胰腺癌組織轉(zhuǎn)錄中介因子1及趨化因子受體-4的表達(dá)特點(diǎn)及臨床意義

符亮，吳冬冰，萬鴻興

作者單位：三亞市人民醫(yī)院消化內(nèi)科，海南 三亞 572000

胰腺癌是一種惡性程度很高的消化道惡性腫瘤，其診斷和治療都很困難，約90%是起源于腺管上皮的導(dǎo)管腺癌［1］。臨床常見表現(xiàn)為上腹部飽脹不適、疼痛，還可能伴有黃疸、食欲不振、惡心、嘔吐、消瘦、乏力等癥狀［2］。目前根本的治療原則是以外科手術(shù)治療為主，還包括姑息治療、對癥支持治療［3］。胰腺癌作為一類預(yù)后較差的惡性腫瘤，早期不易發(fā)現(xiàn)，早期的確診率不高，手術(shù)死亡率較高，現(xiàn)如今如何提高胰腺癌的早期診斷率已成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)問題［4］。為探討中轉(zhuǎn)錄中介因子1（TIF1β）及趨化因子受體-4（CXCR4）蛋白水平與胰腺癌的關(guān)系，本研究采用免疫組化方法檢測胰腺癌和癌旁組織中TIF1β、CXCR4蛋白表達(dá)情況并分析其與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系，報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料選取2012年1月至2017年5月三亞市人民醫(yī)院確診為胰腺癌病人病理標(biāo)本180例，其中胰腺癌標(biāo)本（病灶組）100例，癌旁組織標(biāo)本（癌旁組）80例。臨床資料通過回顧病人的病歷記錄和病例報告獲得。病灶組，男52例、女48例，年齡范圍為34～78歲，年齡（59.1±11.7）歲；腫瘤的分化程度：高分化31例，中分低化69例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移56例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移44例；T分期：Ⅰ期33例、Ⅱ期21例、Ⅲ期26例、Ⅳ期20例；癌旁組，男36例、女44例，年齡范圍為33～80歲，年齡（60.1±12.5）歲，癌旁組織均經(jīng)病理證實(shí)為炎癥或正常黏膜。兩組病人的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝0.553，P＝0.581，χ2＝0.872，P＝0.351）。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

1.2納入排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn) （1）術(shù)前未合并其他部位惡性腫瘤；（2）術(shù)后病理證實(shí)為胰腺癌；（3）病人腫瘤實(shí)施手術(shù)根治性切除，術(shù)后生存期＞30 d，且在圍術(shù)期沒有發(fā)生并發(fā)癥；（4）所有病人均有完整術(shù)后病理資料；（5）術(shù)前未接受放化療。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn) （1）合并其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者。（2）未能完成隨訪者。（3）貧血及凝血功能障礙；（4）風(fēng)濕及免疫系統(tǒng)疾??；（5）嚴(yán)重的肝腎功能疾??；（6）甲狀腺功能障礙；（7）因其他部位腫瘤進(jìn)行過放化療治療者。

1.3免疫組化染色方法標(biāo)本經(jīng)脫蠟、脫水、高溫修復(fù)抗原、3%過氧化氫和山羊血清封閉非特異性蛋白后，選用TIF1β抗體（美國Sigma公司）、CXCR4抗體（美國eBioscience公司）進(jìn)行鏈霉素親和素-過氧化酶復(fù)合物法，對兩種抗體的操作應(yīng)嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4免疫組化判定標(biāo)準(zhǔn)PBS代替一抗作為陰性對照，結(jié)果作為陰性；陽性對照以所提供組織按照說明書方法染色，CXCR4表達(dá)陽性細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有淡黃色或棕黃色著色，TIF1β表達(dá)陽性細(xì)胞核內(nèi)有淡黃色或棕黃色著色。每例標(biāo)本采用隨機(jī)數(shù)字表法選取10個視野（400倍光鏡下），每個視野計(jì)數(shù)100個細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)，取其平均值作為陽性百分率。采取二次計(jì)分法：先將染色按強(qiáng)度計(jì)分：棕褐色3分，棕黃色2分，淡黃色1分，無色0分，然后將陽性細(xì)胞所占百分比計(jì)分，陽性細(xì)胞占比≥75%為3分，51%～75%為2分，25%～50%為1分，低于25%為0分。將（細(xì)胞數(shù)得分+染色強(qiáng)度得分）作為判斷表達(dá)的結(jié)果，5～6分：強(qiáng)陽性（+++），3～4分：中等陽性（++），1～2分：弱陽性（+），0分：陰性（-）。所有病理切片的結(jié)果都是年資高的病理醫(yī)師通過盲法評定。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)分析，采用±s描述，兩組間采用t檢驗(yàn)，多因素方差分析采用Cox比例風(fēng)險回歸模型分析；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩組胰腺癌組織標(biāo)本中的TIF1β、CXCR4蛋白表達(dá)情況比較病灶組和癌旁組的TIF1β蛋白表達(dá)陽性率分別為78.00%、12.50%（χ2＝76.309，P＜0.001），見表1。CXCR4蛋白陽性率分別為82.00%、13.75%（χ2＝82.902，P＜0.01），見表2。

表1 胰腺癌病灶組及癌旁組標(biāo)本中TIF1β蛋白表達(dá)情況比較

表2 胰腺癌病灶組及癌旁組標(biāo)本中CXCR4蛋白表達(dá)情況比較

2.2胰腺癌組織標(biāo)本中TIF1β、CXCR4蛋白表達(dá)與病人臨床病理學(xué)特征的關(guān)系TIF1β、CXCR4蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T分期有密切關(guān)系（P＜0.05），與病人的年齡、性別、分化程度無明顯關(guān)系（P＞0.05）。見表3。

表3 胰腺癌組織標(biāo)本中TIF1β、CXCR4蛋白表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系（n＝100）

2.3胰腺癌組織中TIF1β、CXCR4蛋白表達(dá)的相關(guān)性及與預(yù)后關(guān)系的多因素分析胰腺癌組織中CXCR4與TIF1β的表達(dá)呈正相關(guān)（r＝0.676；P＜0.01）；Cox風(fēng)險比例回歸模型分析結(jié)果表示：CXCR4、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響胰腺癌預(yù)后的獨(dú)立危險因素（P＜0.05）。見表4，5。

表4 胰腺癌組織中CXCR4與TIF1β蛋白表達(dá)的相關(guān)性

表5 胰腺癌組織中CXCR4和TIF1β與臨床預(yù)后的關(guān)系

3 討論

胰腺癌發(fā)病隱匿，惡性程度高，發(fā)現(xiàn)時常到達(dá)中晚期，5年生存率＜1%，該病還與性別存在一定聯(lián)系，絕經(jīng)前的婦女發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于男性病人，絕經(jīng)后婦女的發(fā)病率與男性病人相差無幾［5］。吸煙、飲酒、高脂肪和高蛋白飲食、環(huán)境污染及遺傳因素等均與胰腺癌發(fā)病有關(guān)，且近幾年的調(diào)查報告發(fā)現(xiàn)糖尿病人群中胰腺癌的發(fā)病率明顯高于普通人群［6］。病人常表現(xiàn)為上腹部飽脹不適、疼痛，還可能伴有黃疸、食欲不振、惡心、嘔吐、消瘦、乏力、焦慮、急躁、抑郁等癥狀，晚期病人還可能出現(xiàn)血栓性靜脈炎或動脈血栓形成［7］。目前臨床治療以外科手術(shù)為主，，其他方法包括姑息治療、對癥支持治療等適合于無法手術(shù)的病人，胰腺癌由于發(fā)病早期并無明顯癥狀，發(fā)現(xiàn)時間往往較晚，導(dǎo)致手術(shù)治療的時機(jī)已失去，故需要對胰腺癌病人實(shí)施綜合治療，綜合治療包括化療、放射治療、生物治療等［8］。近年來其發(fā)病率和死亡率近年來明顯上升，是預(yù)后較差的惡性腫瘤之一。

隨著對腫瘤分子生物學(xué)的研究，作為趨化因子的CXCR4在在消化道腫瘤進(jìn)展中的作用逐步被認(rèn)知，CXCR4通過促進(jìn)新生血管的生成，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞特異性遷移，胰腺癌組織中CXCR4呈現(xiàn)淡黃色或棕黃色著色，主要著色部位為細(xì)胞核，在正常胰腺組織中無表達(dá)，癌旁組織中因會存在少許遷移的癌細(xì)胞，也會呈現(xiàn)出少量陽性顯色［9］。由此可以解釋病灶組CXCR4蛋白陽性率明顯高于癌旁組，分別為82.00%、13.75%。TIF1β主要功能為轉(zhuǎn)錄抑制，還與細(xì)胞分化、增殖、凋亡、腫瘤轉(zhuǎn)移形態(tài)有關(guān)，在胰腺癌部位出現(xiàn)陽性顯色，表現(xiàn)為細(xì)胞核內(nèi)有淡黃色或棕黃色著色，在癌旁組織中與CXCR4狀況相似，也會呈現(xiàn)出少量陽性顯色［10］。故病灶組TIF1β蛋白表達(dá)陽性率明顯高于癌旁組，分別為78.00%、12.50%。

研究表明，TIF1β、CXCR4蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T分期有密切關(guān)系，結(jié)果分析如下。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是腫瘤已到達(dá)中晚期階段的重要標(biāo)志，T分期越高，病人體內(nèi)腫瘤惡性程度也越高，分期越高越接近晚期，所以與體內(nèi)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞特異性遷移的CXCR4與TIF1β蛋白的表達(dá)也會同樣呈上升趨勢［11-15］。在性別方面已有研究發(fā)現(xiàn)男性發(fā)病率高于女性，但不能保證本研究取樣的隨機(jī)性，故在年齡方面未顯示出TIF1β、CXCR4蛋白的表達(dá)的明顯。研究結(jié)果顯示，TIF1β、CXCR4蛋白的表達(dá)與病人的年齡、分化程度無明顯關(guān)系，可能與目前并無確切資料顯示此兩種蛋白與病人的年齡、分化程度的確切關(guān)系，目前還處于研究階段，需要更大的樣本數(shù)據(jù)得出更具權(quán)威性的結(jié)論。胰腺癌組織中CXCR4與TIF1β的表達(dá)呈正相關(guān)；Cox風(fēng)險比例回歸模型分析結(jié)果表示：CXCR4、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響胰腺癌預(yù)后的獨(dú)立危險因素，提示我們可將CXCR4、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對胰腺癌預(yù)后進(jìn)行判斷。

綜上所述，TIF1β、CXCR4蛋白在胰腺癌組織中高表達(dá)，并且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，相關(guān)指標(biāo)的檢測可能為疾病早期診斷及治療提供科學(xué)依據(jù)。