有非常重要的磷酸化位點絲氨酸473位點,這個位點的磷酸化是AKT完全活化的必要因素,當AKT被PDK2磷酸化為p-AKT后,PKB/AKT便具有了活性,而活化了的AKT通過磷酸化含有絲氨酸殘基的底物(如BAX及BCL-2等)而產生抗凋亡的分子生物學效應。有研究[8-9]證實,PI3K/AKT轉導途徑與脊神經細胞調亡關系甚密,研究人員在大鼠脊神經細胞培養(yǎng)中加入PI3K抑制劑后發(fā)現細胞的凋亡細胞比率上升。因此,PI3K/AKT傳導途徑對脊神經細胞的凋亡意義重大。CSR屬于中醫(yī)學“項痹”,中醫(yī)學常見的治療方法有針灸、電針、推拿等。有研究[10-11]表明,單純針刺雙側頸夾脊穴及電針雙側頸夾脊穴,均可緩解頸椎病頸痛患者的頸痛程度、提高日常生活活動能力;治療后及隨訪后,觀察組療效均優(yōu)于對照組。因此本研究采用電針雙側頸夾脊穴對CSR大鼠進行治療,觀察電針對CSR大鼠PI3K/AKT信號轉導通路和細胞凋亡的影響?,F報道如下。

    1?材料與方法

    1.1?材料

    1.1.1?動物?SD大鼠60只,SPF級,體質量(250±20)g,雌雄各半,相同飼養(yǎng)環(huán)境下,相同批次的喂養(yǎng)飼料,密閉飼養(yǎng),實驗大鼠均購自北京維通利華實驗動物技術有限公司[動物許可證號:SCXK(京)2016-0006]。飼養(yǎng)環(huán)境:溫度(26±0.5)℃,濕度(50±2.5)%。

    1.1.2?實驗儀器與試劑?型痛分析儀(北京眾實嘉合生物科技有限公司,型號:YLS-3E)檢測;電針治療儀(北京中西遠大科技有限公司,型號:G-6805);一次性使用無菌針灸針(規(guī)格0.35 mm×13 mm,華佗牌);渦旋振蕩儀(上海珂淮儀器有限公司,型號:I-4002-HCS);蛋白電泳及轉膜系統(Bio-Rad公司,型號:170-4070);臺式高速離心機(Eppendorf公司,型號:5810R);抗體p-AKT(貨號:4060T)、AKT(貨號:4685S)、PI3K(貨號:17366S)、BAX(貨號:5023T)、BCL-2(貨號:15071T)和GAPDH(貨號:5174T),全部購于CST公司;SDS-PAGE瓊脂糖凝膠(上海鈺博生物科技有限公司,批號YB81218-30);TUNEL檢驗試劑盒(美國Roche公司,批號11684795910)。

    1.2?方法

    1.2.1?分組與模型制備?SD大鼠60只,按隨機數字表法分為空白組、模型組、電針組3組,每組20只。參照竇夏睿氏法[12]進行CSR動物造模,首先將大鼠用10%水合氯醛,按0.35 m/100 g劑量進行常規(guī)麻醉,俯臥位固定,首先手觸下頸部附近定位最高棘突(T2),常規(guī)手術配皮和消毒后,于背部正中線由T2向上用手術剪快速做3 cm左右切口,用手術彎鑷不破壞肌肉組織的前提下,逐層鈍性分離頸后皮下組織和肌群,當充分暴露C6~T2左側椎弓時,采用顯微鑷輕輕挑開4個椎體的3個椎間隙(C6和C7、C7和T1、T1和T2)的黃韌帶和結締組織,再以尖嘴蚊式鉗輕輕鉗開C7左側椎弓,在充分暴露脊髓后,用神外顯微剝離器之神經剝離子將脊髓輕推至右側,再用顯微外科鑷將尼龍漁線(0.5 mm×15 mm,組織黏附性處理:尼龍漁線經過乙醇浸泡,無菌干燥后再浸泡至0.1%的多聚賴氨酸溶液中)輕輕沿脊髓縱軸放至C6-7、T1神經根腋下,動物造模中尤其需要注意插線時不要過度下壓,以免碰破椎靜脈叢導致椎管內大量出血。CSR造模完成后,逐層關閉傷口,病因手術針線進行縫合。

    1.2.2?干預方法

    1.2.2.1?空白組?正常飼養(yǎng),不做任何處置。

    1.2.2.2?模型組?于造模后第3天開始,每日抓取1次,不做針刺處置。

    1.2.2.3?電針組?造模后第3天開始電針,取穴:參照大鼠穴位圖譜[13],取雙側頸夾脊穴,常規(guī)消毒穴區(qū)皮膚,直刺進針,進針深度0.3~0.5 cm,輕捻轉提插后,以一側穴位為1組,兩側均通過針柄接電針治療儀,疏密波,頻率,強度以大鼠四肢輕度抖動為度。1次/d,30 min/次,連續(xù)治療14 d后處死。

    1.2.3?檢測指標與方法

    1.2.3.1?模型評價?參照文獻[14]將造模后的大鼠每日固定時間段(9:00至10:30)置于觀察箱,適應30 min后出現嘶叫、自叫等行為;同時參照Kawakami及Dubussion法評估大鼠步態(tài)障礙的方法:若出現受損傷足不持重或輕微持重、大鼠在行走時出現跛行;或受損足的大鼠走動時不著臺面,伴有明顯的足內收蜷縮畸形等現象說明造模成功。造模不成功的大鼠予以排除,不納入后續(xù)研究。

    1.2.3.2?外周神經模型感覺功能的檢測?采用YLS-3E型痛分析儀檢測大鼠外周神經模型感覺功能,在大鼠清醒狀態(tài)下測量機械性痛閾,首先將YLS-3E型痛分析儀上一個鈍頭有機玻璃圓錐體此安裝固定于大鼠足趾第3、4跖骨間,通過線性逐漸增大壓力,直到大鼠嘶叫掙扎為止,此時儀器自動記錄下的大鼠最后試圖抽回后爪壓力值(g)即為大鼠的機械痛閾,以此評估大鼠外周神經模型感覺功能。

    1.2.3.3?蛋白質印跡法檢測PI3K/AKT通路表達動物于造模電針干預14 d后,通過用10%水合氯醛過量麻醉致死,然后在4 ℃下將造模是C6-T2段壓尼龍魚線處脊髓及神經根剝離出來,并以用研磨器制成組織勻漿,在蛋白裂解液的作用下,充分提取蛋白后,在低溫離心機上高速離心(12 000 r/min),取上清液,-20 ℃冰箱保留代用。然后以考馬斯亮藍法測定樣品蛋白濃度,計算同等體積下,每組樣品的蛋白上樣量。取出所購買的SDS-PAGE瓊脂糖凝膠,加入電泳液并沒過短玻板,輕輕提取加樣孔梳,在第一加樣孔用移液器精密加入5 μL蛋白MARKER對蛋白分子量進行標記,其余加樣孔根據空白組、模型組和電針組依次根據已得上樣量進行加樣。然后以60 V開始蛋白電泳待蛋白均跑出濃縮膠后,以100 V繼續(xù)蛋白電泳至所有蛋白跑到底部停止,接著根據MARKER切出所檢測蛋白的分子量,裁剪出相應大小的濾紙和PVDF膜,根據三明治轉膜法,加入轉膜液常規(guī)轉膜,取出轉好蛋白的PVDF膜時需及時標記正反面。之后將PVDF膜在5%脫脂牛奶中常規(guī)封閉1 h,分別加入PI3K、p-AKT、AKT和GAPDH一抗在4 ℃冰箱中孵育過夜,次日用TBST緩沖液室溫搖床洗3次,10 min/次;加入對應二抗,搖床充分反應2 h后,用TBST緩沖液室溫搖床洗3次,10 min/次;ECL顯色試劑盒在避光黑暗處滴加在PVDF膜上,反應1 min后在CHEMIC成像儀上讀取蛋白條達圖像,并通過Image圖像處理軟件讀取蛋白條帶灰度值。

    1.2.3.4?免疫組化法檢測BAX、BCL-2的表達?動物于造模電針干預14 d后,通過用10%水合氯醛過量麻醉致死,然后在4 ℃下將造模是C6-T2段壓尼龍魚線處脊髓及神經根剝離出來放置于4%福爾馬林中,48 h后進行常規(guī)組織脫水和透明處理,然后在二甲苯與石蠟混合液中進行滲透和常規(guī)石蠟包埋,采用美國旋轉切片機連續(xù)切片4 μm厚度,每張切片均以防脫載玻片承載并于貼片后放置在60 ℃烤箱中烘烤5 h。常規(guī)脫蠟水化后,以枸櫞酸緩沖液在微波爐中加熱至沸騰,閉門燜5 min進行抗原修復,待冷卻至室溫后PBS泡洗后加封閉液封閉10 min,防水筆在切片周圍畫好隔離圈后,加入一抗BAX、BCL-24 ℃冰箱孵育過夜,次日于37 ℃烤箱中回溫45 min,PBS泡洗3次,5 min/次,加入對應二抗,室溫反應10 min,PBS泡洗3次,5 min/次,DAB顯色后再浸泡于蘇木素中復染30 s,常規(guī)脫水封片后在顯微鏡下觀察,計數,拍片。

    1.2.3.5?DNA斷裂的原位末端標記法(Tunel法)檢測細胞凋亡的情況?動物于造模電針干預14 d后,通過用10%水合氯醛過量麻醉致死,然后在4 ℃下將造模是C6-T2段壓尼龍魚線處脊髓及神經根剝離出來,同1.2.3.4免疫組化常規(guī)石蠟包埋,切片,脫蠟水化后,加入現配的3%H2O2,室溫孵育10 min后,蒸餾水浸泡洗3遍,每遍2 min;然后加入0.01MTBS和新鮮稀釋蛋白酶K混合液(1∶200)15 min,0.01MTBS浸泡洗3遍,每遍2 min;接著切片分別加入20 μL添加標記液(1 μL TDT、1 μL DIG-UTP和18 μL標記緩沖液)37 ℃孵育2 h,0.01MTBS浸泡洗3遍,每遍2 min;封閉液封閉30 min,1%DGX抗體溶液反應30 min,0.01MTBS浸泡洗3遍,每遍2 min;1%SBAC溶液反應30 min,DAB顯色,蘇木素復染,脫水,透明,封片,顯微鏡下觀察,計數,拍片。各組切片光鏡下隨機拍攝7個高倍視野,每個視野計數100個細胞計算細胞調亡率調亡率(%)=[(調亡細胞數/總細胞數)]×100%。

    1.3?統計學方法?采用SPSS 20.0統計軟件進行數據分析,3組數據同時符合正態(tài)分布和方差齊性,采用單因素方差分析,若其中一組數據不符合正態(tài)分布,則采用多組秩和檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

    2?結果

    2.1?各組CSR造模成功率?根據造模模型評價標準,模型組和電針組分別有18只和17只大鼠的CSR造模成功,納入后續(xù)研究。見圖1。

    2.2?電針對CSR大鼠外周神經疼痛感覺功能的影響?與空白組比較,模型組和電針組大鼠外周神經疼痛感覺功能機械痛閾值均下降(P<0.05),其中電針組機械痛閾值較模型組高(P<0.05),提示電針能有效改善CSR大鼠外周神經疼痛感覺功能。見表1。

    2.3?電針對PI3K/AKT通路的影響?與空白組比較,模型組和電針組大鼠PI3K、p-AKT的蛋白表達均下調(P<0.05),其中電針組的PI3K、p-AKT較模型組明顯上調(P<0.05),而3組的AKT和GAPDH蛋白表達差異均無統計學意義(P>0.05),提示電針CSR大鼠能激活PI3K/AKT信號轉導通路。見圖2。

    2.4?電針對BAX和BCL-2的影響?與空白組比較,電針組和模型組BAX明顯上調(P<0.05),而BCL-2則明顯下調(P<0.05);而電針組BAX表達程度低于模型組(P<0.05),電針組中BCL-2的表達程度高于模型組(P<0.05)。見圖3和表2。

    2.5?各組TUNEL的表達情況?與空白組比較,模型組和電針組細胞調亡比例均增高,差異有統計學意義(P<0.05);電針組與模型組比較,細胞調亡比例低于模型組,差異有統計學意義(P<0.05)。見圖4。

    3?討論

    頸椎病屬于中醫(yī)學“痹證”“項痹”等范疇。此病中醫(yī)學病因多由勞損或風寒濕等邪氣侵襲人體而誘發(fā),引起頸項部疼痛或上肢麻木等氣血運行不暢之表現,故也常稱其為“項強”。頸椎病最根本的病因當屬氣虛血瘀型項痹,病位在肝腎,致病特點可概括為本虛標實。目前,在頸椎病的治療方法中,中醫(yī)療法的針灸和推拿為首選。有研究人員采用電針頸夾脊穴治療CSR取得總有效率的療效更好,患者治療后外周神經疼痛癥狀療效明顯優(yōu)于治療前;若配合辨證取穴治療CSR,有效率達97%[15]。因此認為,電針治療CSR療效顯著。在本實驗中,電針的波形選擇疏密波,緣于本研究團隊在臨床診療CSR中發(fā)現疏密波的抗炎止痛效果明顯好于連續(xù)波和斷續(xù)波,同時研究[16]發(fā)現,電針的2 Hz和100 Hz的頻率分別能夠促進脊髓釋放不同阿片類物質起到鎮(zhèn)痛效應,而疏密波是高低2種頻率間歇使用,使脊髓能釋放包括強啡肽在內的4種己知阿片類物質,相互疊加起到更強的鎮(zhèn)痛消炎效果,可有效改善患者CSR的臨床癥狀;另外,研究人員通過對不同波形電針對頸性疼痛療效的觀察,不僅證實了疏密波對頸椎病的療效優(yōu)于連續(xù)波,而且發(fā)現疏密波可保持機體對電針治療的敏感度,防止耐受[17]。

    PI3K是一種胞內磷脂酰肌醇激酶,具有脂類激酶活性和蛋白激酶活性,可被受體酪氨酸激酶或G2蛋白耦聯受體激活,再通過第二信使(如BAX和BCL-2)在細胞的增殖、調亡等過程中起重要的作用。BAX和BCL-2是PI3K/AKT信號轉導通路上的2個關鍵因子,他們同屬BCL-2家族,參與細胞調亡的重要生物學因子。其中BAX是促細胞凋亡的因子,而BCL-2則與之相反,屬于抗細胞調亡的因子?,F代研究表明,BCL-2家族主要是以線粒體為靶器官,通過對線粒體的介導而對細胞凋亡過程起調控作用。BCL-2家族可分為3個結構功能各異的亞家族:一是BAX亞族,可促進細胞凋亡;二是BCL-2亞族,起到抑制凋亡的作用;三是BH3域蛋白亞族,和BAX一樣也是促進調亡發(fā)生的重要因子。BAX對細胞凋亡的調控可能通過誘發(fā)線粒體膜上供凋亡蛋白通過的離子通道開放和精確改變線粒體膜的通透性而釋放CytC;而BCL-2則是通過拮抗BAX,抑制細胞色素C與半胱氨酸蛋白酶激活而起到的抗凋亡作用[18]。本研究結果顯示:電針激活了PI3K/AKT通路,而BAX和BCL-2的免疫組化結果發(fā)現與空白組比較,電針組和模型組中BAX明顯上調(P<0.05),而BCL-2則明顯下調(P<0.05);而電針組中BAX表達程度低于模型組(P<0.05),電針組中BCL-2的表達程度高于模型組(P<0.05)。提示電針治療后激活PI3K/AKT通路,進而誘導下游BAX和BCL-2的分子生物學反應,其中通過下調BAX的表達和上調BCL-2的表達,從而起到對CSR的脊神經細胞的保護作用。

    綜上所述,本研究發(fā)現,電針雙側頸夾脊穴對CSR大鼠具有明顯的鎮(zhèn)痛作用,其機制可能與激活PI3K/AKT通路,下調下游BAX的表達和上調BCL-2的表達而起到抗脊神經細胞凋亡有關。

    參考文獻

    [1]Goel A,Dharurkar P,Shah A,et al.Facetal Fixation Arthrodesis as Treatment of Cervical Radiculopathy[J].World Neurosurg,2018,32(11):1821-1827.

    [2]Passias P G,Hasan S,Radcliff K,et al.Arm Pain Versus Neck Pain:A Novel Ratio as a Predictor of Post-Operative Clinical Outcomes in Cervical Radiculopathy Patients[J].Int J Spine Surg,2018,12(5):629-637.

    [3]曹世強,于金棟,張靜,等.神經根型頸椎病針灸治療研究進展[J].河北中醫(yī),2015,14(1):144-148.

    [4]Chen GL,Feng TT,Xu ST,et al.Clinical observation of percutaneous coblation nucleoplasty for the treatment of cervical spondylotic radiculopathy[J].Zhongguo Gu Shang,2018,31(8):729-734.

    [5]Diebo BG,Tishelman JC,Horn S,et al.The impact of mental health on patient-reported outcomes in cervical radiculopathy or myelopathy surgery[J].J Clin Neurosci,2018,54(23):102-108.

    [6]侯紅燕,黃凱,宋敏,等.從痰論治椎動脈型頸椎病的PI3K/Akt/mTOR信號調控機制研究進展[J].中醫(yī)正骨,2018,34(8):42-45.

    [7]柯玫瑰,廖軍,徐騰.電針大椎穴對大鼠頸椎病模型纖維環(huán)細胞FAK蛋白表達的影響[J].福建中醫(yī)藥大學學報,2013,23(4):25-28.

    [8]Matsuda S,Nakagawa Y,Tsuji A,et al.Implications of PI3K/AKT/PTEN Signaling on Superoxide Dismutases Expression and in the Pathogenesis of Alzheimer′s Disease[J].Diseases,2018,6(2):302-309.

    [9]Ouyang Z H,Wang W J,Yan Y G,et al.The PI3K/Akt pathway:a critical player in intervertebral disc degeneration[J].Oncotarget,2017,8(34):57870-57881.

    [10]黎汝定.電針加穴位注射在神經根型頸椎病中的應用及對肌電圖的影響[J].吉林中醫(yī)藥,2017,10(2):205-208.

    [11]王秀軍.電針聯合穴位注射血塞通治療神經根型頸椎病的臨床觀察[J].中國現代醫(yī)學雜志,2016,63(16):109-113.

    [12]竇夏睿,孫建寧,王威,等.中藥復方頸舒片對大鼠神經根型頸椎病模型感覺功能的影響[J].中國藥學雜志,2007,42(8):578-581.

    [13]華興邦,周浩良.大鼠穴位圖譜的研制[J].實驗動物與動物實驗,1991,10(1):1-5.

    [14]謝煒,趙偉宏,于林,等.川芎提取物對神經根型頸椎病模型大鼠根性疼痛的保護作用研究[J].廣東藥學院學報,2008,24(5):496-498.

    [15]崔啟生.電針與假電針治療頸椎病頸痛的對比研究[D].廣州:廣州中醫(yī)藥大學,2016.

    [16]陸黎,朱洪生.電針聯合地佐辛對瑞芬太尼誘發(fā)患者術后痛覺過敏的影響[J].中華麻醉學雜志,2017,37(12):1434-1437.

    [17]戢炳金,周佐強,黃明君.不同波形電針對頸椎病頸痛的療效觀察[J].保健醫(yī)學研究與實踐,2015,12(2):39-43.

    [18]Maes ME,Schlamp CL,Nickells RW.BAX to basics:How the BCL2 gene family controls the death of retinal ganglion cells[J].Prog Retin Eye Res,2017,57(1):1-25.

    (2018-12-12收稿?責任編輯:芮莉莉)

    猜你喜歡
    造模電針頸椎病
    腎陽虛證動物模型建立方法及評定標準研究進展
    頸椎病與老年癡呆
    脾腎陽虛型骨質疏松癥動物模型造模方法及模型評價
    濕熱證動物模型造模方法及評價研究
    游泳 趕走頸椎病
    頸椎病的簡便貼敷療法
    電針改善腦卒中患者膝過伸的效果
    低頻電針治療多囊卵巢綜合征30例
    電針“遠心”穴治療心腎不交型失眠療效觀察
    潤腸通便功能試驗中造模劑的選擇
    乱人视频在线观看| 久久久久久久久久久丰满| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲中文字幕日韩| 久久久成人免费电影| 午夜亚洲福利在线播放| 国产69精品久久久久777片| 99热精品在线国产| 亚洲成人久久性| 久久久久久久久大av| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 人妻系列 视频| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产精品一区二区在线观看99 | 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产成人freesex在线| 国产精品综合久久久久久久免费| 欧美精品国产亚洲| 1024手机看黄色片| 欧美潮喷喷水| 国产三级中文精品| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲国产精品成人综合色| 嘟嘟电影网在线观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 免费观看在线日韩| 国产成人精品婷婷| 在线免费十八禁| 日本一本二区三区精品| 边亲边吃奶的免费视频| 亚洲最大成人av| 国产美女午夜福利| 在线播放无遮挡| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲18禁久久av| 美女cb高潮喷水在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲一区二区三区色噜噜| 美女黄网站色视频| 国模一区二区三区四区视频| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 在线天堂最新版资源| 高清日韩中文字幕在线| 一本久久精品| 国内精品久久久久精免费| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产精华一区二区三区| 青春草视频在线免费观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 婷婷六月久久综合丁香| 综合色av麻豆| 亚洲精品影视一区二区三区av| 亚洲精品影视一区二区三区av| 午夜爱爱视频在线播放| 久久精品夜色国产| 精品久久久久久成人av| 午夜免费男女啪啪视频观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 日本黄色视频三级网站网址| 久久热精品热| 一区福利在线观看| 床上黄色一级片| 色播亚洲综合网| 久久久国产成人免费| 国产69精品久久久久777片| 丝袜喷水一区| av在线亚洲专区| 亚洲电影在线观看av| 国产精品福利在线免费观看| 我的女老师完整版在线观看| 校园人妻丝袜中文字幕| 成人性生交大片免费视频hd| 免费黄网站久久成人精品| 日韩国内少妇激情av| 黄片wwwwww| 毛片一级片免费看久久久久| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲av中文av极速乱| 中文字幕熟女人妻在线| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 免费看光身美女| 亚洲成人中文字幕在线播放| 97热精品久久久久久| 级片在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 丰满乱子伦码专区| 午夜福利成人在线免费观看| 在线天堂最新版资源| 国产成年人精品一区二区| 日本一二三区视频观看| 日韩欧美在线乱码| 三级经典国产精品| 成人综合一区亚洲| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 免费av毛片视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 性欧美人与动物交配| 亚洲天堂国产精品一区在线| 三级经典国产精品| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产三级在线视频| 久久6这里有精品| 在现免费观看毛片| 成人欧美大片| 亚洲真实伦在线观看| 国产视频首页在线观看| 干丝袜人妻中文字幕| 欧美日韩国产亚洲二区| 黄片wwwwww| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产精品一区www在线观看| 青春草视频在线免费观看| 日本黄大片高清| 免费电影在线观看免费观看| 春色校园在线视频观看| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产高潮美女av| 国产精品人妻久久久影院| 久久国内精品自在自线图片| 欧美最黄视频在线播放免费| 最好的美女福利视频网| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 丝袜喷水一区| 边亲边吃奶的免费视频| 黄色视频,在线免费观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产亚洲精品av在线| 亚洲自拍偷在线| 日本爱情动作片www.在线观看| 一级av片app| 亚洲最大成人手机在线| 麻豆一二三区av精品| 午夜福利在线在线| 亚洲国产精品成人综合色| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国内精品美女久久久久久| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 成人av在线播放网站| 欧美潮喷喷水| 99热这里只有精品一区| 干丝袜人妻中文字幕| 女人被狂操c到高潮| 国产淫片久久久久久久久| 久久午夜福利片| 一级二级三级毛片免费看| 国产一区二区激情短视频| 亚洲18禁久久av| 久久精品国产自在天天线| 午夜福利在线在线| 国产成人一区二区在线| 日韩一区二区视频免费看| 中文字幕免费在线视频6| 在线免费观看不下载黄p国产| 欧美色视频一区免费| 午夜福利在线观看吧| 一级二级三级毛片免费看| 麻豆国产97在线/欧美| 免费电影在线观看免费观看| 久久这里只有精品中国| 99热只有精品国产| 久久久久性生活片| 夫妻性生交免费视频一级片| 精品久久国产蜜桃| 午夜精品国产一区二区电影 | 我要看日韩黄色一级片| 亚洲不卡免费看| 在线观看免费视频日本深夜| 欧美性猛交黑人性爽| 免费看av在线观看网站| 99视频精品全部免费 在线| 国产一区亚洲一区在线观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 在线观看午夜福利视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 欧美bdsm另类| 在线观看午夜福利视频| 国产伦理片在线播放av一区 | 色视频www国产| 久久鲁丝午夜福利片| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 一本久久精品| 国产成人一区二区在线| 国产精品人妻久久久影院| 在线免费观看不下载黄p国产| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 色吧在线观看| 桃色一区二区三区在线观看| 人体艺术视频欧美日本| 免费看美女性在线毛片视频| 国产久久久一区二区三区| 亚洲电影在线观看av| 国产精品日韩av在线免费观看| 99热这里只有是精品在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 99在线人妻在线中文字幕| 免费在线观看成人毛片| 久久精品91蜜桃| 久久久精品94久久精品| 99久久人妻综合| 天堂中文最新版在线下载 | 国产在线精品亚洲第一网站| 久久人人精品亚洲av| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲在线自拍视频| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 午夜免费激情av| kizo精华| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产成人91sexporn| 国产精品福利在线免费观看| 麻豆成人av视频| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲精品自拍成人| avwww免费| 日韩精品有码人妻一区| 久久久久久久久大av| 成人综合一区亚洲| 联通29元200g的流量卡| 看十八女毛片水多多多| 日韩一本色道免费dvd| 久久亚洲精品不卡| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 99热这里只有是精品50| av黄色大香蕉| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产视频内射| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 欧美一区二区亚洲| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久欧美精品欧美久久欧美| 人人妻人人看人人澡| 欧美日本视频| kizo精华| 欧美激情国产日韩精品一区| 欧美日本视频| 久久人妻av系列| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产精品人妻久久久久久| 久久这里只有精品中国| 欧美丝袜亚洲另类| 欧美最新免费一区二区三区| 国产精品精品国产色婷婷| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 精品久久久久久久久久久久久| 日韩精品青青久久久久久| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产av在哪里看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产伦精品一区二区三区视频9| 97在线视频观看| 国产黄色小视频在线观看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 熟女人妻精品中文字幕| 国产老妇女一区| 久久综合国产亚洲精品| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产淫片久久久久久久久| 大香蕉久久网| 一个人免费在线观看电影| 亚洲人成网站高清观看| 日韩制服骚丝袜av| 国产精品伦人一区二区| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 两个人视频免费观看高清| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产高清激情床上av| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 日本成人三级电影网站| 69人妻影院| 一级毛片aaaaaa免费看小| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 看片在线看免费视频| 久久亚洲精品不卡| 如何舔出高潮| 欧美又色又爽又黄视频| 好男人在线观看高清免费视频| 国内精品一区二区在线观看| 免费看美女性在线毛片视频| 久久久久久久久中文| 日韩欧美三级三区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产精品人妻久久久久久| 国产高清视频在线观看网站| 精品人妻一区二区三区麻豆| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 日本五十路高清| 男人和女人高潮做爰伦理| 黄色一级大片看看| 嫩草影院新地址| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产伦精品一区二区三区视频9| 毛片一级片免费看久久久久| 国产在线精品亚洲第一网站| 在线观看av片永久免费下载| 免费大片18禁| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 色哟哟哟哟哟哟| 青青草视频在线视频观看| 久久精品国产亚洲av天美| av在线蜜桃| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 一级黄片播放器| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 色噜噜av男人的天堂激情| 成人无遮挡网站| 日韩视频在线欧美| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 成人av在线播放网站| 国产成人一区二区在线| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 天天躁日日操中文字幕| 国内精品久久久久精免费| 国产 一区精品| 国产视频内射| 村上凉子中文字幕在线| 成年免费大片在线观看| 免费看a级黄色片| 熟女人妻精品中文字幕| 我的老师免费观看完整版| 99riav亚洲国产免费| 亚洲经典国产精华液单| 夜夜爽天天搞| 亚洲色图av天堂| 日本av手机在线免费观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 免费看美女性在线毛片视频| 搞女人的毛片| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲内射少妇av| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产av麻豆久久久久久久| 亚洲av成人av| 啦啦啦韩国在线观看视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 少妇人妻精品综合一区二区 | 一级二级三级毛片免费看| 国产精品永久免费网站| 国产三级在线视频| 免费看日本二区| 只有这里有精品99| 国产亚洲欧美98| 国产三级在线视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久人人精品亚洲av| 成年免费大片在线观看| 日本色播在线视频| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲欧美精品综合久久99| 黄片wwwwww| 欧美成人免费av一区二区三区| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲成a人片在线一区二区| 久久99精品国语久久久| 亚洲精品456在线播放app| 国产三级在线视频| 亚洲av不卡在线观看| 久久国产乱子免费精品| 晚上一个人看的免费电影| 日韩中字成人| 内地一区二区视频在线| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产在视频线在精品| 久久久久久伊人网av| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 十八禁国产超污无遮挡网站| 变态另类丝袜制服| 波多野结衣巨乳人妻| 久久久久久久午夜电影| av在线亚洲专区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲性久久影院| 搡老妇女老女人老熟妇| 看十八女毛片水多多多| 男插女下体视频免费在线播放| 人体艺术视频欧美日本| 久久国内精品自在自线图片| 精品一区二区三区人妻视频| 午夜激情福利司机影院| 亚洲乱码一区二区免费版| 激情 狠狠 欧美| 日韩大尺度精品在线看网址| 久久久精品94久久精品| 欧美+日韩+精品| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产精品国产高清国产av| 男女视频在线观看网站免费| 女同久久另类99精品国产91| 国产亚洲精品久久久com| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 91久久精品电影网| 国产中年淑女户外野战色| 日日啪夜夜撸| 男人狂女人下面高潮的视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产av不卡久久| 可以在线观看毛片的网站| 欧美性猛交黑人性爽| 国产午夜精品论理片| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 久久久久国产网址| 久久午夜福利片| 日本黄色视频三级网站网址| 最近2019中文字幕mv第一页| 午夜福利在线在线| 亚洲av电影不卡..在线观看| 丰满的人妻完整版| 亚洲在线观看片| 久久精品影院6| 看片在线看免费视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲最大成人中文| 一本久久中文字幕| 欧美精品一区二区大全| 美女高潮的动态| 26uuu在线亚洲综合色| 日本在线视频免费播放| 国产男人的电影天堂91| 少妇的逼水好多| 综合色丁香网| 在线a可以看的网站| 午夜免费激情av| 成人毛片a级毛片在线播放| 麻豆乱淫一区二区| 午夜a级毛片| 天堂影院成人在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 一进一出抽搐动态| av国产免费在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 在线免费观看的www视频| 国产av麻豆久久久久久久| 99九九线精品视频在线观看视频| 九草在线视频观看| 国产亚洲精品久久久com| 日韩一本色道免费dvd| 成人鲁丝片一二三区免费| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲av男天堂| 成人午夜精彩视频在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 少妇高潮的动态图| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产精品综合久久久久久久免费| 一级av片app| 国产成人91sexporn| 99精品在免费线老司机午夜| 欧美日韩乱码在线| 全区人妻精品视频| 最近2019中文字幕mv第一页| 日韩中字成人| 天堂网av新在线| 中国国产av一级| 久久久久国产网址| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲最大成人av| 伦理电影大哥的女人| 给我免费播放毛片高清在线观看| 波多野结衣高清无吗| 99久国产av精品| 欧美日韩在线观看h| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 天堂中文最新版在线下载 | 18禁在线播放成人免费| 成人欧美大片| 变态另类丝袜制服| 免费观看精品视频网站| 国产精品,欧美在线| 精品人妻一区二区三区麻豆| 搡女人真爽免费视频火全软件| 一级av片app| 国产 一区精品| 男人狂女人下面高潮的视频| 亚洲自拍偷在线| 欧美丝袜亚洲另类| av天堂在线播放| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 三级国产精品欧美在线观看| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲电影在线观看av| 免费观看的影片在线观看| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚洲av二区三区四区| 国产亚洲精品久久久com| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 亚洲美女搞黄在线观看| АⅤ资源中文在线天堂| 搞女人的毛片| 国内精品宾馆在线| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产av一区在线观看免费| 成人特级av手机在线观看| www.av在线官网国产| 禁无遮挡网站| 深夜a级毛片| 久久久a久久爽久久v久久| 青春草亚洲视频在线观看| 一个人看的www免费观看视频| 午夜爱爱视频在线播放| 最新中文字幕久久久久| 免费观看精品视频网站| 一区二区三区四区激情视频 | 又爽又黄无遮挡网站| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 亚洲av男天堂| 日韩成人伦理影院| 国产精品久久视频播放| 日日啪夜夜撸| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 激情 狠狠 欧美| 欧美日韩综合久久久久久| 欧美xxxx性猛交bbbb| 日韩中字成人| 久久这里有精品视频免费| 国产高清有码在线观看视频| 一区二区三区高清视频在线| 午夜精品国产一区二区电影 | 日本一本二区三区精品| 日本免费a在线| 高清午夜精品一区二区三区 | 久久久久久伊人网av| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲精品久久国产高清桃花| 久久99精品国语久久久| 国产 一区 欧美 日韩| 嫩草影院精品99| av天堂中文字幕网| 精品无人区乱码1区二区| 丰满的人妻完整版| 久久久久免费精品人妻一区二区| 美女cb高潮喷水在线观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产大屁股一区二区在线视频| 偷拍熟女少妇极品色| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 99热这里只有是精品在线观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚洲乱码一区二区免费版| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲七黄色美女视频| 身体一侧抽搐| 99热这里只有精品一区| 九九热线精品视视频播放| 国产老妇女一区| 欧美丝袜亚洲另类| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产毛片a区久久久久| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 性色avwww在线观看| 亚洲欧美精品专区久久| 国内精品久久久久精免费| 欧美在线一区亚洲| 在线观看av片永久免费下载| 国产在视频线在精品| 欧美日韩乱码在线| 欧美精品一区二区大全| 别揉我奶头 嗯啊视频| 一级二级三级毛片免费看| 永久网站在线| 99热这里只有精品一区| or卡值多少钱| 永久网站在线| 亚洲人成网站在线播| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 欧美区成人在线视频| 成人二区视频| 天堂√8在线中文| 国产精品国产高清国产av| 午夜激情福利司机影院| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲国产精品合色在线| 国产美女午夜福利| 国产精品久久久久久精品电影| 久久久久久久久久成人| 亚洲欧美日韩高清专用| 亚洲美女视频黄频| 久久久久免费精品人妻一区二区| 好男人在线观看高清免费视频| 国产高清激情床上av| 国产午夜精品论理片| 91麻豆精品激情在线观看国产| 免费看光身美女| 人妻少妇偷人精品九色| 我的女老师完整版在线观看| 搞女人的毛片| 国产麻豆成人av免费视频| 99热网站在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久精品夜色国产| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久久久久久久久久免费av| 人妻系列 视频| 一边亲一边摸免费视频| 黄色日韩在线|