GeneXpert儀PCR檢測技術(shù)在基層實驗室結(jié)核病特定人群中的應(yīng)用

占啟川　劉建成　陳清文　施素英　林玉發(fā)　陳云琴　林明良　賴繁彩

【摘要】 目的：探討GeneXpert MTB/RIF PCR（GeneXpert）檢測技術(shù)在基層實驗室結(jié)核病特定人群中的應(yīng)用效果。方法：回顧性分析筆者所在醫(yī)院2016年1月-2019年1月共300例痰液標(biāo)本，分別通過涂片法、液體分枝桿菌培養(yǎng)管培養(yǎng)法及GeneXpert MTB/RIF進(jìn)行檢測，分析GeneXpert檢測技術(shù)在結(jié)核病特定人群中的應(yīng)用效果。結(jié)果：300例痰標(biāo)本中，涂片法檢測顯示陽性52例，占比17.33%，陰性248例，占比82.67%;液體培養(yǎng)法檢測顯示陽性80例，占比26.67%，陰性220例，占比73.33%。GeneXpert檢測顯示陽性81例，占比27.00%，陰性219例，占比73.00%。以液體培養(yǎng)法為標(biāo)準(zhǔn)，涂片法敏感度60.00%（48/80），一致率88.00%（264/300）;GeneXpert敏感度91.25%（73/80），一致率95.00%（285/300）。兩種檢測方法敏感度比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（字2=21.191，P=0.000）;一致率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（字2=9.450，P=0.002）。結(jié)論：GeneXpert檢測技術(shù)具有操作簡單、快速、安全等優(yōu)勢，且敏感性、特異性較高的特點(diǎn)，可作為基層實驗室早期檢測結(jié)核病的重要方法之一，值得推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 GeneXpert; 基層實驗室; 結(jié)核病; 快速診斷

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.15.029 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2019）15-00-03

【Abstract】 Objective：To explore the application effect of GeneXpert MTB/RIF PCR in tuberculosis specific population in primary laboratory.Method：300 sputum specimens from January 2016 to January 2019 in our hospital were retrospectively analyzed.The application effect of GeneXpert in tuberculosis specific population was analyzed by smear method，liquid mycobacterium culture tube method and GeneXpert MTB/RIF.Result：Among 300 sputum specimens，52 were positive by smear method，accounting for 17.33%，248 were negative，accounting for 82.67%，80 were positive by liquid culture method，accounting for 26.67%，220 were negative，accounting for 73.33%.GeneXpert test showed 81 positive cases（27.00%） and 219 negative cases（73.00%）.According to the standard of liquid culture method，the sensitivity of smear method was 60.00%（48/80），the consistency rate was 88.00%（264/300），the sensitivity of GeneXpert was 91.25%（73/80），and the consistency rate was 95.00%（285/300）.The sensitivity of the two methods was significantly different（字2=21.191，P=0.000） and the consistency rate was significantly different（字2=9.450，P=0.002）.Conclusion：GeneXpert detection technology has the advantages of simple operation，fast and safety，and has high sensitivity and specificity.It can be used as one of the important methods for early detection of tuberculosis in primary laboratories，and it is worth popularizing and applying.

【Key words】 GeneXpert; Primary laboratory; Tuberculosis; Rapid diagnosis

結(jié)核病屬于慢性傳染病，主要是由于結(jié)核分枝桿菌導(dǎo)致，我國是結(jié)核病發(fā)病的高負(fù)擔(dān)國家。呼吸道傳播是結(jié)核病傳染的主要途徑，傳染性最強(qiáng)的時間段為發(fā)現(xiàn)及治療前，因此早期診斷對肺結(jié)核的治療具有重要的指導(dǎo)意義。目前主要通過實驗室檢測對結(jié)核病進(jìn)行診斷，實驗室檢測是臨床治療的重要參考依據(jù)，常用的方法包括涂片鏡檢、液體培養(yǎng)等[1]。涂片鏡檢的敏感度較低，固體培養(yǎng)雖然敏感度較高，但需要3～8周的檢測時間，耗時較長，在早期診斷及治療方面存在一定的缺陷。因此，尋找一種快速、可靠的實驗室檢測方法對肺結(jié)核的診斷至關(guān)重要[2]。近年來，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，結(jié)核分枝桿菌的鑒定方法也越來越多，如GeneXpert MTB/RIF PCR（GeneXpert）技術(shù)，該技術(shù)建立在全自動半巢式實時PCR基礎(chǔ)上，將rpoB基作為靶基因，能直接檢測標(biāo)本中是否存在分枝桿菌感染。另一方面，該技術(shù)對傳統(tǒng)PCR檢測的流程進(jìn)行了整合，提高了檢測的自動化水平，簡化了操作內(nèi)容，更適用于基層實驗室。但從目前我國的情況來看，GeneXpert應(yīng)用時間較晚，大規(guī)模應(yīng)用可行性的研究相對較少[3]。因此，本次研究探討了GeneXpert檢測技術(shù)在結(jié)核病特定人群中的診斷效能，具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析筆者所在醫(yī)院2016年1月-2019年1月痰檢涂陽復(fù)發(fā)、邊遠(yuǎn)山區(qū)、隨訪、涂陰、在校生等特定人群及部分筆者所在醫(yī)院收治的結(jié)核病患者共300例的痰液標(biāo)本，其中男197例，女103例，年齡13～80歲，平均（52.82±6.64）歲。

1.2 方法

涂片法嚴(yán)格遵照文獻(xiàn)[4]《痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊》中的程序?qū)嵤?。液體培養(yǎng)法參照文獻(xiàn)[5]《結(jié)核病診斷實驗室檢驗規(guī)程》進(jìn)行操作，將0.5 ml痰液標(biāo)本加入液體培養(yǎng)管中，再通過液體培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行培養(yǎng)，對顯示陽性的標(biāo)本進(jìn)一步實施藥敏試驗。GeneXpert檢測方法：按照說明書進(jìn)行處理，取1 ml前處理標(biāo)本，加入標(biāo)本體積2倍的痰標(biāo)本處理液，經(jīng)渦旋振蕩器處理15～30 s后靜置15 min。吸取2 ml后加入反應(yīng)盒，再將反應(yīng)盒置入儀器中行自動化檢測，記錄檢測結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

通過SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢測結(jié)果

300例痰標(biāo)本中，涂片法檢測顯示陽性52例，占比17.33%，陰性248例，占比82.67%;液體培養(yǎng)法檢測顯示陽性80例，占比26.67%，陰性220例，占比73.33%。GeneXpert檢測顯示陽性81例，占比27.00%，陰性219例，占比73.00%。

2.2 GeneXpert與涂片法檢測結(jié)果對比

52例涂片法陽性標(biāo)本中，GeneXpert結(jié)果顯示陽性48例;248例涂片法陰性標(biāo)本中，GeneXpert結(jié)果顯示陰性215例，見表1。

表1 GeneXpert與涂片法檢測結(jié)果對比 例

2.3 涂片法與液體培養(yǎng)法檢測結(jié)果對比

80例液體培養(yǎng)法陽性標(biāo)本中，涂片法結(jié)果顯示陽性48例;220例液體培養(yǎng)法陰性標(biāo)本中，涂片法結(jié)果顯示陰性216例，見表2。

2.4 GeneXpert與液體培養(yǎng)法檢測結(jié)果對比

80例液體培養(yǎng)法陽性標(biāo)本中，GeneXpert結(jié)果顯示陽性73例;220例液體培養(yǎng)法陰性標(biāo)本中，GeneXpert結(jié)果顯示陰性212例，見表3。

2.5 GeneXpert與涂片法效能對比

以液體培養(yǎng)法為標(biāo)準(zhǔn)，涂片法敏感度60.00%（48/80），一致率88.00%（264/300）;GeneXpert敏感度91.25%（73/80），一致率95.00%（285/300）。兩種檢測方法敏感度比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（字2=21.191，P=0.000）;一致率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（字2=9.450，P=0.002）。

3 討論

結(jié)核病的早期診斷對控制結(jié)核病的傳播具有重要意義，實驗室檢查是目前臨床中診斷結(jié)核病的重要參考依據(jù)[6]。從目前基層實驗室的現(xiàn)狀來看，在診斷菌陽肺結(jié)核方面，仍以痰涂片、痰培養(yǎng)等傳統(tǒng)方法為主[7]。但這兩種方法的檢出率較低，容易出現(xiàn)誤診、漏診等情況，耽誤最佳治療時機(jī)。因此，尋找一種新型的結(jié)核分枝桿菌高檢出率手段具有重要的意義，是保證臨床療效，改善患者預(yù)后的關(guān)鍵[8]。

近年來，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，GeneXpert檢測技術(shù)已廣泛應(yīng)用于多個國家，并取得了一定的效果。GeneXpert以半巢式PCR為基礎(chǔ)，將樣品準(zhǔn)備、DNA擴(kuò)增、DNA檢測步驟整合在一起，樣品經(jīng)處理后，直接加入測試盒中，之后在微流樣品盒中完成DNA提取，同時可實現(xiàn)對DNA的濃縮、純化，有利于提高測試的靈敏度。濃縮純化后的DNA標(biāo)本再加入反應(yīng)管中，經(jīng)擴(kuò)增實現(xiàn)檢測，使標(biāo)本在整個檢測過程中處于封閉的反應(yīng)盒中，實現(xiàn)了檢測自動化，避免了人為因素可能造成的樣品污染。且該方法對DNA序列的檢測具有高度敏感性，軟件在發(fā)現(xiàn)目標(biāo)序列后可實時得出結(jié)果，整個過程僅需150 min左右，能夠達(dá)到快速診斷的目的[9-10]。

目前我國對結(jié)核菌的檢測一般以固體培養(yǎng)為金標(biāo)準(zhǔn)，而本次研究將液體培養(yǎng)作為金標(biāo)準(zhǔn)，可為后續(xù)研究提供一定的參考價值。本次研究顯示，300例痰標(biāo)本中，涂片法檢測顯示陽性52例，占比17.33%，陰性248例，占比82.67%;液體培養(yǎng)法檢測顯示陽性80例，占比26.67%，陰性220例，占比73.33%。GeneXpert檢測顯示陽性81例，占比27.00%，陰性219例，占比73.00%。以液體培養(yǎng)法為標(biāo)準(zhǔn)，涂片法敏感度60.00%（48/80），一致率88.00%（264/300）;GeneXpert敏感度91.25%（73/80），一致率95.00%（285/300）。兩種檢測方法敏感度有明顯差異（字2=21.191，P=0.000）;一致率有明顯差異

（字2=9.450，P=0.002）。和液體培養(yǎng)法相比，GeneXpert檢測所需的時間較少，對臨床早期快速診斷、早期治療具有重要的意義，應(yīng)用價值較高。目前門診中典型的肺結(jié)核患者明顯減少，且在影像學(xué)方面的表現(xiàn)也不夠典型，大大增加了臨床診斷的難度，而GeneXpert作為一種新型檢測技術(shù)，能為臨床醫(yī)師提供更多的參考依據(jù)，從而實現(xiàn)對結(jié)核病患者的早期診斷與治療[11-12]。另一方面，GeneXpert對實驗室生物安全性的要求相對較低，對操作人員危害較小，在基層實驗室可行性較高，可作為一種新型的診斷工具。

綜上所述，GeneXpert檢測技術(shù)具有操作簡單、快速、安全等優(yōu)勢，且敏感性、特異性較高等優(yōu)勢，可作為基層實驗室早期檢測結(jié)核病的重要方法之一，值得推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2019-04-03）