浸潤性乳腺癌組織中miRNA-206表達與臨床病理及預后的關(guān)系*

楊永德，周焱琳

(重慶三峽中心醫(yī)院，重慶 404000)

浸潤性乳腺癌是乳腺癌眾多類型中的一種，發(fā)病率逐年升高，已嚴重影響我國女性身心健康[1]。由于浸潤性乳腺癌早期癥狀不明顯，多數(shù)患者容易忽視，因此死亡率偏高。目前，多數(shù)學者正致力于浸潤性乳腺癌的研究，以期發(fā)現(xiàn)延緩或抑制浸潤性乳腺癌發(fā)展的新方法。

目前，已有多數(shù)微RNA(microRNA，mRNA)被發(fā)現(xiàn)參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程[2-4]。有研究[5]已證實miRNA-206通過調(diào)控Cx43參與乳腺癌細胞的轉(zhuǎn)移。但關(guān)于miRNA-206與浸潤性乳腺癌患者預后的關(guān)系并未闡明。因此，筆者選取121例浸潤性乳腺癌患者作為研究對象，分析miRNA-206表達與臨床病理及預后的關(guān)系?，F(xiàn)報道如下：

1材料與方法

1.1 研究對象 選擇2014年3月～2016年5月在重慶三峽中心醫(yī)院接受治療的121例浸潤性乳腺癌患者作為研究對象。所有患者均經(jīng)病理穿刺活檢證實為乳腺癌。121例浸潤性乳腺癌患者年齡36～65歲，平均年齡48.37±7.25歲，絕經(jīng)前患者85例，絕經(jīng)后患者36例。納入標準：①接受手術(shù)切除治療；②有保存完好的乳腺癌組織及癌旁組織；③病理穿刺活檢證實為浸潤性乳腺癌；④簽署了知情同意書。排除標準：①并發(fā)其他組織腫瘤；②接受過放、化療、免疫治療等；③隨訪失聯(lián)；④存在手術(shù)禁忌癥。收集患者年齡、病理診斷結(jié)果、病理類型、TNM分期、組織學分期、雌激素受體(ER)、尿激素受體(PR)和人表皮生長因子受體2(HER-2)表達情況、月經(jīng)狀況、腫瘤直徑及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)等信息。采用電話隨訪方式了解患者腫瘤復發(fā)、轉(zhuǎn)移及生存預后等情況，每月電話隨訪一次，隨訪至2018年12月。本研究經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2 試劑和儀器 TRIzol Reagent總RNA提取試劑盒，PrimerScript反轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本TaKaRa公司)，7500 Real-Time PCR System(美國Applied Biosystems公司)，QubitTM4 Fluorometer核酸蛋白熒光定量儀(美國LIFE公司)。

1.3 方法 RT-qPCR法檢測浸潤性乳腺癌組織中miRNA-206表達：無菌環(huán)境下將浸潤性乳腺癌組織及癌旁組織分別置于研缽中研磨，取研磨液于離心管中離心15 min，3 500 r/min。取離心后上清液于EP管中，置于-80℃冰箱內(nèi)保存，待檢。取EP管中上清液，將其加入總RNA提取試劑盒中，提取乳腺組織中總RNA。取2 μg總RNA置于反轉(zhuǎn)錄試劑盒中，進行反轉(zhuǎn)錄反應，合成cDNA。最后，用PCR擴增儀進行擴增，反應條件為94℃ 10 min，40個循環(huán)，94℃ 45 s，60℃ 45 s，72℃45 s。以U6作為內(nèi)參。miRNA-206基因序列F：5’-ATCCAGTGCGTGTCGTG-3’；R：5’-TGCTTGGAATGTAAGGAAG-3’。U6基因序列F：5’-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3’，R：5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’。ΔCt=CtmiR-206-CtU6，用2-ΔΔCt表示浸潤性乳腺癌患者腫瘤組織及癌旁組織中miRNA-206的相對表達量。

2結(jié)果

2.1 miRNA-206在浸潤性乳腺癌組織中的表達 浸潤性乳腺癌組織中miRNA-206的相對表達量高于癌旁組織[(0.75±0.23) vs (0.12±0.06)]，差異有統(tǒng)計學意義(t=27.761，P<0.001)。

2.2 miRNA-206與浸潤性乳腺癌臨床病理的關(guān)系 見表1。以浸潤性乳腺癌組織中miRNA-206相對表達量的中位數(shù)(0.77)為界，將121例浸潤性乳腺癌組織分為高表達組和低表達組。浸潤性乳腺癌組織中miRNA-206相對表達量與年齡、腫瘤直徑、組織學分級、ER，PR和HER-2表達情況均無關(guān)(P>0.05)，而與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)有關(guān)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

表1 miRNA-206與浸潤性乳腺癌臨床病理的關(guān)系

2.3 浸潤性乳腺癌患者預后情況 見圖1。121例浸潤性乳腺癌患者1a，2a和3a生存率分別為84.30%(102/121)，75.21%(91/121)和66.94%(81/121)。miRNA-206高表達組1a，2a和3a生存率均低于miRNA-206低表達組[78.18%(43/55)，67.27%(37/55)和56.36%(31/55) vs 89.39%(59/66)，81.82%(54/66)和75.76%(50/66)]。miRNA-206高表達組患者平均生存時間低于低表達組[26.87個月(95%CI：23.80～29.95) vs 31.52個月(95%CI：29.34～33.69)]，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=5.570，P=0.018)。

2.4 影響浸潤性乳腺癌患者預后的因素分析 見表2。將浸潤性乳腺癌患者3a預后(生存=1，死亡=0)作為因變量，將可能與浸潤性乳腺癌患者3a預后相關(guān)的指標年齡(>50歲=1，≤50歲=0)、TNM分期(Ⅲ+Ⅳ=1，Ⅰ+Ⅱ=0)、組織學分級(Ⅲ+Ⅳ=1，Ⅰ+Ⅱ=0)、腫瘤直徑(>5 cm=1，≤5 cm=0)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(是=1，否=0)、ER(+=1，-=0)、PR(+=1，-=0)、HER-2(+=1，-=0)和miRNA-206(高表達=1，低表達=0)作為自變量納入Cox單因素分析，結(jié)果顯示浸潤性乳腺癌患者TNM分期、組織學分期、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER及miRNA-206相對表達量均與預后有關(guān)(P<0.05)。將Cox單因素分析有統(tǒng)計學意義的指標納入Cox多因素分析，結(jié)果顯示TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及miRNA-206相對表達量與浸潤性乳腺癌患者預后密切相關(guān)(P<0.05)。

表2 影響浸潤性乳腺癌患者預后的因素分析

圖1 miRNA-206高表達組與低表達組患者3a生存曲線

3討論乳腺癌是女性最為常見的惡性腫瘤之一，約占所有惡性腫瘤的8%～12%[6]。近年來，乳腺癌的發(fā)病率居高不下，尤其是歐美和北美等發(fā)達國家[7]。有研究[8]表明，乳腺癌患者的5年生存率偏低，尤其是浸潤性乳腺癌。由于浸潤性乳腺癌早期癥狀不明顯，多數(shù)患者就診時已處于晚期，錯過了最佳治療時間，因此預后往往不佳[9]。目前，浸潤性乳腺癌的發(fā)病機制并未完全闡明，多數(shù)學者認為浸潤性乳腺癌的發(fā)病與遺傳及癌癥干細胞有關(guān)[10-11]。mRNA是一類由20～25個核苷酸組成的非編碼RNA，多數(shù)mRNA已被證實參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程[12-14]。miRNA-206作為抑癌基因，在癌細胞增殖、凋亡、侵襲及遷移方面發(fā)揮重要作用，同時，也被證實有致癌作用[15]。目前，已有研究證實miRNA-206在胃癌、卵巢癌、黑色素瘤細胞、乳腺癌、肺癌和肝癌等腫瘤組織中異常表達[16]。本次研究分析浸潤性乳腺癌組織中miRNA-206的表達情況，探究其與臨床病理及預后的關(guān)系，以期為浸潤性乳腺癌的臨床診治奠定基礎(chǔ)。

本研究通過比較浸潤性乳腺癌組織及癌旁組織中miRNA-206的相對表達量，發(fā)現(xiàn)浸潤性乳腺癌組織中miRNA-206的相對表達量高于癌旁組織，因此，筆者推斷miRNA-206可能參與浸潤性乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程。通過分析浸潤性乳腺癌患者臨床病理資料與miRNA-206的相對表達量的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)浸潤性乳腺癌組織中miRNA-206相對表達量與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)有關(guān)。上述結(jié)果表明miRNA-206可能通過促進腫瘤細胞侵襲或遷移等促進浸潤性乳腺癌發(fā)展，進而影響預后，其機制有待進一步研究。筆者通過隨訪了解到121例浸潤性乳腺癌患者1a，2a和3a生存率分別為84.30%，75.21%和66.94%。通過比較miRNA-206高表達組和低表達組患者生存率，發(fā)現(xiàn)miRNA-206高表達組患者1a，2a和3a生存率均低于低表達組。比較兩組患者平均生存時間，發(fā)現(xiàn)miRNA-206高表達組患者平均生存時間低于低表達組患者。進一步通過Cox單因素及多因素回歸分析了影響浸潤性乳腺癌患者預后的相關(guān)因素，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及miRNA-206相對表達量與浸潤性乳腺癌患者預后密切相關(guān)。

綜上所述，miRNA-206在浸潤性乳腺癌中高表達。檢測浸潤性乳腺癌患者miRNA-206表達水平有助于了解預后。本文僅研究了miRNA-206在浸潤性乳腺癌患者中的表達情況，未能納入其他類型乳腺癌，且為單中心研究，樣本量有限，今后將進行大樣本、多中心研究，以期探究miRNA-206更多的價值。