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    電針對糖尿病周圍神經(jīng)病變模型大鼠外周血流灌注量及其坐骨神經(jīng)NGF受體表達(dá)的影響

    2019-09-10 07:22:44阮繼源張文紅楊丹紅
    世界中醫(yī)藥 2019年2期
    關(guān)鍵詞:神經(jīng)生長因子電針實(shí)驗(yàn)

    阮繼源 張文紅 楊丹紅

    摘要? 目的:通過腹腔注射鏈脲佐菌素(Streptozocin,STZ)建立痛性糖尿病周圍神經(jīng)病變(Painful Diabetic Neuropathy,PDN)模型,探討電針對PDN的治療作用機(jī)制。方法:采用PDN組大鼠腹腔注射STZ建立糖尿病模型,觀察各組大鼠的行為反應(yīng),各大鼠的一般情況、血糖、痛閾,處死前檢測大鼠周圍血流灌注量,于處死后采用免疫組化法檢測大鼠坐骨神經(jīng)神經(jīng)生長因子(Nerve Growth Factor,NGF)受體的表達(dá),進(jìn)而初步探討電針治療PDN大鼠的部分機(jī)制。結(jié)果:與空白組比較,模型組大鼠周圍血流灌注量、NGF受體的表達(dá)明顯降低,電針組大鼠血流灌注量、NGF受體的表達(dá)增加,并且電針2組較電針1組血流灌注量、NGF受體的表達(dá)增加較多。結(jié)論:電針可以提高PDN模型大鼠的痛閾,增加大鼠周圍血流灌注量,電針可以增加PDN模型大鼠坐骨神經(jīng)NGF受體的表達(dá),從而對損傷的坐骨神經(jīng)起到修復(fù)的作用,電針能夠改善PDN模型大鼠坐骨神經(jīng)的病理形態(tài)和超微結(jié)構(gòu),對神經(jīng)具有保護(hù)作用。

    關(guān)鍵詞? 痛性糖尿病周圍神經(jīng)病變;電針;周圍血流灌注量;神經(jīng)生長因子;大鼠;實(shí)驗(yàn);模型

    Effects of Electroacupuncture on Peripheral Blood Flow and Expression of NGF Receptor in Sciatic Nerve of PDN Rats

    Ruan Jiyuan,Zhang Wenhong,Yang Danhong

    (Acupuncture Research,The Third Clinical Medical College,Affiliated to Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou 310053,China)

    Abstract Objective: To build the Painful Diabetic Neuropathy (PDN) model by intraperitoneal injection of Streptozocin (STZ),to discuss treatment mechanism of PDN by electric acupuncture (EA) and provide theoretical basis for clinical promotion. Methods: The PDN group was intraperitoneal injected STZ to build PDN model for observing behavior reaction of each groups and general state,blood glucose and pain threshold of all rats.Before death,peripheral blood perfusion was measured.After death,expression of receptor expression of Sciatic Nerve growth factor (NGF) was detected by immunohistochemistry.Moreover,it was to investigate the mechanism of electroacupuncture in the treatment of painful diabetic peripheral neuropathy in rats. Results: After building model,blood glucose of model group is increased significantly,pain threshold was declined gradually.After treatment of EA,blood glucose was not significant changed,and pain threshold was rising after treatment for 4 weeks.8-week-treatment pain threshold was rising more than 4-weeks-treatment group. Conclusion: The treatment of EA can improve the pain threshold of PDN model rats for increasing the peripheral blood perfusion and microcirculation,can improve the expression of NGF receptors in the sciatic nerve of the PDN model rats for repairing the injured sciatic nerve,can improve the Sciatic pathological morphology and ultrastructure of PDN model rats for protecting the nerves.

    Key Words? Painful Diabetic Neuropathy (PDN); Electric acupuncture (EA); Peripheral blood perfusion; Nerve growth factor (NGF); Rats; Experiments; Model

    中圖分類號:R245.3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A? doi: 10.3969/j.issn.1673-7202.2019.02.021

    糖尿?。―iabetes Mellitus,DM)是一種體內(nèi)胰島素相對或絕對不足或靶細(xì)胞對胰島素敏感性降低,或胰島素本身存在結(jié)構(gòu)上的缺陷而引起的碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì)代謝紊亂的一種慢性疾病。糖尿病周圍神經(jīng)病(Diabetic Peripheral Neuropathy,DPN)在DM患者較為常見,導(dǎo)致DPN的主要因素有:代謝障礙、缺氧缺血、神經(jīng)營養(yǎng)因子缺乏等因素。其臨床表現(xiàn)有多種形式,最常見為遠(yuǎn)端對稱性感覺多發(fā)神經(jīng)病。在DPN患者中其中又有60% ~90%的患者合并有自覺癥狀,通常表現(xiàn)為肢體遠(yuǎn)端特別是下肢皮膚表現(xiàn)燒灼樣疼痛,麻木,稱之為痛性DPN[1-2]。目前,西醫(yī)的藥物有4種主要的類型,醛糖還原酶抑制劑(ARIs)、改善微循環(huán)類藥物、神經(jīng)營養(yǎng)因子、維生素等。由于西藥治療主要是針對發(fā)病機(jī)制中的某一個(gè)環(huán)節(jié),很難實(shí)現(xiàn)多靶點(diǎn)的治療效果,治療效果不太令人滿意,而且不良反應(yīng)比較大,所以發(fā)揮針灸的治療作用顯得尤為重要。有研究表明,電針可以降低DM患者的血糖,顯著改善DM患者的周圍神經(jīng)傳導(dǎo)速度,促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù),提高DM患者生命質(zhì)量[3-4]。本研究擬在眾多的臨床療效的基礎(chǔ)上,根據(jù)機(jī)械痛閾、血流灌注量、坐骨神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)、NGF受體等指標(biāo)的變化,探討針灸調(diào)節(jié)PDN的機(jī)制,為臨床治療PDN奠定理論基礎(chǔ)、提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 動物 健康雄性Wistar大鼠32只,體質(zhì)量(220~250)g,實(shí)驗(yàn)動物由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。飼養(yǎng)室保持良好通風(fēng),室溫控制在(21±1)℃,濕度63%,噪聲≦55 dB,自由攝食,飲水,光照與黑暗時(shí)間每12 h交替。

    1.1.2 試劑與儀器 鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)(Sigma公司,德國,生產(chǎn)批號:S0130);檸檬酸、檸檬酸三鈉(江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司,20130418、20120901)。韓氏鎮(zhèn)痛儀(南京濟(jì)生醫(yī)療科技有限公司,HANS-100型)。

    1.2 方法

    1.2.1 分組與模型制備

    1.2.1.2 造模方法 PDN組將鏈脲佐菌素(STZ)按50 mg/kg腹腔注射(1%,溶劑檸檬酸一檸檬酸鈉緩沖液,pH值為4.2~4.5),空白組腹腔注射相同劑量(50 mg/kg)的檸檬酸一檸檬酸鈉緩沖液。72 h后,尾靜脈取血檢測血糖,若血糖高于16.7 mmol/L則為DM大鼠。

    1.2.1.2 分組方法 將大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、模型組、電針1組、電針2組,共4組,每組8只。

    1.2.2 干預(yù)方法 電針1組:確定為PDN模型大鼠,接受電針治療,電針治療4周,隔日1次。電針2組:確定為PDN模型大鼠,接受電針治療,電針治療8周,隔日1次。電針治療方法:用針灸針(0.18 mm×13 mm)刺入大鼠雙側(cè)足三里0.6 cm、昆侖穴0.5 cm,然后連接韓氏電針儀(HANS-100A),刺激參數(shù):頻率為0.02 Hz,波形為連續(xù)波,強(qiáng)度以患肢輕微抽動為度??瞻捉M、對照組大鼠用布套固定但不采取治療。

    1.2.3 檢測指標(biāo)與方法

    大鼠一般狀況及體質(zhì)量:觀察每天大鼠進(jìn)食、飲水、熱料的濕度、大鼠毛色、精神狀況、體質(zhì)量等一般狀況,做好記錄。

    1.2.3.1 大鼠血糖監(jiān)測 從大鼠尾靜脈取血測各組大鼠的血糖水平。同時(shí)每天觀察大鼠的一般狀態(tài),活動情況等,并檢測STZ注射前、STZ注射后、STZ注射后第4、8、12周各組空腹血糖。檢測血糖當(dāng)天早晨6點(diǎn)給大鼠禁食,下午4點(diǎn)用電子血糖儀在大鼠尾部取血測血糖值,并記錄數(shù)據(jù)。

    1.2.3.2 痛閾測定 采用BIO-EVF3測痛儀,將大鼠至于高架網(wǎng)內(nèi),待其探索和舔足等適應(yīng)性行為停止后,通過類似鈍性金屬纖維慢慢靠近大鼠右后足底,刺激其右后足底中央部位,采用足底觸覺測痛儀,記錄引起動物縮足的刺激力量(g)2次刺激間隔為1 min,每只大鼠共刺激3次,取平均值作為其痛閾值。分別于造模前、造模后每兩周檢測實(shí)驗(yàn)動物痛閾變化,每次測量前兩天進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練。

    1.2.3.3 多普勒激光測速儀測量血流 保持室溫在25 ℃,用激光多普勒血流測定儀(Perimed 5000購于瑞典Perimed公司)測定儀預(yù)熱30 min,將各組大鼠用10%水合氯醛按0.35 mL/100 g的量腹腔注射麻醉后,仰臥固定于測量臺上,用剃毛器將右下肢脫毛,選取距其踝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)上方2 cm處,避開大血管,將激光多普勒測定光纖導(dǎo)管探頭貼近此點(diǎn),測定血液灌注量(Perfusion,PU),每次連續(xù)測定5 min,得出PU平均值;每點(diǎn)均測量3次,以均值作為大鼠的PU值。

    1.2.3.4 獲取標(biāo)本和動物處死 空白組、模型組及電針2組在第12周結(jié)束時(shí)及電針1組在治療第8周結(jié)束時(shí),取Wistar大鼠坐骨神經(jīng),將大鼠腹腔注射10%水合氯醛(0.35 mL/100 g)進(jìn)行麻醉,俯臥固定于固定架上,剖開右側(cè)股骨皮膚,暴露出坐骨神經(jīng),用無菌玻璃剝離器小心剝離坐骨神經(jīng)后取出,坐骨神經(jīng)的長度約以1 cm左右為宜。剪取坐骨神經(jīng)時(shí)動作要輕,為防止組織內(nèi)部發(fā)生變化,千萬不能用力牽引或用鑷子挾持。坐骨神經(jīng)取下后,先用0.9%的生理鹽水清洗,以洗去血液與污漬。坐骨神經(jīng)取下后應(yīng)當(dāng)迅速放入4%多聚甲醛溶液中固定。固定液的用量與坐骨神經(jīng)體積之比一般在20∶ 1。在離心管上記錄固定液的名稱,材料的種類及開始固定的時(shí)間,4 ℃冰箱保存,備光學(xué)顯微鏡、免疫組化檢測。然后同樣的方法取左側(cè)神經(jīng)靠近坐骨切跡的部位約0.1 cm置于預(yù)冷的2.5%戊二醛中固定以備做電鏡使用。獲取神經(jīng)標(biāo)本后將動物當(dāng)即處死。

    1.2.3.5 神經(jīng)NGF受體陽性細(xì)胞的計(jì)數(shù) 1)標(biāo)本制備:大鼠腹腔注射10%水合氯醛(0.35 mL/100 g)麻醉,剝離兩側(cè)坐骨神經(jīng);將一側(cè)神經(jīng)組織在4%多聚甲醛中固定24 h,另一側(cè)用于電鏡檢測;乙醇脫水;二甲苯透明;石蠟包埋;取坐骨神經(jīng)連續(xù)5 μm切片,貼于黏附波片上,制作石蠟切片。2)HE染色:石蠟切片置于60 ℃恒溫烤箱中1 h;二甲苯脫蠟15 min×2次,無水乙醇1 min×2次,95%乙醇1 min×2次,85%乙醇1 min;自來水清洗2 min;蘇木素染色2 min;流水洗1~3 s;1%鹽酸乙醇10 s;自來水洗1~3 s;伊紅染色1 min;自來水洗1~3 s;85%乙醇20 s-90%乙醇30 s-95%乙醇1 min-無水乙醇1 min-無水乙醇5 min;二甲苯1 min×2次;中性樹膠封片。3)免疫組織化學(xué)染色:石蠟切片置于60 ℃恒溫烤箱中1 h,二甲苯脫蠟15 min×2次;乙醇下行至水:無水乙醇5 min-無水乙醇5 min-95%乙醇3 min-85%乙醇3 min-75%乙醇3 min;PBS沖洗5 min×3次。抗原微波修復(fù):在微波爐里加熱0.01 mol/L檸檬酸鈉緩沖溶液(pH 6.0)至沸騰后將組織切片納入,使容器內(nèi)的液體溫度保持在92~98 ℃并持續(xù)10~15 min以修復(fù)抗原,取出容器,室溫冷卻。PBS沖洗5 min×3次,每個(gè)組織處滴加1滴(約50 μL)內(nèi)源性過氧化酶阻斷溶液(3%H2O2去離子水)以滅活內(nèi)源性過氧化物酶,室溫避光靜置15 min。PBS沖洗5 min×3次,滴加0.3%Triton 15 min,PBS沖洗5 min×3次。每個(gè)組織處滴加1滴(約50 μL)正常山羊血清封閉液(SP免疫組化檢測試劑盒中試劑A),室溫靜置1 h,甩去多余液體;每個(gè)組織處滴加1滴(約50 μL)內(nèi)源性過氧化酶阻斷溶液(3%H2O2去離子水)以滅活內(nèi)源性過氧化物酶,室溫避光靜置15 min。PBS沖洗5 min×3次,滴加0.3%Triton 15 min,PBS沖洗5 min×3次,每個(gè)組織處滴加1滴(約50 μL)正常山羊血清封閉液(SP免疫組化檢測試劑盒中試劑A),室溫靜置1 h,甩去多余液體。每個(gè)組織處滴加1滴(約50 μL)內(nèi)源性過氧化酶阻斷溶液(3%H2O2去離子水)(陰性對照采用抗體稀釋液代替一抗),4 ℃孵育過夜。37 ℃恒溫箱中復(fù)溫1 h。PBS沖洗5 min×5次,每個(gè)組織處滴加1滴(約50 μL)生物素標(biāo)記二抗工作液(SP免疫組化檢測試劑盒中試劑B),37 ℃恒溫箱中孵育1 h,PBS沖洗5 min×5次;每個(gè)組織處滴加1滴(約50 μL)辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液(SP免疫組化檢測試劑盒中試劑C),37 ℃恒溫箱中孵育1 h,PBS沖洗5 min×5次。DAB顯色1~5 min,在顯微鏡下掌握染色程度;蘇木素復(fù)染30 s,自來水沖洗,1%鹽酸乙醇20~30 s,自來水沖洗,1%氨水1 s,自來水沖洗。75%、85%、95%乙醇中各3 min,無水乙醇5 min×2次脫水。二甲苯5 min×2次,中性樹膠封片、鏡檢。顯微鏡下計(jì)數(shù)染色為棕黃色的陽性細(xì)胞,只有染色深度達(dá)到足以區(qū)分其周界的免疫陽性細(xì)胞才被計(jì)數(shù)和測量對象。每張切片于10×40倍光鏡下選擇3個(gè)相鄰視野(1個(gè)視野=1 mm2),計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞并取其平均值為坐骨神經(jīng)NGF受體陽性細(xì)胞的計(jì)數(shù)。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(? ±s )表示,采用單因素方差分析,進(jìn)一步兩兩比較,采用LSD- t 檢驗(yàn),以 P <0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 電針對PDN大鼠一般狀況及體質(zhì)量的影響

    2.1.1 一般狀況 空白組大鼠毛色光滑柔軟,性格溫順,反應(yīng)迅速,行動靈敏,每天飲食飲水以及尿量正常,墊料濕度正常,隔日或3 d一換;模型對照組大鼠則毛色枯黃、無光澤,精神萎靡,行動遲緩,愛蜷縮不動,抓取掙扎無力,出現(xiàn)“三多一少”的典型癥狀,每天飲食飲水及尿量均明顯增多,墊料濕度明顯增加,須每天一換。電針組經(jīng)過電針治療后毛色有所好轉(zhuǎn),精神狀態(tài)變好,相對模型組比較活躍,但飲食飲水與模型組比較并無太大變化。

    2.1.2 體質(zhì)量變化 造模前空白組大鼠體質(zhì)量為(245.13±14.98)g,其他3組大鼠體質(zhì)量分別為(251.25±14.46)g、(241.13±11.19)g、(245.50±13.17)g,各組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P >0.05)。之后模型組大鼠造模4、8、12周后體質(zhì)量均顯著低于空白組( P <0.05)。電針1、2組在造模后各時(shí)間點(diǎn)體質(zhì)量與空白組及模型組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P 均<0.05)。見表1、圖1。

    2.2 電針對PDN大鼠血糖的影響 造模組大鼠造模后各時(shí)間點(diǎn)血糖均高于16.7 mmol/L,與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P <0.05),2組電針組大鼠在治療4周后血糖有所下降,但與模型組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P 均>0.05),而電針2組在第8周血糖與模型組和電針1組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P 均>0.05),而電針2組在第12周時(shí)血糖較模型組顯著下降( P <0.05)。見表2,圖2。

    2.3 電針對PDN大鼠機(jī)械痛閾的影響 應(yīng)用測痛儀檢測大鼠后足的機(jī)械痛閾,結(jié)果顯示:造模前各組大鼠機(jī)械痛閾比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P 均>0.05),從DM模型成模4周開始,模型組大鼠機(jī)械痛閾下降,模型組在第4周、8周、12周時(shí)與空白組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P 均<0.05)。而2組電針組從接受電針治療開始,痛閾逐漸升高,在電針治療8周、12周后,電針1、2組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P <0.05),但仍然低于對照組大鼠( P <0.05)。見表3,圖3。

    2.4 電針對PDN大鼠周圍血流灌注量的影響 各組大鼠于實(shí)驗(yàn)8周后,應(yīng)用血流檢測儀檢測大鼠下肢周圍血流灌注量, 選取PU值作為評價(jià)指標(biāo),檢測結(jié)果顯示:各組大鼠周圍血流灌注量均明顯低于空白組大鼠( P <0.05),電針組在接受電針治療后周圍血流灌注量高于模型組大鼠( P <0.05),并且電針1組要優(yōu)于電針2組( P <0.05)。見表4,圖4。

    2.5 電針對PDN大鼠坐骨神經(jīng)NGF受體表達(dá)的影響 光鏡下觀察結(jié)果顯示:NGF受體陽性反應(yīng),染色呈棕黃色。各組大鼠坐骨神經(jīng)NGF受體均有陽性細(xì)胞表達(dá)。模型組大鼠坐骨神經(jīng)NGF受體的陽性表達(dá)較空白組減弱( P <0.05),電針1、2組大鼠坐骨神經(jīng)陽性細(xì)胞表達(dá)量顯著高于模型組( P <0.05)。且電針2組更高( P <0.05),說明電針治療后可以增強(qiáng)大鼠坐骨神經(jīng)NGF受體的陽性表達(dá)。見表5、圖5。

    3 討論

    中醫(yī)理論認(rèn)為PDN的發(fā)生主要與瘀血阻滯經(jīng)絡(luò)有十分密切的關(guān)系,其主要原因是DM長久不愈,導(dǎo)致氣血虛弱,氣為血之帥,氣虛則血運(yùn)行不暢,血脈閉阻不通,不通則痛,而臨床多見肢體疼痛。血虛不能夠濡養(yǎng)筋脈,臨床上多表現(xiàn)為肢體麻木不仁,長此以往則廢萎不用。除此之外,脾胃虛弱,痰濕雍盛,痰濕互結(jié),同樣也可以導(dǎo)致絡(luò)脈閉阻、血行不暢。故本實(shí)驗(yàn)選擇了臨床常用的調(diào)和氣血、通絡(luò)止痛功能的效驗(yàn)穴,其中足三里穴,為足陽明胃經(jīng)穴。是胃經(jīng)合穴,同時(shí)也是胃的下合穴。足三里,五行屬土,土載萬物,調(diào)補(bǔ)氣血,能健脾益胃,以資生化之源,氣血充盛,則肢體得到濡養(yǎng),具有補(bǔ)中氣,健脾腎,調(diào)和氣血,疏通經(jīng)絡(luò)的作用。昆侖穴,為足太陽膀胱經(jīng)穴,為膀胱經(jīng)之經(jīng)穴。可以通絡(luò)止痛,主要治療遠(yuǎn)端病證,如足痛、下肢疼痛麻痹、甚至癱瘓、坐骨神經(jīng)痛、局部軟組織損傷等。兩穴配合,可共同起到緩解周圍神經(jīng)痛的功能。

    現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明DM患者的發(fā)病與機(jī)體的代謝障礙、神經(jīng)細(xì)胞的缺氧缺血、遺傳因素、自身免疫性疾病或血液流變學(xué)改變等密切相關(guān)。現(xiàn)代病理學(xué)有研究指出,DM患者其毛細(xì)血管的變化也會導(dǎo)致神經(jīng)變性壞死,例如毛細(xì)血管壁內(nèi)皮細(xì)胞的增生和腫脹、管壁內(nèi)基底膜的增厚與異常的透明變性、以及由多種原因?qū)е碌难軆?nèi)壁管腔狹窄,血管內(nèi)壁管腔狹窄使得血管內(nèi)的阻力增加,進(jìn)一步加重神經(jīng)內(nèi)膜以及神經(jīng)低灌注的缺氧,最終引發(fā)神經(jīng)變性壞死[5]。另外,也有研究顯示,機(jī)體內(nèi)的內(nèi)皮細(xì)胞與神經(jīng)內(nèi)膜毛細(xì)血管是緊密連接的,當(dāng)機(jī)體處于高血糖狀態(tài)時(shí),兩者之間的數(shù)目上的消失或是減少時(shí),會導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的損傷,加上破壞了組合構(gòu)成血管神經(jīng)屏障的緊密連接構(gòu)建,促使神經(jīng)內(nèi)膜中有了血管內(nèi)血清鈉滲透,進(jìn)一步造成神經(jīng)細(xì)胞的損傷。而且DM患者的微循環(huán)容易造成血液的分流,導(dǎo)致神經(jīng)的缺血,主要是因?yàn)樯鲜銮闆r。體內(nèi)神經(jīng)外膜和神經(jīng)內(nèi)膜的細(xì)小動脈組成是由許多的交感神經(jīng)末梢所支配的,然而微血管循環(huán)有助于神經(jīng)調(diào)節(jié)功能,神經(jīng)內(nèi)膜的血流供給的變化也可能責(zé)之于自主神經(jīng)的病變。神經(jīng)元的生長、發(fā)育、存活等功能所必需維持和依賴的營養(yǎng)因子源自于感覺、交感和中樞神經(jīng)中的膽堿。NGF可以誘導(dǎo)神經(jīng)遞質(zhì)的合成,同時(shí)也是蛋白磷酸化與甲基化所依賴的重要物質(zhì),例如ras-蛋白基因表達(dá)所必需具備的酶[6]。就目前的臨床研究來看,NGF可以由正常成人的細(xì)胞產(chǎn)生,而且在體內(nèi)神經(jīng)元的發(fā)育生長過程中,能夠促進(jìn)生長因子受體的產(chǎn)生。反之,作為DM患者,體內(nèi)胰島素的缺乏會導(dǎo)致施萬細(xì)胞受到損害,而這些施萬細(xì)胞是與高血糖山梨醇相關(guān)的,這時(shí)便會影響機(jī)體NGF的合成,使得NGF合成減少,體內(nèi)神經(jīng)微管、微絲mRNA的水平降低,更進(jìn)一步的影響了基因表達(dá)調(diào)控,最后可能會會導(dǎo)致神經(jīng)軸索營養(yǎng)障礙,其再生能力也將受損。也有學(xué)者實(shí)驗(yàn)研究表示[7],當(dāng)DM實(shí)驗(yàn)小鼠體內(nèi)的NGF水平降低的同時(shí),出現(xiàn)了不同組織尤其是坐骨神經(jīng)以及小腿肌肉NGF-mRNA的進(jìn)行性下降[8]。本研究通過腹腔注射STZ,破壞大鼠胰島β細(xì)胞,血糖升高。大鼠出現(xiàn)多飲多食的狀態(tài),隨后出現(xiàn)消瘦,毛發(fā)枯黃無光澤。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見,模型組大鼠的體質(zhì)量明顯下降,與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而電針組大鼠雖也同時(shí)經(jīng)受STZ DM造模,雖然體質(zhì)量明顯下降,但在精神狀態(tài)和行為表現(xiàn)方面,較模型組動物為輕,提示可通過電針改善實(shí)驗(yàn)動物由于DM引起的部分癥狀。目前臨床上PDN的主要臨床表現(xiàn)包括:持續(xù)性的感覺疼痛,感覺異常,并且痛閾相對于正常人有著明顯的下降。臨床診斷主要通過主訴疼痛,以及神經(jīng)功能的檢測來判斷。此次實(shí)驗(yàn)中DM大鼠機(jī)械痛閾明顯下降,則說明DM神經(jīng)病理痛模型制備成功。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,PDN模型造模成功后,各組大鼠痛閾較正常組都有明顯的下降,在接受電針治療后,電針觀察組痛閾有所上升,并且電針治療時(shí)間越久,痛閾越接近正常值。不論是臨床試驗(yàn)還是動物實(shí)驗(yàn)均已表明,電針能夠起到鎮(zhèn)痛作用,并且電針1周后就可有明顯的鎮(zhèn)痛效應(yīng)[9]。所以,本實(shí)驗(yàn)通過電針鎮(zhèn)痛效應(yīng),緩解PDN大鼠疼痛,提高生命質(zhì)量。與DM有關(guān)的神經(jīng)營養(yǎng)因子主要是神經(jīng)生長因子(NGF),神經(jīng)營養(yǎng)因子-3(NT),胰島素樣生長因子(IGF)和腦源性營養(yǎng)因子(BDNF)[10],長期高糖環(huán)境下,上述營養(yǎng)因子缺乏或減少,使逆向運(yùn)輸至神經(jīng)元的神經(jīng)營養(yǎng)因子減少,損傷對其敏感的神經(jīng)元。在神經(jīng)損傷時(shí),生長因子及其受體表達(dá)異常[11],實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:PDN模型大鼠坐骨神經(jīng)NGF受體明顯下降,在接受電針治療后,NGF受體表達(dá)增多,并且NGF受體表達(dá)會隨著電針治療的時(shí)間延長而增加。所以,可以肯定的是電針可以增加大鼠坐骨神經(jīng)中NGF受體的表達(dá),NGF表達(dá)增多,則有助于軸突的生長和再生神經(jīng)元的存活及損傷修復(fù),從而達(dá)到治愈本病的目的。DM引起的血管病變,主要包括大血管和微血管病變。DM患者的神經(jīng)組織活檢發(fā)現(xiàn),隨著神經(jīng)病變的加重,微血管結(jié)構(gòu)改變也加重,如基底膜增厚、內(nèi)皮細(xì)胞增生、動靜脈吻合減少,此種改變在給予血管擴(kuò)張劑治療后得到改善。因此認(rèn)為神經(jīng)低灌注是引起DM神經(jīng)病變的一個(gè)重要因素[12]。動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PDN大鼠神經(jīng)內(nèi)膜血流比正常值減少33%左右,且神經(jīng)受損更嚴(yán)重,提示高血糖狀態(tài)下神經(jīng)組織對缺血缺氧更敏感[13]。同時(shí)血液呈高黏滯狀態(tài),周圍神經(jīng)微血管的血流減慢,血供減少,神經(jīng)內(nèi)膜缺血缺氧,可致神經(jīng)受到損害[14]。通過此次實(shí)驗(yàn)我們可以得知,PDN模型大鼠周圍血流灌注量明顯低于對照組大鼠,電針治療后,周圍血流灌注量明顯提高,并且電針2組要優(yōu)于電針1組。

    綜上所述,電針能夠改善大鼠周圍血流灌注量,改善微血管病變,從而提高神經(jīng)細(xì)胞的供血供氧,達(dá)到神經(jīng)細(xì)胞修復(fù)的目的。從本研究中可以得出以下結(jié)論:1)腹腔注射STZ可以使Wistar大鼠血糖明顯升高,是復(fù)制DM大鼠模型的較穩(wěn)定方法。2)電針可以提高PDN模型大鼠的痛閾,緩解PDN大鼠的疼痛。3)電針治療可以通過增加PDN大鼠坐骨神經(jīng)內(nèi)NGF受體的陽性表達(dá),改善神經(jīng)組織的功能,從而達(dá)到治療PDN的目的。4)電針可以改善大鼠的周圍血流灌注量,通過改善微循環(huán)達(dá)到治療PDN的目的。5)電針可以改善PDN大鼠坐骨神經(jīng)超微結(jié)構(gòu),從而達(dá)到治療PDN的目的。然而作為電針治療PDN的方法從本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中可見無論療效或者安全性方面均值得臨床推廣應(yīng)用。

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