乙型肝炎病毒cccDNA與血清巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子表達(dá)相關(guān)性的研究

張昌艷 陳智慧 梁建英 何蓉會 李雙良

四川省南充市中心醫(yī)院 (四川 南充， 637000)

慢性乙型肝炎簡稱乙肝，當(dāng)前在我國的發(fā)病人數(shù)比較多[1～2]?，F(xiàn)代研究表明乙肝的發(fā)病機(jī)制主要是肝細(xì)胞發(fā)生不同程度的免疫病理損傷，其中乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)本身并不直接損傷肝細(xì)胞，但是各種復(fù)雜的細(xì)胞因子對炎癥活動(dòng)發(fā)揮了重要作用[3～4]。研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)患者一旦感染上HBV，在肝細(xì)胞核內(nèi)可檢測到共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)[5～6]。相關(guān)研究也表明宿主感染HBV后，只要肝細(xì)胞胞核內(nèi)存在cccDNA，患者抗病毒治療的效果就不佳[7]。不過HBV cccDNA檢測因操作繁瑣、取材困難，不適宜普遍開展[8]。巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)是一種重要的促炎細(xì)胞因子，是一種含有115個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，能夠抑制巨噬細(xì)胞游走，在機(jī)體炎癥和免疫反應(yīng)起著重要的作用[9～10]。本文探討了乙肝患者乙型肝炎病毒cccDNA和血清MIF的表達(dá)相關(guān)性，現(xiàn)做報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年2月至2018年7月在我院診治的78例乙肝患者作為觀察組，同期選擇進(jìn)行血液學(xué)檢查的非肝炎患者78例作為對照組(肝囊腫切除患者)，觀察組中男48例，女30例；年齡最小24歲，最大76歲，平均年齡(48.22±8.29)歲；平均病程為(8.19±0.78)年；平均體重指數(shù)為(23.11±2.48)kg/m2。對照組中男52例，女26例；年齡最小21歲，最大79歲，平均年齡(48.42±4.28)歲；平均體重指數(shù)為(23.98±2.11)kg/m2。兩組年齡、性別等數(shù)據(jù)對比間沒有明顯差異(P>0.05)。

1.2 納排標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均被告知并簽署知情同意書；②觀察組符合最新的乙肝診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)血清免疫學(xué)檢查確診；③年齡20到80歲；④完整的臨床資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料缺項(xiàng)者；②酒精性肝病和非酒精性脂肪肝等造成肝臟損害者；③合并甲、丙、丁、戊型病毒性肝炎患者；④妊娠與哺乳期婦女。

1.3 HBV cccDNA檢測方法 取所有患者的全血，采用全血基因組試劑盒提取基因組DNA，試劑盒來自QIANGEN公司，采用qPCR方法檢測HBV cccDNA含量，Ct值≤30代表檢測陽性。

1.4 血清MIF檢測 采集所有患者的空腹靜脈血3～5 ml，置于非抗凝干燥無菌真空管中，1 500 rpm/min離心5 min，取上清液，放入-70℃低溫冰箱保存。血清ALT、AST、TBil的檢測采用美國貝克曼全自動(dòng)分析儀，按速率法進(jìn)行檢測。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用分析的軟件選擇SPSS20.00，計(jì)量資料數(shù)據(jù)通過中位數(shù)(下四分位數(shù)，上四分位數(shù))等進(jìn)行表示，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)通過例數(shù)和百分比進(jìn)行表示，對比方法為卡方χ2分析、t檢驗(yàn)等，通過直線相關(guān)分析展開相關(guān)性分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者ALT、TBiL、AST水平情況 觀察組的血清ALT、TBiL、AST水平都顯著高于對照組，對比差異顯著(P<0.05)，見表1。

2.2 血清MIF含量情況 觀察組的血清MIF含量為(9.08±2.19)μg/L，顯著高于對照組的(1.98±0.92)μg/L(t=8.272,P=0.000)。

2.3 兩組患者HBV cccDNA陽性率情況 觀察組的HBV cccDNA陽性率為50.0%，對照組為2.6%，觀察組的HBV cccDNA陽性率顯著高于對照組(P<0.05)，見表2。

表1 兩組患者ALT、TBiL、AST水平比較

2.4 相關(guān)性分析 在觀察組中，直線相關(guān)分析顯示血清HBV cccDNA陽性率與血清ALT、TBiL、AST、MIF含量都呈現(xiàn)顯著正相關(guān)性(P<0.05)，見表3。

表2 兩組患者HBV cccDNA陽性率比較

表3 乙肝患者血清HBV cccDNA陽性率與肝功能的相關(guān)性比較

3 討論

目前乙型肝炎的肝細(xì)胞損傷機(jī)制尚不明確，一般認(rèn)為是由機(jī)體免疫應(yīng)答引起的病理損傷所致，其病理損傷部位主要以淋巴細(xì)胞浸潤為主，HBV感染所引起的機(jī)體免疫應(yīng)答異常與細(xì)胞因子的紊亂有關(guān)[11,12]。MIF是一種含有115個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，能夠抑制巨噬細(xì)胞游走，促進(jìn)巨噬細(xì)胞在炎癥局部聚集和分泌一些細(xì)胞因子[13]。有研究表明慢性乙肝及肝硬化患者血清MIF水平均升高，其中肝硬化患者血清MIF比慢性乙肝患者增高[14]。還有研究表明隨著HBV感染相關(guān)性肝病肝細(xì)胞病理損傷的加重和癌變，MIF表達(dá)增加[15]。本研究顯示觀察組的血清MIF含量為(9.08±2.19)μg/L，顯著高于對照組的(1.98±0.92)μg/L。從機(jī)制上分析，MIF經(jīng)細(xì)菌代謝產(chǎn)物脂多糖及細(xì)胞因子刺激后由巨噬細(xì)胞釋放，以增強(qiáng)巨噬細(xì)胞促炎細(xì)胞因子[16]。并且MIF可上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶的功能(MMPs)功能，通過上調(diào)MMPs的表達(dá)而介導(dǎo)細(xì)胞基質(zhì)的降解[17]。尤其是在肝炎的免疫病理損傷中，肝細(xì)胞可分泌大量MIF，介導(dǎo)其他細(xì)胞因子損傷肝細(xì)胞[18]。

從世界范圍來看，HBV范圍愈加廣泛，復(fù)制場所為肝細(xì)胞，在HBV復(fù)制周期當(dāng)中HBV cccDNA具有重大意義，被認(rèn)為是HBV復(fù)制、感染的一項(xiàng)重要標(biāo)志[19]。HBV cccDNA是HBV前基因組RNAs復(fù)制的原始模板，是HBV循環(huán)復(fù)制以及持續(xù)感染的關(guān)鍵因素。HBV cccDNA的形成對于HBV具有重要意義，是HBV在肝細(xì)胞中發(fā)生復(fù)制行為的最初環(huán)節(jié)，是HBV發(fā)生各種行為的一個(gè)原始模板。研究顯示，在血清HBV DNA明顯降低的時(shí)候，HBsAg幾乎沒有變化，HBV cccDNA與HBV DNA仍然存在，HBsAg水平并不能完全反映HBV cccDNA的水平[20]。特別是肝臟屬于HBV復(fù)制的重要場所，臨床上對HBV cccDNA進(jìn)行檢測，可更好的了解在肝細(xì)胞中HBV的復(fù)制程度與感染狀態(tài)。本研究顯示觀察組的HBV cccDNA陽性率為50.0%，對照組為2.6%，觀察組的HBV cccDNA陽性率顯著高于對照組。

有研究表明慢性乙肝患者血清MIF水平較正常人增高，且與ALT水平和肝臟炎性反應(yīng)壞死程度存在正相關(guān)。本研究直線相關(guān)分析顯示觀察組的血清HBV cccDNA陽性率與血清ALT、TBiL、AST、MIF含量都呈現(xiàn)顯著正相關(guān)性(P<0.05)，表明MIF在乙肝免疫清除過程中可能參與了肝臟的損傷過程。MIF是一種主要由巨噬細(xì)胞和活化T淋巴細(xì)胞分泌的可溶性淋巴因子，可抑制巨噬細(xì)胞移動(dòng)；相關(guān)研究證實(shí)MIF與HBV感染所致的肝臟炎性反應(yīng)及肝細(xì)胞癌的形成密切相關(guān)[21～22]。

總之，乙肝患者體內(nèi)血清MIF水平顯著升高，也伴隨有HBV cccDNA的陽性表達(dá)，兩者存在顯著的相關(guān)性。