懸鉤子二元醇質(zhì)體凝膠對(duì)日光性皮炎小鼠模型的保護(hù)作用

魯昊昊 湯榮凡 侯春羽 王楚橋 童麗

（青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院 西寧 青海 810000）

日光性皮炎（Sunshine dermatitis）是一種長(zhǎng)時(shí)間暴露在日光下所致的皮膚病[1]，該疾病是由于太陽(yáng)光中波長(zhǎng)為290~320nm的紫外線照射皮膚，引起皮膚組織釋放組織胺等一系列炎癥介質(zhì)產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)。臨床表現(xiàn)為紅腫、紅斑、水泡、糜爛甚至休克，該疾病若未及時(shí)治療則可能留有疤痕，給患者的生活帶來極大的痛苦[2-3]。而紫色懸鉤子（Rubus irritans Focke）薔薇科，懸鉤子屬落葉灌木，該屬植物含有揮發(fā)油、黃酮苷、萜類、鞣質(zhì)、酚類等多種化學(xué)成分， 具有抑菌、抗腫瘤、抗氧自由基、抗炎、保護(hù)心血管、抗過敏等多種藥理作用[4-5]。按照日光性皮炎的發(fā)病機(jī)理，該植物是治療日光性皮炎的良好藥材，本研究旨在為紫色懸鉤子預(yù)防日光性皮炎皮膚病提供理論依據(jù)及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1.實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

KM小鼠（體重18～22g，雌雄各半）。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥材及試劑

紫色懸鉤子果實(shí)；大豆卵磷脂；聚山梨醇酯-80；無水乙醇；1，2-丙二醇；三乙醇胺；pH=6.8（±0.01）磷酸鹽緩沖液；卡波姆940；HE染色試劑盒。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

磁力加熱攪拌器；紫外燈；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

2.實(shí)驗(yàn)方法

2.1 提取實(shí)驗(yàn)

2.1.1 紫色懸鉤子果實(shí)的提取 將紫色懸鉤子果實(shí)搗碎，在磁力加熱攪拌器上先用乙醇于30℃，750r/min提取9小時(shí)，共提取兩次，過濾，合并濾液，旋蒸溶劑，得醇提物；將濾渣置于磁力加熱攪拌器上用蒸餾水于30℃，750r/min提取9小時(shí)，共提取兩次，過濾，合并濾液，旋蒸溶劑，得水提物。

2.1.2 二元醇質(zhì)體的制備 采用乙醇注入-超聲法制備二元醇質(zhì)體[6]。分別取處方量的醇提物和水提物加入磷酸鹽緩沖液溶解，低溫4℃保存。準(zhǔn)確稱取處方量的大豆卵磷脂、聚山梨醇酯-80溶解于處方量的二元醇相中（無水乙醇:1，2-丙二醇=7:3），在30℃，750r/min的條件下緩緩將磷酸鹽緩沖液加入二元醇相中，持續(xù)攪拌30min，探頭超聲3min（頻率20kHz，超聲3s，間隔3s），即得水提物和醇提物二元醇質(zhì)體，以相同的方法制備加入生理鹽水的二元醇質(zhì)體作為對(duì)照。

2.1.3 凝膠的制備 將2g卡波姆溶于200ml水中，充分溶脹。用三乙醇胺緩慢調(diào)節(jié)pH為6.5～7.0，將二元醇質(zhì)體與其質(zhì)量比2:3混合，攪拌即得。

2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

2.2.1 分組及給藥 將30只KM小鼠隨機(jī)分為三組，每組各10只，分別為對(duì)照組、醇提物組和水提物組，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天。在小鼠背部皮膚1cm×2cm范圍內(nèi)脫毛，每天涂抹等量二元醇質(zhì)體凝膠（0.15g·cm-2），每隔8小時(shí)一次，一日三次，共涂抹3天[7]。

2.2.2 日光性皮炎造模 小鼠涂抹給藥3天后，將小鼠固定，于20cm處紫外300nm線照射，連續(xù)照射一小時(shí)后給藥一次，再連續(xù)照射1小時(shí)。照射完畢后12小時(shí)再給藥一次。72小時(shí)后可見對(duì)照組、醇提物組和水提物組小鼠皮膚出現(xiàn)明顯紅腫、紅斑甚至組織破潰，說明造模成功。建立皮膚組織損傷程度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[8]，見表1。

2.2.3 HE染色病理切片檢查 頸椎脫臼法處死小鼠，減去小鼠患處皮膚，置于10%福爾馬林中固定，制備病理切片，HE染色，鏡檢。

2.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS24.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間比較采用K-W（Kruskal-Wallis）檢驗(yàn)，P＜0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見表2。三組實(shí)驗(yàn)小鼠脫毛處皮膚出現(xiàn)不同程度的紅腫、紅斑等病理狀態(tài)，說明三組小鼠均造模成功。與水提物組和醇提物組相比，空白對(duì)照組具有更明顯的紅腫、紅斑甚至皮膚破潰等現(xiàn)象，說明醇提物組和水提物組均產(chǎn)生了預(yù)防日光性皮炎的作用（P＜0.05）。醇提物組與水提物組相比，醇提物組預(yù)防效果更佳（P＜0.05）。

表2 不同小鼠組別病理切片檢查結(jié)果比較（n=10）

3.2 小鼠病理切片分析

空白對(duì)照組由于未加入提取物小鼠皮膚均出現(xiàn)紅腫、紅斑及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，說明空白醇質(zhì)體凝膠不具備預(yù)防日光性皮炎的作用；水提物組和醇提物組皮膚損傷等級(jí)均較空白對(duì)照組低，說明紫色懸鉤子果實(shí)提取物中含有預(yù)防日光性皮炎的有效成分。但水提物組和醇提物組相比，醇提物組對(duì)日光性皮炎產(chǎn)生了更佳的預(yù)防作用，可能是由于紫色懸鉤子有效成分大部分于醇提物中，具體為何種成分，需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)分析。

4.小結(jié)

日光性皮炎為一種長(zhǎng)時(shí)間暴露在日光下所致的皮膚病，皮膚經(jīng)紫外線照射后引起血管擴(kuò)張滲透增加、組織水腫等一系列反應(yīng)[9-10]，患上此病的患者長(zhǎng)時(shí)間無法直接接觸日光，為其生活帶來了極大的不便。而根據(jù)本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，紫色懸鉤子果實(shí)中含有能夠預(yù)防日光性皮炎的有效成分，經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示該成分藥理效果高，極具開發(fā)價(jià)值，同時(shí)本實(shí)驗(yàn)也為紫色懸鉤子治療日光性皮炎提供了理論指導(dǎo)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。我們有理由相信，該類藥材的更多藥理作用將逐步被挖掘出來，為日光性皮炎患者及其皮膚敏感脆弱的人群帶來福音。