山羊母源抗體對(duì)小反芻獸疫疫苗免疫效果的影響

李 芳 嚴(yán)斯剛 黃小武 蘇益瓊 覃萬(wàn)福 韋玉慶余 波 薛新綿 梁麗娟 羅 生 覃周嵐

1.廣西壯族自治區(qū)鹿寨縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西鹿寨545600；

2.廣西壯族自治區(qū)柳州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西柳州545006；

3.廣西壯族自治區(qū)鹿寨縣鹿寨鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站，廣西鹿寨545600；

4.廣西壯族自治區(qū)柳州市獸醫(yī)化制場(chǎng)，廣西柳州545004；

5.廣西壯族自治區(qū)鹿寨縣平山鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站，廣西鹿寨545612

小反芻獸疫（peste des petits ruminants，PPR）是由副粘病毒科麻疹病毒屬小反芻獸疫病毒引起的小反芻動(dòng)物的一種急性接觸傳染病，俗稱羊瘟，以發(fā)熱、口炎、腹瀉、肺炎為主要特征，主要感染綿羊和山羊，危害相當(dāng)嚴(yán)重[1]。目前，小反芻獸疫無(wú)特效治療藥物，以疫苗接種為主的綜合措施是預(yù)防控制小反芻獸疫有效策略。免疫母畜能通過(guò)母乳使幼畜獲得母源抗體，為幼畜提供保護(hù)的同時(shí)又會(huì)干擾其接種疫苗的主動(dòng)免疫反應(yīng)。幼畜首次免疫需要考慮母源抗體水平、自身免疫應(yīng)答能力等因素影響。張子榮等[2]、何世成等[3]、郝飛等[4]、李芳等[5]對(duì)小反芻獸疫母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律進(jìn)行了研究。本試驗(yàn)采用小反芻獸疫疫苗接種不同母源抗體水平山羊組群，監(jiān)測(cè)其免疫水平，旨在探索直觀評(píng)價(jià)更加接近當(dāng)?shù)厣a(chǎn)實(shí)際的疫苗免疫效果，為有效預(yù)防及控制小反芻獸疫提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)疫苗

小反芻獸疫弱毒疫苗，新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：50 頭份/ 瓶，批號(hào)：2016044-2，每頭份疫苗含有的小反芻獸疫弱毒病毒至少為103TCID50。按瓶標(biāo)簽注明頭份，用滅菌生理鹽水將疫苗稀釋至每毫升含有1 頭份，充分混合均勻，冷藏保存?zhèn)溆茫♂尯蟮囊呙缭? h 內(nèi)使用完畢。

1.2 診斷試劑

小反芻獸疫抗體ELISA 檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京勤邦生物技術(shù)有限公司，批號(hào)為20170802。

1.3 試驗(yàn)場(chǎng)地及試驗(yàn)動(dòng)物

在筆者單位轄區(qū)內(nèi)隨機(jī)抽取6 個(gè)符合試驗(yàn)要求的山羊養(yǎng)殖場(chǎng)(母羊均已接種小反芻獸疫疫苗12個(gè)月以上)，場(chǎng)名分別標(biāo)記為A、B、C、D、E、F；每個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)選取2～4月齡、未接種過(guò)小反芻獸疫疫苗且臨床檢查健康的本地山羊30 只，每只山羊頸部皮下注射疫苗1 mL，做好標(biāo)識(shí)，在未改變?cè)袟l件下按照養(yǎng)殖場(chǎng)常規(guī)飼養(yǎng)。

1.4 樣品采集

分別于接種疫苗當(dāng)天（即0 d）以及接種疫苗后28、120、180 d 頸靜脈采血，每次3～5 mL/只，分離的血清不少于1 mL/只，血清清亮、無(wú)溶血、無(wú)染污，-20 ℃以下保存待檢。

1.5 抗體檢測(cè)

1）檢測(cè)方法。使用前將各試劑盒放置室溫30 min，恢復(fù)至室溫。取相應(yīng)用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性和陽(yáng)性對(duì)照各2 孔；陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照50 μL；樣品孔每孔加入5 倍稀釋后的樣品50 μL；每孔加抗體工作液50 μL，混勻，置37 ℃反應(yīng)30 min；除去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30 s 后棄去，重復(fù)洗滌5 次，拍干；每孔加酶標(biāo)記物100 μL，置37 ℃反應(yīng)30 min；甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30 s后棄去，重復(fù)洗滌5 次，拍干；每孔依次加底物液A、底物液B 各50 μL，混勻，37 ℃避光反應(yīng)15 min；每孔加終止液50 μL，混勻，于450 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定各孔吸光值。

2）結(jié)果判定，以 450 nm 吸光值為判定標(biāo)準(zhǔn)。正常試驗(yàn)情況下，陰性對(duì)照吸光值≥1.0，陽(yáng)性對(duì)照吸光值≤陰性對(duì)照吸光值×50%。按照公式計(jì)算阻斷率（PI）：PI=（1-樣本值/陰性對(duì)照孔均值）×100%。根據(jù)PI 進(jìn)行結(jié)果判定：PI≥50%為陽(yáng)性；PI＜50%為陰性。陰性結(jié)果表明，羊只抗體水平不足，需要補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。該試驗(yàn)僅定性檢測(cè)羊血清中PPR 抗體，根據(jù)PI 對(duì)抗體水平進(jìn)行粗略評(píng)估。

2 結(jié)果與分析

2.1 各養(yǎng)殖場(chǎng)山羊母源抗體檢測(cè)情況

6 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的山羊母源抗體陽(yáng)性率都在70%以下；F 養(yǎng)殖場(chǎng)山羊母源抗體陽(yáng)性率最高，為66.67%；A 養(yǎng)殖場(chǎng)山羊母源抗體陽(yáng)性率最低，為3.33%；A、B、C 養(yǎng)殖場(chǎng)平均PI 小于50%，D、E、F 養(yǎng)殖場(chǎng)平均PI 大于50%（表1）。

2.2 各養(yǎng)殖場(chǎng)山羊接種疫苗后免疫抗體檢測(cè)情況

1）接種疫苗28 d 后免疫抗體檢測(cè)情況。從表2可以看出，接種疫苗28 d 后，F(xiàn) 養(yǎng)殖場(chǎng)的山羊免疫抗體陽(yáng)性率為50%，其余5 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的山羊免疫抗體陽(yáng)性率均在80%以上。A、C、D 3 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)平均阻斷率大于79.96%，B、E、F 3 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)平均阻斷率小于79.96%。由于F 養(yǎng)殖場(chǎng)山羊母源抗體陽(yáng)性率較高，可能是母源抗體對(duì)疫苗抗原有部分中和作用，所以免疫后28 d 陽(yáng)性率較低。

表1 各養(yǎng)殖場(chǎng)的山羊母源抗體檢測(cè)結(jié)果

表2 免疫后28 d 山羊免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

表3 免疫后120 d 山羊免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

表4 免疫后180 d 山羊免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2）接種疫苗120 d 后山羊免疫抗體檢測(cè)情況。從表3可以看出，6 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)山羊在接種疫苗120 d后免疫抗體的陽(yáng)性率均為100%，其平均PI 在80%以上。

3）接種疫苗180 d 后山羊免疫抗體檢測(cè)情況。從表4可以看出，山羊接種疫苗180 d 后，E 養(yǎng)殖場(chǎng)和F 養(yǎng)殖場(chǎng)山羊的免疫抗體陽(yáng)性率分別為53.33%和56.67%，均在70%以下；其余4 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)山羊的免疫抗體陽(yáng)性率均在70%以上。A、C、D 3 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)平均阻斷率大于76.40%，B、E、F 3 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)平均阻斷率小于76.40%。

圖1為各監(jiān)測(cè)時(shí)間點(diǎn)山羊抗體陽(yáng)性率比較。從圖1可以看出，山羊母源抗體水平與接種疫苗后28、180 d 免疫抗體陽(yáng)性率成反比關(guān)系，即母源抗體陽(yáng)性率高的羊群，接種疫苗后28、180 d 免疫抗體陽(yáng)性率就低。

圖1 各監(jiān)測(cè)時(shí)間點(diǎn)抗體陽(yáng)性率比較

3 討 論

本研究結(jié)果顯示，6 個(gè)山羊養(yǎng)殖場(chǎng)小反芻獸疫母源抗體的陽(yáng)性率在3.33%～66.67%，平均PI 值36.18%～56.38%，說(shuō)明大部分免疫母羊的子代羔羊中有母源抗體存在。張子榮等[2]、何世成等[3]、郝飛等[4]、李芳等[5]的研究也證實(shí)，免疫母羊后代獲得一定水平母源抗體。

本研究結(jié)果顯示，羔羊PPR 母源抗體陽(yáng)性率下降到70%以下，接種疫苗28 d 后，有5 個(gè)山羊養(yǎng)殖場(chǎng)的免疫抗體陽(yáng)性率高于70%，達(dá)到預(yù)期免疫效果，而F 養(yǎng)殖場(chǎng)山羊的母源抗體陽(yáng)性率為66.67%，接種疫苗28 d 后的免疫抗體陽(yáng)性率僅為50%（遠(yuǎn)低于70%）；接種疫苗180 d 后，E 和F 養(yǎng)殖場(chǎng)山羊的免疫抗體陽(yáng)性率分別為53.33%和56.67%，均在70%以下，其余4 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)山羊的免疫抗體陽(yáng)性率均在70%以上。試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，從母羊中獲得的母源抗體對(duì)其接種疫苗的主動(dòng)免疫反應(yīng)有一定的干擾作用，養(yǎng)殖場(chǎng)母源抗體陽(yáng)性率低于50%時(shí)接種疫苗的免疫效果較好。羔羊的母源抗體水平受母羊免疫時(shí)間與次數(shù)，即免疫抗體水平有關(guān)，同時(shí)也與羔羊斷奶時(shí)間和日齡有關(guān)；大部分羔羊在2月齡以后，母源抗體水平顯著下降，因此，建議羔羊的最早免疫時(shí)間為60日齡左右[5]。有條件的養(yǎng)殖場(chǎng)可通過(guò)監(jiān)測(cè)評(píng)估，根據(jù)母源抗體消長(zhǎng)情況選擇最佳免疫時(shí)機(jī)，即可減少其對(duì)疫苗免疫效果影響，又可防止羔羊出現(xiàn)過(guò)長(zhǎng)免疫空白期。

75/1 毒株是OIE 規(guī)定的唯一允許使用的PPRV疫苗，該疫苗用于全國(guó)PPRV 疫情防控，疫苗效果在多個(gè)研究報(bào)道中獲得良好評(píng)價(jià)[6-12]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，不同監(jiān)測(cè)時(shí)間點(diǎn)羊群免疫抗體陽(yáng)性率均發(fā)生明顯的變化。在養(yǎng)殖生產(chǎn)實(shí)踐中，羊群免疫狀況往往會(huì)受到各種因素影響而發(fā)生改變，適時(shí)開(kāi)展監(jiān)測(cè)區(qū)域羊群免疫效果的監(jiān)測(cè)和評(píng)估，并及時(shí)掌握群體抵御病毒侵襲的能力是非常必要的。當(dāng)羊群免疫水平低于防疫目標(biāo)時(shí)，應(yīng)當(dāng)及時(shí)加強(qiáng)免疫。群體免疫力的存在可阻斷病原在羊群中的傳播，長(zhǎng)期使用疫苗并配合其他相應(yīng)措施可逐步達(dá)到凈化疫病的目的。