苗藥羊奶奶葉的生藥學(xué)研究

1.江西省鷹潭市人民醫(yī)院藥劑科，江西 鷹潭 335000；2. 江西中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，江西 撫州 344000；3.江西民族傳統(tǒng)藥現(xiàn)代科技與產(chǎn)業(yè)發(fā)展協(xié)同創(chuàng)新中心，江西 南昌 330004

苗藥羊奶奶葉收載于《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(2003年版)，為胡頹子科胡頹子屬植物胡頹子ElaeagnuspungensThunb.、宜昌胡頹子ElaeagnushenryiWarb.以及蔓胡頹子ElaeagnusglabraThunb.的干燥葉，具有止咳平喘、消腫止血、收斂止瀉的功效，用于咳喘、外傷出血[1]。生于海拔1000 m以下的向陽山坡或路旁[2]。其中胡頹子葉始載于《本草拾遺》，1977年版《中國藥典》收載，中醫(yī)將其列為止咳平喘要藥。中成藥定喘靈、消炎止咳片、海珠喘息靈等均用胡頹子葉作為主要配方原料。宜昌胡頹子葉和蔓胡頹子葉在民間亦廣泛用于治療咳嗽、哮喘等病癥[3]。

現(xiàn)代研究表明胡頹子葉中含有單寧、黃酮苷、生物堿、有機(jī)酸、三萜及甾醇類等化合物，具有平喘、止咳、祛痰等藥理作用[4]。但宜昌胡頹子葉和蔓胡頹子葉的化學(xué)和藥理研究鮮有報道。已有的羊奶奶葉藥材標(biāo)準(zhǔn)中，性狀描述僅涉及宜昌胡頹子，顯微鑒別僅有粉末項，尚缺乏三種基原植物系統(tǒng)、詳盡的生藥學(xué)研究?；诖耍髡叻謩e對其性狀、顯微特征(葉橫切面、葉表面、粉末)、薄層色譜特征進(jìn)行研究，以期為羊奶奶葉的藥材鑒定和質(zhì)量評價提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 XY-200型高速多功能粉碎機(jī)；GZX-9070MBE電熱鼓風(fēng)干燥箱；麥克奧迪(Motic)BA410EF-UPR顯微鏡；Moticam pro 282A 顯微成像系統(tǒng)；TS100(Nikon)倒置生物顯微鏡；德國徠卡Leica RM2245輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)；TKY-BMB型石蠟包埋機(jī)。

1.2 材料 胡頹子葉采自貴陽花溪區(qū)高坡鄉(xiāng)，宜昌胡頹子葉采自畢節(jié)地區(qū)大方縣星宿彝族仡佬族鄉(xiāng)，蔓胡頹子采自布依族苗族自治州惠水縣擺金鎮(zhèn)。經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)慕澤涇老師鑒定分別為胡頹子科植物胡頹子E.pungens、宜昌胡頹子E.henryi 蔓胡頹子E.glabra的干燥葉。標(biāo)本現(xiàn)存于江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與民族藥研究中心標(biāo)本館。甘油、苯酚、水合氯醛、明膠、乙醇、甲醛、冰醋酸、二甲苯(AR)、番紅、固定綠、加拿大樹膠、石蠟等均為分析純。

2 方法

2.1 性狀鑒別 結(jié)合文獻(xiàn)和標(biāo)本對羊奶奶葉三種基原植物進(jìn)行性狀描述。

2.2 顯微鑒別 分別取各基原樣品3份，1份置水中煮沸，待室溫后沿脈切成0.3 cm×0.5 cm方塊置FAA固定液中固定，制成石蠟切片用于葉橫切面的顯微觀察；1份干燥后粉碎，過60目，用于羊奶奶葉的粉末鑒定；1份水煮軟化，用于撕去葉表面進(jìn)行觀察。

2.3 薄層鑒別 分別取羊奶奶葉各基原植物粉末1.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加入30 mL水和30 mL乙酸乙酯溶液，水浴回流提取60 min，過濾，濾液置于分液漏斗中，靜置分層，取上清液蒸干，甲醇溶解定容于5 mL容量瓶中，即得樣品溶液。精密稱取銀鍛苷對照品適量，加甲醇溶解后制成濃度為0.20 mg/mL的對照品溶液。照《中國藥典》2015年版4部薄層色譜法實驗，吸取對照品和和樣品溶液各10 μL點樣于硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(5∶5∶0.1)為展開系統(tǒng)，365 nm紫外燈下檢視。

3 結(jié)果

3.1 藥材性狀

3.1.1 胡頹子葉 葉革質(zhì)，橢圓形或長圓形，長5～10 cm，寬1～4 cm，先端鈍尖，基部寬楔形，全緣或微波狀，常向背面反卷，有時呈筒狀。葉上表面淺綠色或黃綠色，具光澤，散生褐色或黑褐色鱗片；下表面銀灰色，密被白色和散生棕褐色鱗片。主脈在葉上表面多略凹陷，在葉背面突出，密生黑褐色鱗片。葉柄粗短，長0.5～1 cm，灰黑色，上面有溝，密被褐色或深褐色鱗片。氣微，味微澀。如圖1所示。

3.1.2 蔓胡頹子葉 葉片革質(zhì)或薄革質(zhì)，卵形或卵狀橢圓形，稀長橢圓形，長4～12 cm，寬2～5 cm，頂端漸尖 基部圓形，邊緣全緣；葉上表面深綠色，具光澤，下表面黃褐色或灰綠色，密被深褐色或淺棕色鱗片；側(cè)脈6～8對，與中脈開展成50～60°的角，上面明顯或微凹下，下面凸起；葉柄棕褐色，長5～8 mm。如圖2所示。

3.1.3 宜昌胡頹子葉 葉革質(zhì)至厚革質(zhì)，闊橢圓形或倒卵狀闊橢圓形，長6～15 cm，寬3～6 cm，頂端漸尖或急尖，基部鈍形或闊楔形，邊緣有時稍反卷。幼葉上表面深綠色，被褐色鱗片，成熟葉上表面黃綠色或黃褐色，下面銀白色、密被白色和散生少數(shù)褐色鱗片；側(cè)脈5～7對，近邊緣分叉而互相連接或消失，上面不甚明顯，下面甚凸起；葉柄粗壯，長8～15 mm，黃褐色。如圖3所示。

3.2 葉橫切面

3.2.1 胡頹子 葉上下表皮均為1列呈類方形細(xì)胞，外壁均被角質(zhì)層，且上表皮角質(zhì)層厚于下表皮。下表皮外多見呈丁字狀的非腺毛，柄部由3～6個并列細(xì)胞組成，細(xì)胞壁角質(zhì)化；上部呈牛角狀二歧分枝，細(xì)胞壁木質(zhì)化。上表皮有下皮層，內(nèi)側(cè)為1～2列呈切向延長的厚角細(xì)胞；下表皮內(nèi)側(cè)有1～4列厚角細(xì)胞；主脈維管束周韌型或雙韌型，木質(zhì)部半月形，韌皮部多有不規(guī)則扁形分泌腔；維管束鞘纖維2至數(shù)個相聚，聚成斷續(xù)環(huán)帶。葉肉組織下表皮有時可見氣孔的斷面及非腺毛的縱切面；柵欄組織為2～3層圓柱形細(xì)胞。如圖4所示。

3.2.2 蔓胡頹子葉 葉主脈上、下表皮細(xì)胞外側(cè)角質(zhì)層均較胡頹子葉薄。上、下表皮非腺毛和內(nèi)側(cè)厚角細(xì)胞均較胡頹子葉多。韌皮部及皮部均有較多分泌腔。主脈周韌型維管束成半圓形，維管束鞘纖維分散環(huán)繞于維管束外，微木化。葉肉組織表皮細(xì)胞同主脈，上、下表皮均可見星狀、鱗片狀非腺毛的縱切面；柵欄組織為1～4層柱狀細(xì)胞，海綿組織細(xì)胞排列緊密。如圖5所示。

3.2.3 宜昌胡頹子葉 上、下表皮細(xì)胞外側(cè)角質(zhì)層較胡頹子和蔓胡頹子均薄。下表皮偶見鱗片狀非腺毛縱切面。維管束自葉先端到葉基部從外韌型到雙韌而后周韌型過渡，韌皮部集中多數(shù)分泌腔。中央髓部較小或無；維管束鞘排列成環(huán)帶狀，纖維壁較胡頹子厚。葉肉細(xì)胞同主脈，柵欄組織為1～3層長柱形細(xì)胞，海綿組織排列略緊密，寬度與柵欄組織近相等。如圖6所示。

3.3 葉表面觀 三種基原羊奶奶葉上表皮細(xì)胞均呈多角型或不規(guī)則形，垂周壁明顯波狀彎曲(圖7)，氣孔不定式，副衛(wèi)細(xì)胞4～7個，密被星狀和鱗鱗片(圖8)。下表皮細(xì)胞略有差異，其中胡頹子葉下表皮細(xì)胞呈多角形，壁略直(圖8)。蔓胡頹子葉下表皮鱗片比胡頹子更密(圖9)。宜昌胡頹子葉鱗片比胡頹子少(圖10)。

圖7 胡頹子老葉上表皮

圖8 胡頹子葉下表皮(示氣孔、非腺毛)

圖9 蔓胡頹子葉下表皮

圖10 宜昌胡頹子葉下表皮

3.4 粉末特征 3種基原羊奶奶葉藥材的粉末無差異，均呈黃綠色。盾狀鱗片無色、土黃色或黃棕色，多破碎，單個散在，直徑300～500μm，由無數(shù)一端尖銳的細(xì)長細(xì)胞放射排列組成，各細(xì)胞的側(cè)壁全部相連；柄部由數(shù)枚細(xì)胞組成，所有細(xì)胞壁全部木質(zhì)化。透明的星狀非腺毛，頭部直徑115 ～300 μm，由數(shù)十枚細(xì)長細(xì)胞組成，其一端略膨大，集中于中心，另一端漸尖，游離放射狀伸出，側(cè)壁僅在近中央的一端部分相連，柄部的組成與盾狀鱗片相似，細(xì)胞壁全部木質(zhì)化。草酸鈣柱晶，長2～4 μm。纖維壁厚，孔溝不明顯，直徑6～11 μm。葉上表皮細(xì)胞呈類多角形，垂周壁微波狀彎曲，略增厚；下表皮細(xì)胞呈多角形，壁薄，較平直；氣孔不定式，副衛(wèi)細(xì)胞4～7個。如圖11～15所示。

圖11 藥材粉末-盾狀鱗片

圖12 粉末-星狀非腺毛

圖13 粉末-上、下表皮 20X

圖14 粉末-纖維

圖15 粉末-柱晶

3.5 薄層鑒別 采用銀椴苷為對照品，以三氯甲烷:丙酮:甲酸(5∶5∶0.1)為展開系統(tǒng)，365 nm紫外燈下檢視，如圖16所示，斑點清晰，分離效果好。以此建立羊奶奶葉的薄層鑒別方法。

1.銀椴苷對照品；2.蔓胡頹子葉；3.胡頹子葉; 4.宜昌胡頹子圖16 羊奶奶葉TLC圖葉

4 討論

實驗結(jié)果表明，羊奶奶葉3種基原植物在藥材性狀和顯微特征方面均具有顯著的形態(tài)學(xué)規(guī)律，對其真?zhèn)舞b別具有實際意義。在葉橫切面顯微特征方面：3種基原植物的柵欄組織和海綿組織分布均規(guī)則、清晰，上、下表皮均可見星狀、鱗片狀非腺毛的縱切面，且非腺毛上部呈牛角狀二歧分枝(切面)或放射狀，細(xì)胞壁木質(zhì)化；3者的區(qū)別是宜昌胡頹子和胡頹子的柵欄組織和海綿組織的分布比例約1∶1，但前者的海綿組織較后者排列緊密、規(guī)則，蔓胡頹子的海綿組織約為柵欄組織的2倍，可以用于3者的顯微鑒別。在葉表面的顯微特征方面：3種基原植物之間沒有明顯區(qū)別，上、下表皮均被角質(zhì)層，且下表皮密被星狀非腺毛和鱗狀非腺毛，氣孔不定式。3種基原藥材的粉末亦無明顯區(qū)別，故合寫為羊奶奶葉藥材粉末顯微特征。胡頹子屬植物的薄層色譜鑒別主要針對葉和根，用齊墩果酸做標(biāo)準(zhǔn)品。前期研究表明，羊奶奶葉中黃酮類物質(zhì)和銀椴苷均具有鎮(zhèn)咳平喘的活性。張偉欣等采用HPLC法測定發(fā)現(xiàn)12批次全國多地胡頹子葉中均含有有銀椴苷[5]。此外，銀椴苷具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗高血壓、抗糖尿病、抑制胰腺癌細(xì)胞增殖等活性[6]。結(jié)合三種基原植物在民間廣泛用于治療咳嗽、哮喘等病癥的用藥經(jīng)驗，本實驗選擇銀椴苷為對照品，更具專屬性。綜上所述，本研究所建立的方法可用于苗藥羊奶奶葉的生藥學(xué)鑒別。