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    亞麻籽提取物對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化保護(hù)機(jī)制研究

    2019-08-22 11:32:08陳春妮趙雪儒袁啟恒
    中國(guó)油脂 2019年8期
    關(guān)鍵詞:亞麻半乳糖胸腺

    王 榮,楊 寬,陳春妮,趙雪儒,袁啟恒,秦 蓓

    (西安醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院,西安 710021)

    亞麻又稱(chēng)胡麻,是最古老的纖維作物之一,也是世界十大油料作物的一種[1]。亞麻籽中含有油脂、蛋白質(zhì)、木酚素、維生素、黃酮等多種成分[2]?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,亞麻籽提取物具有降血壓、調(diào)血脂、抗癌等多種功效[3]。目前亞麻籽的主要臨床應(yīng)用局限在腸燥便秘、皮膚干燥瘙癢和毛發(fā)枯萎脫落等方面[4]。因此,有必要對(duì)亞麻籽的藥理活性進(jìn)行深入研究。

    衰老是生物體隨著時(shí)間推移出現(xiàn)的不可逆退行性改變。自由基學(xué)說(shuō)是目前衰老公認(rèn)的且研究最為廣泛的學(xué)說(shuō)。天然產(chǎn)物能夠清除自由基減弱機(jī)體的氧化損傷[5]。已有文獻(xiàn)報(bào)道,亞麻籽提取物具有抗氧化作用[6],對(duì)CCl4和D-半乳糖胺所致的小鼠急性肝損傷具有保護(hù)作用,其作用機(jī)制可能與其清除自由基、提高抗氧化能力有關(guān)[4,7]。目前關(guān)于亞麻籽提取物的抗衰老研究鮮有報(bào)道。本研究擬采用D-半乳糖皮下注射建立小鼠亞急性衰老模型,測(cè)定小鼠全血和組織(腦、肝、腎)中丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)活性的變化,全面評(píng)價(jià)亞麻籽提取物在衰老小鼠體內(nèi)的抗氧化作用,為亞麻籽提取物的開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    亞麻籽提取物,購(gòu)自陜西嘉禾植物化工有限責(zé)任公司,HPLC法檢測(cè)亞麻木酚素含量為40%;D-半乳糖,購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司,批號(hào)為H20J9C53453;過(guò)氧化氫酶(CAT)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)試劑盒和BCA試劑盒,購(gòu)自南京建成生物工程研究所。體重(20±2)g的清潔級(jí)雄性昆明小鼠50只,購(gòu)自成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(川)2015-030。

    1510自動(dòng)全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀,美國(guó)Thermo Fisher Scientific;YP50001電子分析天平,美國(guó)OHAUS;Biofuge Stratos高速冷凍離心機(jī),美國(guó)Thermo Fisher Scientific;恒溫水浴鍋,天津市泰斯特儀器有限公司;T10微量組織勻漿器,艾卡儀器設(shè)備有限公司。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模及分組

    本實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)西安醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常規(guī)飼養(yǎng),飼養(yǎng)條件為自然光照,12 h晝夜交替,溫度(20±2)℃,相對(duì)濕度為50%~70%,顆粒飼料喂養(yǎng),自由攝食飲水。小鼠經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后分組進(jìn)行處理。50只小鼠,隨機(jī)取10只設(shè)為正常組,其余40只頸部皮下注射D-半乳糖[8],給藥劑量為500 mg/kg,小鼠注射體積0.1 mL/10 g,每日1次,連續(xù)注射8周。正常組注射生理鹽水。

    造模8周后,將40只模型小鼠隨機(jī)分為4組,每組10只,分別設(shè)為模型組,亞麻籽提取物高、中、低劑量組。小鼠灌胃給藥,灌胃體積0.1 mL/10 g,每日1次,連續(xù)給藥6周。亞麻籽提取物組給藥劑量分別為600、300 mg/kg和150 mg/kg,正常組和模型組給予生理鹽水。灌胃同時(shí),正常組頸部皮下注射生理鹽水,其余小鼠繼續(xù)頸部皮下注射D-半乳糖。

    1.2.2 指標(biāo)檢測(cè)

    末次給藥后,小鼠禁食24 h后,眼眶采血,血液抗凝,按試劑盒方法制備溶血液,測(cè)定全血中CAT、SOD、GSH-Px活力和MDA含量。小鼠脫頸處死,解剖迅速取小鼠胸腺和脾臟計(jì)算臟器指數(shù);另取出肝、腦和腎,按質(zhì)量與體積比1∶ 9加入生理鹽水,冰浴勻漿,制備10%組織勻漿液,2 500 r/min離心10 min,取上清液,按試劑盒方法分別測(cè)定各組織勻漿液中CAT、SOD、GSH-Px活力和MDA含量。

    1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

    所有數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析,多組間比較采用Oneway-Anova Dunnett雙側(cè)t檢驗(yàn),P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 亞麻籽提取物對(duì)衰老小鼠胸腺和脾臟指數(shù)的影響(見(jiàn)表1)

    表1 亞麻籽提取物對(duì)衰老小鼠胸腺和脾臟指數(shù)的影響

    注:與正常組比較,**P<0.01,*P<0.05;與模型組比較,##P<0.01,#P<0.05。下同。

    脾臟是外周免疫器官之一,胸腺是重要的淋巴器官,因此脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)能反映小鼠的衰老狀態(tài)。由表1可知,模型組小鼠脾臟指數(shù)提高,而胸腺指數(shù)降低,與正常組比較,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01),表明造模成功。與模型組相比,亞麻籽提取物高劑量組能顯著降低小鼠的脾臟指數(shù),提高胸腺指數(shù)(P<0.05)。

    2.2 亞麻籽提取物對(duì)衰老小鼠全血和組織中MDA含量的影響(見(jiàn)表2)

    表2 亞麻籽提取物對(duì)衰老小鼠全血和組織中MDA含量的影響

    MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物,被認(rèn)為是衰老的指標(biāo),MDA含量隨著衰老而增加。由表2可知,與正常組相比,模型組小鼠全血和組織(腦、肝和腎)中MDA含量顯著增加(P<0.01),說(shuō)明造模成功。亞麻籽提取物高、中、低劑量組小鼠全血中MDA含量顯著低于模型組,高劑量組和中劑量組小鼠組織中MDA含量與模型組具有顯著差異(P<0.05)。以上結(jié)果表明,亞麻籽提取物能降低衰老小鼠腦、肝和腎臟以及全血中MDA含量,且對(duì)全血的影響最顯著。

    2.3 亞麻籽提取物對(duì)衰老小鼠全血和組織中SOD活力的影響(見(jiàn)表3)

    表3 亞麻籽提取物對(duì)衰老小鼠全血和組織中SOD活力的影響

    SOD是機(jī)體抗氧化酶系中一類(lèi)重要的抗氧化酶,對(duì)超氧陰離子自由基具有清除作用,進(jìn)而減少脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)。SOD的活力能反映機(jī)體清除氧自由基的能力。由表3可知,與正常組相比,模型組小鼠全血和組織(腦、肝和腎)中SOD的活力顯著降低(P<0.05或P<0.01)。與模型組相比,亞麻籽提取物高劑量組和中劑量組顯著提高了小鼠全血中SOD的活力;亞麻籽提取物3個(gè)劑量組均顯著增加了小鼠腦和肝組織中SOD活力;高劑量組顯著提高了小鼠腎組織中SOD的活力。結(jié)果表明,亞麻籽提取物能提高衰老小鼠全血和組織中SOD的活力。

    2.4 亞麻籽提取物對(duì)衰老小鼠全血和組織中CAT活力的影響(見(jiàn)表4)

    表4 亞麻籽提取物對(duì)衰老小鼠全血和組織中CAT活力的影響

    CAT亦是機(jī)體重要的抗氧化酶系,具有分解過(guò)氧化氫的作用,可阻斷脂質(zhì)過(guò)氧化的一級(jí)引發(fā)反應(yīng)。由表4可知,模型組小鼠全血和腦、肝、腎中CAT的活力較正常組顯著降低(P<0.05或P<0.01)。小鼠腦和全血中亞麻籽提取物3個(gè)劑量組的CAT活力與模型組相比,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);亞麻籽提取物高劑量組顯著提高了小鼠肝和腎中CAT活力(P<0.05)。

    2.5 亞麻籽提取物對(duì)衰老小鼠全血和組織中GSH-PX活力的影響(見(jiàn)表5)

    表5 亞麻籽提取物對(duì)衰老小鼠全血和組織中GSH-Px活力的影響

    GSH-Px通過(guò)催化GSH還原過(guò)氧化物,進(jìn)而抑制活性氧的生成。由表5可知,與正常組相比,模型組小鼠全血和腦、肝、腎中GSH-Px活力顯著降低(P<0.01)。亞麻籽提取物高劑量組的小鼠組織中的GSH-Px活力與模型組相比,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01);亞麻籽提取物高劑量組和中劑量組能顯著提高衰老小鼠全血中GSH-Px活力(P<0.05)。

    2.6 討論

    衰老模型的建立是本研究的第一步。D-半乳糖皮下注射是衰老造模的經(jīng)典方法。過(guò)多的D-半乳糖在醛糖還原酶的催化下,生成半乳糖醇,而半乳糖醇不能被代謝,堆積在細(xì)胞內(nèi)的半乳糖醇導(dǎo)致細(xì)胞腫脹、代謝紊亂,最終誘導(dǎo)細(xì)胞衰老。本研究以D-半 乳糖連續(xù)小鼠頸部皮下注射8周建立衰老模型。胸腺是重要的免疫器官,衰老小鼠的胸腺較其他臟器更易出現(xiàn)萎縮[9]。脾臟是外周的免疫器官,脾腫大是腫瘤等疾病的征兆[8]。由研究結(jié)果可知,本研究中模型小鼠胸腺指數(shù)降低、脾臟指數(shù)增加。MDA通常被作為衰老模型測(cè)定的指標(biāo),通過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),與正常組相比,模型小鼠全血和3個(gè)重要臟器MDA的含量顯著增加,表明衰老小鼠模型造模成功。

    衰老伴隨著心血管、老年癡呆、糖尿病等多種退行性疾病,嚴(yán)重威脅生命。衰老自由基學(xué)說(shuō)于1956年首次由Harman提出。大量研究表明,機(jī)體內(nèi)自由基的不斷蓄積與衰老的發(fā)生機(jī)制有關(guān)[10]。機(jī)體氧代謝過(guò)程中所產(chǎn)生的活性氧過(guò)多或其清除速率降低會(huì)加速衰老并引發(fā)如癌癥、心血管疾病、老年癡呆等各種退行性疾病。因此,抗衰老藥物的研發(fā)主要針對(duì)以下3個(gè)方面:①直接清除自由基;②抑制脂質(zhì)過(guò)氧化;③提高抗氧化酶活力。本研究所用的亞麻籽提取物中亞麻木酚素含量高達(dá)40%,已有研究報(bào)道木酚素具有抗氧化作用[4,11]。本研究結(jié)果顯示,亞麻籽提取物可降低小鼠全血和肝、腎、腦中MDA含量,增加SOD、CAT和GSH-Px的活力,特別是高劑量組的各項(xiàng)指標(biāo)與模型組相比有顯著差異,提示亞麻籽提取物可通過(guò)抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)和激活體內(nèi)抗氧化酶系發(fā)揮對(duì)衰老小鼠的保護(hù)作用。

    3 結(jié) 論

    本文研究了亞麻籽提取物對(duì)D-半乳糖所致衰老小鼠的體內(nèi)抗氧化作用。結(jié)果顯示,亞麻籽提取物高劑量組(600 mg/kg)能顯著降低小鼠的脾臟指數(shù),提高小鼠的胸腺指數(shù),顯示出對(duì)衰老小鼠的保護(hù)作用。這種保護(hù)作用可能與亞麻籽提取物降低小鼠全血和組織(胸、肝、腎)中MDA的含量,增加SOD、CAT和GSH-Px活力有關(guān)。

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