人參真菌菌質(zhì)的乙酸乙酯部位化學(xué)成分研究

常百金 邱智東 張涵雪 關(guān)安琦 劉瑩瑩 徐偉

中圖分類號(hào) R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2019）02-0202-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.02.12

摘 要 目的：對(duì)生物轉(zhuǎn)化得到的人參真菌菌質(zhì)的乙酸乙酯部位化學(xué)成分進(jìn)行研究，以期獲得活性更好、毒性更低的化合物，為新藥研發(fā)及人參藥材的二次開(kāi)發(fā)利用提供參考。方法：將代號(hào)為C-1的真菌種子液加至含有人參的培養(yǎng)基中，生物轉(zhuǎn)化得到人參真菌菌質(zhì)；稱取干燥人參真菌菌質(zhì)，以70%乙醇溶劑提取濃縮制得稠膏；稠膏加入水混懸，采用乙酸乙酯萃取，獲得乙酸乙酯部位。采用薄層色譜、硅膠柱色譜、ODS柱色譜以及半制備液相對(duì)上述乙酸乙酯部位進(jìn)行分離純化，根據(jù)理化性質(zhì)以及氫譜（1H-NMR）和碳譜（13C-NMR）數(shù)據(jù)鑒定化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從人參真菌菌質(zhì)的乙酸乙酯部位分離、鑒定得到8個(gè)化合物，分別為人參皂苷Rs7（1）、人參皂苷Rk3（2）、齊墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3）、人參皂苷Rs6（4）、20（R）-人參皂苷Rh1（5）、人參皂苷F1（6）、三七皂苷R2（7）、人參皂苷F4（8）。結(jié)論：上述化合物均在人參真菌菌質(zhì)中發(fā)現(xiàn)，其中化合物3、5、6、7、8為經(jīng)生物轉(zhuǎn)化后得到的，證明生物轉(zhuǎn)化技術(shù)能改變?nèi)藚⒌幕瘜W(xué)成分。

關(guān)鍵詞 人參；生物轉(zhuǎn)化；乙酸乙酯部位；化學(xué)成分

ABSTRACT OBJECTIVE： To study the chemical constituents of ethyl acetate fraction of Panax ginseng fungal substance obtained by biotransformation， in order to obtain compounds with better activity and lower toxicity， and to provide reference for new drug R&D and the second development and utilization of P. ginseng. METHODS： Fungus of Code Name C-1 seed solution was added into the culture medium containing P. ginseng， and P. ginseng fungal substance was obtained by biotransformation； the dried P. ginseng fungal substance were weighed， extracting with 70% ethanol solvent and concentrating to obtain thick paste. The thick paste was added with water suspension and extracted with ethyl acetate to obtain ethyl acetate fraction. TLC， silica gel column chromatography， ODS column chromatography and semi-prepared liquid phase were used to isolate and purify above ethyl acetate fraction， and the compound structure was identified according to physicochemical properties， hydrogen spectrum （1H-NMR） and carbon spectrum （13C-NMR） data. RESULTS： Eight compounds were isolated and identified from the ethyl acetate fraction of P. ginseng fungal substance and identified as ginsenoside Rs7 （1）， ginsenoside Rk3 （2）， oleanolic acid-28-O-β-D-glucopyranoside （3）， ginsenoside Rs6 （4）， 20（R）-ginsenoside Rh1 （5）， ginsenoside F1 （6）， notoginsenoside R2 （7） and ginsenoside F4 （8）. CONCLUSIONS： All the above compounds were found in P. ginseng fungal substance， which compounds 3， 5， 6， 7 and 8 were obtained after biotransformation， proving that biotransformation technology can change the chemical composition of ginseng.

KEYWORDS Panax ginseng； Biotransformation； Ethyl acetate fraction； Chemical constituents

人參為五加科人參屬多年生草本植物人參（Panax ginseng C. A. Mey.）的干燥根[1]，有“百草之王”之稱[2]，具有“補(bǔ)五臟、安精神、定魂魄、止驚悸、除邪氣、開(kāi)心益智、明目，久服輕身延年”的功效[3]。對(duì)中藥材進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，可以改變其原有藥性、降低藥物毒性、增強(qiáng)或產(chǎn)生新的功效、擴(kuò)大臨床應(yīng)用范圍[4]。長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)邱智東教授課題組前期利用不同的菌種對(duì)人參、三七等藥材進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，通過(guò)生物轉(zhuǎn)化提高了藥材中主要活性成分稀有皂苷的含量，并發(fā)現(xiàn)了一些新的化合物，藥理試驗(yàn)證實(shí)生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物治療效果有較大提高[5-9]。在前期的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，乙酸乙酯部位的活性成分及新化合物較多[5-7]，故本研究先采用中藥化學(xué)方法研究人參真菌菌質(zhì)乙酸乙酯部位的化學(xué)成分，后續(xù)會(huì)對(duì)其他部位進(jìn)行研究，以期得到活性更好、毒性更低或藥用價(jià)值更高的化合物，為新藥研發(fā)及藥材的二次開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Rotavapor R-220型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）；R-201型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申順生物科技有限公司）；LSY-電熱恒溫水浴鍋（江蘇常熟醫(yī)療器械廠）；LC-2130型日立高效液相色譜儀（上海天美科學(xué)儀器有限公司）；LC-15C型高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；BP211D型電子分析天平（德國(guó)Sartorius公司）；KQz3200E型超聲波清洗機(jī)（天鵬電子新技術(shù)有限公司）；AVANCE Ⅲ 500傅里葉變換核磁共振儀（德國(guó)Bruker公司）；DNP-9082BS-Ⅲ電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司）；MD200-2型氮吹儀（杭州奧盛儀器有限公司）；DZF-6050型真空干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試劑

柱色譜硅膠（100～200目，批號(hào)：0140027）、硅膠G薄層層析板（批號(hào)：20140520）均由青島海洋化工有限公司提供；AM12S05-3010WT YMC-Pack ODS-AM半制備色譜柱（300 mm×10 mm，粒徑：5 μm，日本YMC公司）；AM12S05-3010WT YMC-Pack ODS- AM色譜柱（300 mm×10 mm，粒徑：5 μm，批號(hào)：1030000103，北京綠百草科技發(fā)展有限公司）；其他有機(jī)試劑均為分析純；水為純化水。

1.3 菌株

代號(hào)為C-1的真菌菌株（中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心）。

1.4 藥材

人參藥材（批號(hào)：20150903）于2015年購(gòu)自吉林省仙草醫(yī)藥藥材有限公司，經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院翁麗麗教授鑒定為五加科植物人參（Panax ginseng C. A. Mey.）的干燥根及根莖。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 部位提取

根據(jù)優(yōu)選出的適宜代號(hào)為C-1的真菌生長(zhǎng)的最佳馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基配方：取葡萄糖2%，磷酸二氫鉀0.3%，硫酸鎂0.3%，蛋白胨1%，酵母浸粉1%，維生素B1 0.01%，以上物質(zhì)置于大燒杯中，加入適量的熱水?dāng)嚢枋谷芑?，待液體培養(yǎng)基冷卻后，分裝于250 mL錐形瓶中，每瓶100 mL，包扎后置于壓力蒸汽滅菌器中，于121 ℃滅菌30 min。取出，冷卻后，置于無(wú)菌室中，紫外滅菌40 min，日光燈照射10 min后，在無(wú)菌操作臺(tái)中接入保存好的斜面菌種。將接有斜面菌種的液體培養(yǎng)基放入恒溫振蕩（150 r/min）培養(yǎng)箱中，在（26±1） ℃的條件下培養(yǎng)，待種子液變?yōu)闇啙狃こ沓实S色時(shí)，取出，備用。

將人參粉碎，過(guò)八號(hào)篩，得到人參粗粉6.0 kg，加1.5倍水（倍量按L/kg計(jì)，以下同），分裝于500 mL錐形瓶中，于滅菌鍋121 ℃滅菌1 h，室溫冷卻，加入經(jīng)培養(yǎng)得到的代號(hào)為C-1的真菌種子液各50 mL，于（26±1）℃、相對(duì)濕度為65%的培養(yǎng)箱中發(fā)酵12 d，得到人參真菌菌質(zhì)，干燥。稱取干燥人參真菌菌質(zhì)4.0 kg，粉碎，以7倍量70%乙醇溶劑提取3次（2 h/次），提取液濾過(guò)、合并、減壓濃縮得到稠膏。將稠膏加入適量的水混懸，采用等體積石油醚、乙酸乙酯及水飽和正丁醇溶液萃取各3次，分別獲得石油醚部位13 g、乙酸乙酯部位35 g、水飽和正丁醇部位303 g。

2.2 乙酸乙酯部位的分離純化

取乙酸乙酯部位浸膏，經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（100 ∶ 0、100 ∶ 2、100 ∶ 5、100 ∶ 10、100 ∶ 20、100 ∶ 50，V/V）梯度洗脫，得到78個(gè)流分，經(jīng)薄層色譜檢視后合并，得到12個(gè)流分。其中，第6、8、11個(gè)流分分別經(jīng)開(kāi)放式ODS柱，以水-甲醇（1 ∶ 0、7 ∶ 3、5 ∶ 5、3 ∶ 7、0 ∶ 1，V/V）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢視后合并，第6、8、11個(gè)流分分別得到16個(gè)流分（Fr.1～Fr.16）、11個(gè)流分（Fr.17～Fr.27）以及7個(gè)流分（Fr.28～Fr.34）。Fr.12經(jīng)半制備液相色譜，以水-甲醇（2.3 ∶ 7.7，V/V）等度洗脫，經(jīng)硅膠柱色譜純化、薄層色譜檢視，合并流分后得到化合物1（4.6 mg）和化合物2（23.7 mg）；Fr.13經(jīng)半制備液相色譜，以水-甲醇（1.5 ∶ 8.5，V/V）等度洗脫，經(jīng)硅膠柱色譜純化、薄層色譜檢視，合并流分后得到化合物3（64.1 mg）和化合物4（6.9 mg）；Fr.22經(jīng)半制備液相色譜，以水-甲醇（3 ∶ 7，V/V）等度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢視，合并流分后得到化合物5（59.3 mg）和化合物6（13.1 mg）；Fr.33經(jīng)半制備液相色譜，以水-甲醇（3.3 ∶ 6.7，V/V）等度洗脫，經(jīng)硅膠柱色譜純化、薄層色譜檢視，合并流分后得到化合物7（4.8 mg）；Fr.34經(jīng)半制備液相色譜，以水-甲醇（2.2 ∶ 7.8，V/V）等度洗脫，經(jīng)硅膠柱色譜純化、薄層色譜檢視，合并流分后得到化合物8（9.8 mg）。

2.3 波譜條件

氫譜（1H-NMR）提供質(zhì)子類型及其化學(xué)環(huán)境、氫分布（各官能團(tuán)上H的相對(duì)數(shù)目）、核間關(guān)系。碳譜（13C-NMR）提供化合物中碳的個(gè)數(shù)和每個(gè)碳的化學(xué)位移，給出有特征的端基碳原子，判斷伯仲叔季碳。通過(guò)1H-NMR（C5D5N，500 MHz）譜中給出特征信號(hào)（甲基質(zhì)子信號(hào)、連氧碳上氫的質(zhì)子信號(hào)、烯氫質(zhì)子信號(hào)以及糖的端基質(zhì)子信號(hào)）和13C-NMR（C5D5N，150 MHz）譜中給出特征信號(hào)（甲基碳信號(hào)、烯碳信號(hào)、葡萄糖端基碳信號(hào)）初步確定化合物類型及結(jié)構(gòu)，然后檢索相關(guān)參考文獻(xiàn)，與參考文獻(xiàn)中化合物數(shù)據(jù)基本一致時(shí)，即確定二者為同一物質(zhì)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1～8的結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。

化合物1：白色無(wú)定形粉末（甲醇），分子式為C38H62O9，熔點(diǎn)110～112 ℃，三萜皂苷類特征性反應(yīng)均顯陽(yáng)性。1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ： 0.95（3H，s，H-30），1.06（3H，s，H-19），1.28 （3H，s，H-18），1.54（3H，s，H-29），1.58（3H，s，H-27），1.64（3H，s，H-26），2.02（3H，s，H-28），2.06（3H，s，6′-COCH3），3.51（1H，d，J= 10.5 Hz，H-3）、3.92（1H，m，H-12），4.41（1H，m，H-6），4.91（1H，s，H-21a）、5.14（1H，s， H-21b），5.28（1H，brt，J=7.0 Hz，H-24），5.02（1H，d，J=8.0 Hz，H-1′） 。13C-NMR（C5D5N，150 MHz）δ：39.9（C-1），28.3（C-2），79.0（C-3），40.7（C-4），61.8（C-5），80.1（C-6），46.0（C-7），41.8（C-8），51.1（C-9），40.2（C-10），33.1（C-11），72.8（C-12），52.6（C-13），51.6（C-14），31.9（C-15），30.4（C-16），48.6（C-17），17.3（C-18），17.8（C-19），55.8（C-20），108.6（C-21），33.2（C-22），27.5（C-23），125.7（C-24），131.7（C-25），26.1（C-26），18.2（C-27），31.1（C-28），16.9（C-29），18.2（C-30），106.3（C-1′ ），75.8（C-2′），79.6（C-3′），71.8（C-4′），75.5（C-5′），65.2（C-6′），171.3（C-1″ ），21.3（C-2″ ）。結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻(xiàn)[10]參考數(shù)據(jù)基本一致，經(jīng)過(guò)綜合分析后，鑒定此化合物為人參皂苷Rs7。

化合物2：白色粉末（甲醇），分子式為C36H60O8，熔點(diǎn)167～170 ℃，三萜皂苷類特征性反應(yīng)均顯陽(yáng)性。1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ：0.82（3H，s，H-30），1.03（3H，s，H-19），1.22（3H，s，H-18），1.57（3H，s，H-29），1.59（3H，s，H-27），1.65（3H，s，H-26），2.07（3H，s，H-28），3.58（1H，m，H-3），4.51（1H，m，H-6），3.94（1H，m，H-12），5.10（1H，s，H-21），4.88（1H，s，H-21），5.27（1H，t，J=5.0 Hz，H-24），5.02（1H，d，J=8.0 Hz，H-1′）。13C-NMR（C5D5N，150 MHz）δ：39.9（C-1），28.3（C-2），79.0（C-3），40.8（C-4），61.9（C-5），80.4（C-6），45.7（C-7），41.7（C-8），51.1（C-9），40.1（C-10），33.1（C-11），72.8（C-12），52.5（C-13），51.5（C-14），32.9（C-15），31.1（C-16），48.7（C-17），18.1（C-18），18.1（C-19），155.8（C-20），108.5（C-21），34.1（C-22），27.4（C-23），125.7（C-24），131.6（C-25），26.1（C-26），17.7（C-27），32.1（C-28），16.7（C-29），17.1（C-30），106.4（C-1′），75.9（C-2′），80.1（C-3′），72.2（C-4′），78.5（C-5′），63.5（C-6′）。結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻(xiàn)[11]參考數(shù)據(jù)基本一致，經(jīng)過(guò)綜合分析后，鑒定此化合物為人參皂苷Rk3。

化合物3：白色針晶（甲醇），分子式為C36H58O8，熔點(diǎn)180～183 ℃，三萜皂苷類特征性反應(yīng)均顯陽(yáng)性。1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ：1.07（3H，s，H-27），1.09（3H，s，H-25），1.10（3H，s，H-26），1.21（3H，s，H-23），1.32（3H，s，H-30），1.41（3H，s，H-29），1.43（3H，s，H-24），3.72（1H，m，H-3），5.64（1H，s，H-12），6.52（1H，d，J=8.0 Hz，H-1′）。13C-NMR（C5D5N，150 MHz）δ：39.3（C-1），28.4（C-2），78.4（C-3），39.7（C-4），56.2（C-5），19.2（C-6），33.5（C-7），40.3（C-8），48.5（C-9），37.7（C-10），24.2（C-11），123.2（C-12），144.5（C-13），42.5（C-14），28.6（C-15），23.8（C-16），47.3（C-17），42.1（C-18），46.6（C-19），31.1（C-20），34.3（C-21），32.9（C-22），29.1（C-23），16.9（C-24），16.0（C-25），17.9（C-26），26.4（C-27），176.8（C-28），33.4（C-29），24.0（C-30），96.1（C-1′），74.4（C-2′），79.2（C-3′），71.4（C-4′），79.7（C-5′），62.5（C-6′）。結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻(xiàn)[12-13]參考數(shù)據(jù)基本一致，經(jīng)過(guò)綜合分析后，鑒定此化合物為齊墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物4：白色粉末（甲醇），分子式為C38H62O9，熔點(diǎn)165～166 ℃，三萜皂苷類特征性反應(yīng)均顯陽(yáng)性。1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ：0.95（3H，s，H-30），1.05（3H，s，H-19），1.28（3H，s，H-18），1.54（3H，s，H-29），1.56（3H，s，H-27），1.60（3H，s，H-26），1.83（3H，s，H-21），2.04（3H，s，H-28），2.05（3H，s，6′-COCH3），3.50（1H，m，H-3），4.40（1H，t，J=14.5 Hz，H-6），3.99（1H，m，H-12），5.07（1H，d，J=6.5 Hz，H-1′）。13C-NMR（C5D5N，150 MHz）δ：40.0（C-1），28.3（C-2），78.9（C-3），40.7（C-4），61.8（C-5），79.6（C-6），46.0（C-7），41.8（C-8），50.9（C-9），40.2（C-10），32.7（C-11），72.9（C-12），50.8（C-13），51.3（C-14），33.1（C-15），29.2（C-16），50.0（C-17），17.4（C-18），17.8（C-19），140.4（C-20），13.5（C-21），124.2（C-22），27.8（C-23），124.2（C-24），131.5（C-25），26.1（C-26），18.1（C-27），31.9（C-28），16.9（C-29），16.9（C-30），106.3（C-1′），75.5（C-2′），80.1（C-3′），71.8（C-4′），75.6（C-5′），65.5（C-6′），171.2（C-1″），21.3（C-2″）。結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻(xiàn)[14]參考數(shù)據(jù)基本一致，經(jīng)過(guò)綜合分析后，鑒定此化合物為人參皂苷Rs6。

化合物5：白色粉末（甲醇），分子式為C36H62O9，熔點(diǎn)192～194 ℃，三萜皂苷類特征性反應(yīng)均顯陽(yáng)性。1H-NMR（C5D5N，600 MHz）δ：0.85（3H，s，H-30），1.04（3H，s，H-19），1.22（3H，s，H-18），1.37（3H，s，H-21），1.60（3H，s，H-29），1.62（3H，s，H-27），1.67（3H，s，H-26），2.06（3H，s，H-28），2.02（1H，m，H-3），3.91（1H，m，H-12），4.43（1H，td，J=10.2，3.0 Hz，H-6），5.03（1H，d，J=7.8 Hz，H-1′），5.28（1H，brt，J=7.2 Hz，H-24）。13C-NMR（C5D5N，150 MHz）δ：39.7（C-1），28.3（C-2），78.9（C-3），40.7（C-4），61.8（C-5），78.5（C-6），45.5（C-7），41.4（C-8），50.5（C-9），40.0（C-10），32.5（C-11），71.3（C-12），49.2（C-13），52.0（C-14），31.7（C-15），26.9（C-16），50.9（C-17），17.7（C-18），18.0（C-19），73.4（C-20），22.9（C-21），43.5（C-22），23.0（C-23），126.4（C-24），131.1（C-25），26.2（C-26），18.0（C-27），32.1（C-28），16.7（C-29），17.4（C-30），106.3（C-1′），75.8（C-2′），80.4（C-3′），72.2（C-4′），80.0（C-5′），63.4（C-6′）。結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻(xiàn)[15-16]參考數(shù)據(jù)基本一致，經(jīng)過(guò)綜合分析后，鑒定此化合物為20（R）-人參皂苷Rh1。

化合物6：白色無(wú)定形粉末（甲醇），分子式為C36H62O9，熔點(diǎn)175～177 ℃，三萜皂苷類特征性反應(yīng)均顯陽(yáng)性。1H-NMR（C5D5N，600 MHz）δ：0.95（3H，s，H-30），0.99（3H，s，H-19），1.07（3H，s，H-29），1.43（3H，s，H-18），1.57（3H，s，H-26），1.57（3H，s，H-27），1.60（3H，s，H-21），1.97（3H，s，H-28），3.52（1H，d，J=7.2 Hz，H-3），4.00（1H，t，J=7.8，4.2 Hz，H-6），3.91（1H，m，H-12），5.18（1H，d，J=7.2 Hz，H-1′），5.22（1H，s，H-24）。13C-NMR（C5D5N，150 MHz）δ：39.7（C-1），29.4（C-2），78.8（C-3），40.6（C-4），62.0（C-5），68.0（C-6），47.7（C-7），41.5（C-8），50.2（C-9），40.6（C-10），31.1（C-11），70.6（C-12），49.4（C-13），51.7（C-14），31.2（C-15），26.9（C-16），52.0（C-17），18.1（C-18），17.9（C-19），83.6（C-20），22.7（C-21），36.4（C-22），23.6（C-23），126.2（C-24），131.3（C-25），26.1（C-26），18.1（C-27），32.3（C-28），16.8（C-29），17.7（C-30），98.6（C-1′），75.5（C-2′），79.6（C-3′），71.9（C-4′），78.6（C-5′），63.1（C-6′）。結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻(xiàn)[17-18]參考數(shù)據(jù)基本一致，經(jīng)過(guò)綜合分析后，鑒定此化合物為人參皂苷F1。

化合物7：白色粉末（甲醇），分子式為C41H70O13，熔點(diǎn)200～202 ℃，三萜皂苷類特征性反應(yīng)均顯陽(yáng)性。1H-NMR（C5D5N，600 MHz）δ：0.81（3H，s，H-30），0.97（3H，s，H-19），1.16（3H，s，H-18），1.40（3H，s，H-21），1.46（3H，s，H-29），1.63（3H，s，H-27），1.66（3H，s，H-26），2.08（3H，s，H-28），3.50（1H，dd，J=11.4，4.2 Hz，H-3），4.31（1H，m，H-6），3.89（1H，m，H-12），4.95（1H，d，J=7.8 Hz，H-1′），5.77（1H，d，J=6.6 Hz，H-1″），5.34（1H，t，J=7.2 Hz，H-24）。13C-NMR（C5D5N，150 MHz）δ：39.8（C-1），28.2（C-2），79.2（C-3），40.6（C-4），61.7（C-5），80.6（C-6），45.4（C-7），41.5（C-8），50.5（C-9），40.0（C-10），32.5（C-11），71.4（C-12），48.6（C-13），52.0（C-14），31.6（C-15），27.4（C-16），55.1（C-17），18.0（C-18），18.0（C-19），73.3（C-20），26.2（C-21），36.2（C-22），23.4（C-23），126.7（C-24），131.1（C-25），27.2（C-26），17.7（C-27），32.1（C-28），17.1（C-29），17.2（C-30），103.9（C-1′），80.3（C-2′），78.4（C-3′），72.1（C-4′），79.8（C-5′），63.3（C-6′），105.3（C-1″），76.2（C-2″），79.2（C-3″），71.6（C-4″），67.6（C-5″）。結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻(xiàn)[19-20]參考數(shù)據(jù)基本一致，經(jīng)過(guò)綜合分析后，鑒定此化合物為三七皂苷R2。

化合物8：白色粉末（甲醇），分子式為C42H70O12，熔點(diǎn)177～180 ℃，三萜皂苷類特征性反應(yīng)均顯陽(yáng)性。1H-NMR（C5D5N，600 MHz）δ：0.95（3H，s，H-30），0.96（3H，s，H-19），1.23（3H，s，H-18），1.23（3H，s，H-29），1.35（3H，s，H-27），1.60（3H，s，H-26），1.77（3H，s，H-21），2.10（3H，s，H-28），3.45（1H，dd，J=11.4，4.2 Hz，H-3），4.52（1H，m，H-6 ），3.97（1H，brs，H-12），5.26（1H，d，J=6.6 Hz，H-1′）。13C-NMR（C5D5N，150 MHz）δ：39.9（C-1），28.2（C-2），78.7（C-3），40.4（C-4），61.2（C-5），74.8（C-6），46.6（C-7），41.8（C-8），50.5（C-9），40.0（C-10），32.6（C-11），69.8（C-12），50.7（C-13），51.3（C-14），32.6（C-15），27.8（C-16），51.1（C-17），18.1（C-18），18.1（C-19），140.3（C-20），28.2（C-21），123.8（C-22），30.4（C-23），126.0（C-24），131.1（C-25），26.1（C-26），18.0（C-27），33.0（C-28），17.3（C-29），17.6（C-30），102.2（C-1′），79.8（C-2′），78.9（C-3′），72.9（C-4′），78.8（C-5′），63.5（C-6′），102.3（C-1″），72.7（C-2″），72.8（C-3″），74.6（C-4″），69.8（C-5″），19.1（C-6″）。結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻(xiàn)[21-22]參考數(shù)據(jù)基本一致，經(jīng)過(guò)綜合分析后，鑒定此化合物為人參皂苷 F4。

4 討論

通過(guò)試驗(yàn)從人參真菌菌質(zhì)中分離得到8個(gè)化合物，經(jīng)鑒定分別為人參皂苷Rs7（1）、人參皂苷Rk3（2）、齊墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3）、人參皂苷Rs6（4）、20（R）-人參皂苷Rh1（5）、人參皂苷F1（6）、三七皂苷R2（7）、人參皂苷F4（8）。其中，化合物3、5、6、7、8為生物轉(zhuǎn)化后得到的，證明生物轉(zhuǎn)化技術(shù)能改變?nèi)藚⒌幕瘜W(xué)成分。中藥生物轉(zhuǎn)化技術(shù)結(jié)合微生物學(xué)、生物化學(xué)、細(xì)胞學(xué)和生物工程手段形成的新技術(shù)，是藥物開(kāi)發(fā)創(chuàng)新的新途徑和新手段，通過(guò)生物轉(zhuǎn)化技術(shù)能提高生物活性成分含量。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，所分離得到的化合物在抗疲勞、提高免疫力以及抗腫瘤方面具有良好療效[23-27]。本研究對(duì)人參以及傳統(tǒng)中藥生物轉(zhuǎn)化的開(kāi)發(fā)利用具有借鑒意義。

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（收稿日期：2018-06-08 修回日期：2018-11-12）

（編輯：余慶華）