不同凈制工藝對三七質(zhì)量的影響

劉夢楠 薛雪 熊慧 屈文佳 賈天穎 賈哲 徐新房 李向日

摘要? 目的：分析不同凈制工藝對三七主根、剪口、筋條質(zhì)量的影響，為建立該藥材合理的凈制工藝提供參考。方法：選取超聲清洗5 min，超聲清洗10 min，流水沖洗，銼刀打磨和清水浸泡5種清洗方式對三七進(jìn)行凈制處理，并參照藥典的方法對其外觀性狀、水分、總灰分、醇溶性浸出物及有效成分含量進(jìn)行測定，將各參數(shù)結(jié)合方差分析等多元統(tǒng)計分析進(jìn)行比較。結(jié)果：超聲清洗5 min更適合根和筋條有效成分的保留，超聲清洗5 min和銼刀打磨2種凈制方式均適用于剪口;醇溶性浸出物和人參皂苷Rg1，Rb1和三七皂苷R1含量均為剪口>主根>筋條。結(jié)論：超聲清洗作為一種新型的凈制方法，適用于三七所有藥用部位的清洗。

關(guān)鍵詞? 三七;主根;筋條;剪口;凈制;皂苷;灰分;浸出物;質(zhì)量

Effects of Different Clean-Processing on Quality of Radix Notoginseng

Liu Mengnan，Xue Xue，Xiong Hui，Qu Wenjia，Jia Tianying，Jia Zhe，Xu Xinfang，Li Xiangri

（School of Chinese Materia Medica，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 102488，China）

Abstract Objective： To analyze the effects of different clean-processing on the quality of taproot，scissor and tendon of Radix Notoginseng and provide reference for better clean-processing of Radix Notoginseng. Methods： According to the present condition of clean equipment，we developed five kinds of cleaning methods to process the Radix Notoginseng，including ultrasonic cleaning 5 min，ultrasonic cleaning 10 min，rinsing，filing，and water immersion in this study.Aim to confirm whether the quality of the Radix Notoginseng changed after the processing using the method we developed，we systematically analyzed the exterior characters，water content，total ash and the effective ingredients extracted by the methanol，saponins content of Radix Notoginseng，all of which were also quality control standard described in the Pharmacopoeia of the People′s Republic of China （2015 edition）. Results： Ultrasonic cleaning for 5 min were more suitable for the retention of roots and rootlets，both of filing and ultrasonic cleaning 5 min were good at rhizomes.The contents of methanol soluble extracts and saponins content of Radix Notoginseng were all according with rhizomes>roots>rootlets. Conclusion： This result suggested that dividing the Radix Notoginseng into different tissue and using the corresponding cleaning method are the effective way to keep Radix Notoginseng clean with a higher quality in the clean-processing.

Key Words? Radix Notoginseng; Roots; Rootlets; Rhizomes; Clean-processing; Saponin; Ash; Extract; Quality

中圖分類號：R284 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A? doi： 10.3969/j.issn.1673-7202.2019.02.009

三七為五加科植物三七 Panax notoginseng （Burk.）F.H.Chen的干燥根及根莖，秋季開花前采挖，洗凈，分開主根、支根及根莖，干燥[1]。三七廣泛應(yīng)用于許多國家的食品或藥物中，特別是在中國和韓國[2]。

凈制作為中藥材炮制中的第一道工序，也是炮制中應(yīng)用最早、最廣泛的一項技術(shù)[3-6]，有著悠久的歷史。近代凈制多沿襲了傳統(tǒng)操作，但是在實際生產(chǎn)過程中，并沒有得到應(yīng)有的重視。臨床上習(xí)慣將三七凈制后打粉直接入藥，其凈制方式、工序可能改變?nèi)咧谐煞值谋壤绊懭叩馁|(zhì)量。迄今為止，尚未有研究分析三七不同凈制工藝對其質(zhì)量的影響，在《中華人民共和國藥典》（2015版）及地方標(biāo)準(zhǔn)中也尚未描述凈制工藝。

在本研究中，依據(jù)現(xiàn)有清潔設(shè)備，我們首次應(yīng)用超聲清洗5 min，超聲清洗10 min，流水沖洗，銼刀打磨和清水浸泡5種清洗方式對三七進(jìn)行凈制處理，并對其藥典規(guī)定的外觀性狀、水分、總灰分、醇溶性浸出物和有效成分含量進(jìn)行測定，從而系統(tǒng)分析了不同凈制方式對三七的質(zhì)量的影響，為三七凈制工藝的優(yōu)化提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

DHG-9070A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（常州諾基儀器有限公司）;SARTORIUS BS110S分析天平（德國賽多利斯公司）;FW-100型高速萬能粉碎機(jī)（北京科偉永興儀器有限公司）;檢測器2489 UV/Vis Detector，進(jìn)樣器Alliance（2695），Waters-e2695型高效液相色譜儀（美國沃特世公司）;色譜柱Aglient Eclipse XDB-C18;HH-2型電熱恒溫水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司）;SHB-III型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）;PL2002型電子天平（梅特勒-托利多（上海）有限公司）;SX4-10型箱式電阻爐（上海樹立儀器儀表有限公司）;TL1622型電陶爐（佛山艾詩凱奇電氣有限公司），數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司，KQ-600DE）。

1.2 試劑

甲醇（分析純，購于北京化工廠）;乙腈（色譜純，購于賽默飛世爾科技（中國）有限公司）;三七皂苷R1（購于上海源葉生物科技有限公司，批號為Y19A7H19708）;人參皂苷Rg1（購于上海源葉生物科技有限公司，批號為Z21S6X3601）;人參皂苷Rb1（購于上海源葉生物科技有限公司，批號為Z21D6X6400）;液相所用水為娃哈哈純凈水。

1.3 分析樣品

所有鮮三七均由云南白藥集團(tuán)提供，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)李向日教授鑒定為鮮三七，為五加科人參屬植物三七 Panax notoginseng（ Burk.）F.H.Chen根及根莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

將鮮三七均分為6份，每份大約500 g，平行2份，分別用5種凈制方式進(jìn)行處理（表1），處理后的5組作為實驗組，一組不處理作為空白組，并將凈制后的三七分為3個藥用部位：剪口、主根和筋條，各部位在65 ℃下持續(xù)干燥，自然放冷后稱重，計算得率，粉碎，裝入自封袋中備用。

2.2 外觀性狀鑒別

中藥的傳統(tǒng)質(zhì)量評價是以外觀性狀為主要指標(biāo)，是中藥質(zhì)量評價的基礎(chǔ)，可有效反映中藥的質(zhì)量優(yōu)劣。本研究根據(jù)《中華人民共和國藥典》（2015版）[1]、《全國中藥炮制規(guī)范》[11]三七項下性狀規(guī)定及相關(guān)文獻(xiàn)對凈制后的三七表面顏色、斷面、得率、質(zhì)地進(jìn)行觀察分析。

2.3 質(zhì)量參數(shù)測定

以“2.1”所述方法處理后的鮮三七的剪口、筋條和主根，分別按《中華人民共和國藥典》（2015版）第一部三七項下有效成分相關(guān)規(guī)定測定人參皂苷Rg1，Rb1，三七皂苷R1含量，第四部通則0832項下第二法烘干法測定水分，通則2302方法測定總灰分，通則2201項下的熱浸法，以甲醇為溶劑測定醇溶性浸出物。

色譜柱選用Aglient Eclipse XDB-C18，洗脫梯度如表2。流速1.0 mL/min，柱溫25 ℃，檢測波長為203 nm，進(jìn)樣量10 μL。

2.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SAS 8.2統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，對不同凈制方式的三七各指標(biāo)進(jìn)行獨立樣本 t 檢驗及方差分析。以 P <0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 外觀性狀和干燥成品得率

凈制后的三七外表皮由土壤的紅色變?yōu)榛液稚蚧疑?，斷面灰綠色、黃綠色或灰白色，木質(zhì)部呈放射狀排列，體質(zhì)量，質(zhì)堅實。

三七干燥后得率為25% ～45%。空白組的得率較高于實驗組，推測是由于空白組的三七表面泥土和雜質(zhì)含量較多所致。見表3。對不同藥用部位的得率均值進(jìn)行比較，主根的得率較筋條與剪口而言較高，且在粉碎過程中，各組主根均有不同程度的硬塊殘留，其原因可能是三七主根較大，不易干燥徹底。見表4。

3.2 質(zhì)量參數(shù)測定結(jié)果

各組水分含量均符合藥典規(guī)定（不超過14.0%），但每組中主根的水分含量均明顯高于其他2個部位，與上述主根較大，不易干燥徹底的推測一致?？偦曳值囊?guī)律，浸出物的規(guī)律和有效成分含量的規(guī)律見表5。

3.2.1 凈制工藝對三七總灰分限量的影響

除空白組外，其他組別灰分均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)（不超過6.0%）。對六組各部位灰分進(jìn)行比較，空白組筋條的灰分最高為10.95%，超聲清洗5 min的主根灰分最低為2.44%。各方法中，超聲清洗5 min組的灰分減少最顯著。見表5。

各實驗組與空白組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P <0.05），其總灰分均有明顯減少（圖1）。

3.2.2 凈制工藝對三七醇溶性浸出物的影響

用熱浸法測定不同凈制方法三七的醇溶性浸出物含量，其含量均符合藥典指標(biāo)（不得低于16%）。

各實驗組與空白組進(jìn)行兩兩比較，比較結(jié)果見圖2，主根部分4組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P >0.05），說明醇溶性浸出物含量未隨水流失，剪口和筋條部位分別有2組和4組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P <0.05），這一結(jié)果體現(xiàn)了凈制工藝在保證三七質(zhì)量方面的優(yōu)勢。

同組內(nèi)不同部位醇溶性浸出物含量以剪口最高，主根次之，筋條最少，與其皂苷含量的規(guī)律一致。

3.2.3 凈制工藝對三七有效成分含量的影響

按上述測定方法，每個樣品分別制備2組，每組分別進(jìn)樣2針。取平均值分析不同凈制方法下三七皂苷成分總含量的變化，各組皂苷含量均符合藥典規(guī)定的不得少于5.0%。見表4。

清水浸泡、超聲清洗5 min和銼刀打磨組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P >0.05）。說明這3種凈制方式均不會造成有效成分的流失，因此不考慮另2種有效成分減少了的凈制方式。見圖3。

將這3組方式的有效成分進(jìn)行兩兩比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P >0.05）。見表6。再將其灰分指標(biāo)進(jìn)行兩兩比較。見表7。超聲清洗5 min組與另外2組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P <0.05）， 而另2組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P >0.05），超聲清洗5 min組灰分最低。將其醇溶性浸出物指標(biāo)進(jìn)行兩兩比較。超聲清洗5 min組的浸出物略高于銼刀打磨組。見表8。

就筋條而言，實驗組與空白組兩兩比較，超聲清洗5 min組和清水浸泡組有效成分含量明顯增加（ P <0.05）。推測是由于這2種凈制方式能有效去除雜質(zhì)含量，從而提高活性成分的比例。對這2種凈制方式的上述質(zhì)量參數(shù)進(jìn)行兩兩比較，其總灰分差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P =0.0008<0.05），超聲清洗5 min的總灰分明顯降低，而醇溶性浸出物含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P =0.14>0.05）。

就剪口而言，將實驗組與空白組進(jìn)行兩兩比較，超聲清洗5 min組和銼刀打磨組有效成分含量明顯增加（ P >0.05）。結(jié)果表明，這2種凈制方式可以有效去除雜質(zhì)，提高活性成分比例。對這2種凈制方法的上述質(zhì)量參數(shù)進(jìn)行兩兩比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P >0.05）。

同組內(nèi)各部位皂苷含量進(jìn)行比較，各部位皂苷含量從多至少依次為剪口>主根>筋條。

4 討論

三七性溫，味甘、微苦，具散瘀止血，消腫定痛之效，用于治療咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外傷出血，胸腹刺痛，跌撲腫痛等癥，是一味距今已有600多年藥用歷史的“外傷科圣藥”[7]。近年來，每年有關(guān)三七的研究報道700篇左右[8]，其中，對三七化學(xué)成分的研究始見于20世紀(jì)30年代，但受到當(dāng)時實驗條件的限制，進(jìn)展十分緩慢，直到70年代以后，學(xué)者發(fā)現(xiàn)三七中含有一些與人參（ Panax ginseng? C.A.Mey）相似的化學(xué)成分，如人參皂苷等，引起了國內(nèi)外學(xué)者越來越多的關(guān)注，三七化學(xué)成分的相關(guān)研究取得了顯著進(jìn)展[9-11]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)及藥理學(xué)研究還發(fā)現(xiàn)，三七在抗炎、抗腫瘤、降血脂、提高免疫等方面均有療效[12-15]。

本研究通過比較不同清洗方法對三七的外觀性狀、水分、總灰分、醇溶性浸出物和皂苷含量的影響，優(yōu)化凈制工藝。醇溶性浸出物方面，筋條和剪口兩部位實驗組的醇溶性浸出物含量與空白組比較均顯著提高大約2%，推測是由于雜質(zhì)的減少所致。有效成分含量方面，對不同凈制方式進(jìn)行比較，銼刀打磨組的皂苷含量最高，推測是由于三七表皮皂苷含量較少，因此銼去表皮致使有效成分比例的增加;流水清洗組皂苷含量最低，考慮是由于皂苷類成分隨水流失嚴(yán)重，說明凈制時應(yīng)采用“少泡多潤”的理論，以防止活性成分的損失。在以上指標(biāo)中，有效成分及總灰分含量對三七的質(zhì)量影響較大，分析可知，超聲清洗5 min更適合主根和筋條有效成分的保留，超聲清洗5 min和銼刀打磨2種凈制方式均適用于剪口。

分析實驗結(jié)果可知，凈制后的5組，與空白組比較各項指標(biāo)基本上均有改善，這種差異尤其體現(xiàn)在總灰分限量中，該結(jié)果不僅直觀證明了實驗中所采用的凈制方法均為有效可行且合理的，也體現(xiàn)了凈制在中藥飲片質(zhì)量控制中有著不可忽視的地位。

與大多數(shù)傳統(tǒng)中藥一樣，三七的凈制仍處于經(jīng) 驗控制水平，給臨床用藥帶來了一定的困難。本研究的目的是分析不同凈制工藝對三七質(zhì)量的影響，從而優(yōu)化三七凈制工藝。在實驗中，參考各種指標(biāo)，對不同的凈制方法進(jìn)行數(shù)據(jù)化、客觀化的質(zhì)量評價，實現(xiàn)對凈制工藝的質(zhì)量控制，為三七加工技術(shù)的進(jìn)一步研究提供參考。

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