病原微生物盲樣檢測(cè)結(jié)果的探討

□ 張春鵬 李 媛 馬妍娜 王 波 徐州市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督綜合檢驗(yàn)檢測(cè)中心

實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制考核是評(píng)價(jià)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室工作質(zhì)量與水平的重要方式[1]?？己诵问街饕侵鞴懿块T組織的能力驗(yàn)證、盲樣考核，由中國合格評(píng)定委員會(huì)（CNAS）認(rèn)可的第三方檢測(cè)服務(wù)機(jī)構(gòu)提供考核樣品。這些考核形式屬于實(shí)驗(yàn)室的外部質(zhì)量控制，當(dāng)考核出現(xiàn)不滿意結(jié)果時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)深入分析原因、實(shí)施糾正措施，并驗(yàn)證措施的有效性。對(duì)參加能力驗(yàn)證且有穩(wěn)定滿意表現(xiàn)的合格評(píng)定機(jī)構(gòu)，CNAS在各類評(píng)審中可考慮適當(dāng)簡(jiǎn)化相關(guān)項(xiàng)目的能力確認(rèn)過程[2]。

1 材料與方法

1.1 質(zhì)控樣品

來自組織單位發(fā)放的含有待測(cè)菌的凍干粉樣品1支，以西林瓶膠塞鋁蓋封口。盲樣有2種致病菌，報(bào)告結(jié)果是所有檢出菌種的名稱。

1.2 培養(yǎng)基及試劑

商品培養(yǎng)基和生化鑒定試劑盒購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；質(zhì)控菌株購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心；革蘭氏陰性和陽性細(xì)菌鑒定卡購自法國梅里埃公司。均在有效期內(nèi)。

1.3 儀器與設(shè)備

VITEK2全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)，法國梅里埃；JY02S型紫外分析儀，北京君意東方電泳設(shè)備有限公司；SPX-250生化培養(yǎng)箱，上海躍進(jìn)生化培養(yǎng)箱；DG250厭氧培養(yǎng)箱，英國DWS；BX41熒光顯微鏡，日本奧林巴斯；HVE-50高壓滅菌器，日本Hirayama。所有儀器設(shè)備均性能良好，校準(zhǔn)維護(hù)均在有效期內(nèi)。

表1 在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征

表2 1號(hào)菌生化試驗(yàn)結(jié)果

表3 2號(hào)菌生化試驗(yàn)結(jié)果

1.4 檢測(cè)方法

依據(jù)食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)GB 4789-2016微生物檢驗(yàn)方法及組織單位提供的作業(yè)指導(dǎo)書。

2 結(jié)果與分析

2.1 增菌培養(yǎng)和劃線分離

將質(zhì)控樣品接種到腦心浸出液肉湯（BHI）培養(yǎng)基中，接種兩瓶，置于生化培養(yǎng)箱和厭氧培養(yǎng)箱中，36 ℃下培養(yǎng)24～48 h后，兩瓶增菌液均混濁。用接種環(huán)從增菌液中挑取1環(huán)接種到致病菌各類選擇性平板上，培養(yǎng)24～48 h，觀察平板上菌落的特征。發(fā)現(xiàn)在李斯特氏菌顯色瓊脂平板、PALCAM瓊脂平板和CN瓊脂平板上存在2種不同的可疑菌落，分別編號(hào)為1號(hào)菌和2號(hào)菌，菌落特征見表1。

2.2 革蘭氏染色和生化試驗(yàn)[3-4]

1號(hào)菌疑似單核細(xì)胞增生李斯特氏菌，革蘭氏染色結(jié)果為革蘭氏陽性短桿菌，生化試驗(yàn)結(jié)果見表2。根據(jù)生化試驗(yàn)結(jié)果，可確定1號(hào)菌為單核細(xì)胞增生李斯特氏菌。從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落，用生理鹽水制備成一定濁度的菌懸液，使用革蘭氏陽性細(xì)菌鑒定卡進(jìn)行鑒定，置于VITEK2全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)進(jìn)行分析，同時(shí)用標(biāo)準(zhǔn)菌株做陽性對(duì)照，結(jié)果為單核細(xì)胞增生李斯特氏菌，并且陽性對(duì)照符合。

2號(hào)菌菌落涂片染色為革蘭氏陰性無芽胞桿菌。在紫外線下檢查濾膜時(shí)，菌落產(chǎn)熒光。產(chǎn)熒光的菌落進(jìn)行氧化酶測(cè)試、乙酰胺肉湯試驗(yàn)及金氏B培養(yǎng)基試驗(yàn)，結(jié)果均為陽性，證實(shí)2號(hào)菌為銅綠假單胞菌。采用VITEK2全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)作比對(duì)，提示該菌為銅綠假單胞菌。

根據(jù)以上結(jié)果可判斷該質(zhì)控樣品中檢出2種致病菌：?jiǎn)魏思?xì)胞增生李斯特氏菌和銅綠假單胞菌，結(jié)果為滿意，說明實(shí)驗(yàn)室目前的檢測(cè)能力狀況良好。

3 結(jié)論

單核細(xì)胞增生李斯特氏菌，是一種人畜共患病的病原菌[5]，感染病死亡率高，在歐美國家常有發(fā)生，主要表現(xiàn)為敗血癥、腦膜炎，甚至導(dǎo)致死亡[6]。該菌在4 ℃的環(huán)境中仍可生長(zhǎng)繁殖，是冷藏食品威脅人類健康的主要病原菌。銅綠假單胞菌是一種常見的條件致病菌，原稱綠膿桿菌，存在的重要條件是潮濕的環(huán)境，水、空氣、正常人的皮膚、呼吸道和腸道等都有存在。該菌對(duì)不良環(huán)境抵抗力強(qiáng)，可能引起急性腸道炎、腦膜炎、敗血癥和皮膚炎癥等疾病[7]。因此不斷加強(qiáng)對(duì)病原菌的檢測(cè)能力，對(duì)食物中毒原因的排查具有重要的意義。質(zhì)控考核是對(duì)檢測(cè)人員技能、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制情況的檢驗(yàn)[8]，實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)并結(jié)合作業(yè)指導(dǎo)書的方法進(jìn)行操作，實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，保證獲得滿意的檢測(cè)結(jié)果。