牛羊組織中β-受體激動(dòng)劑殘留檢測(cè)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

左英芳

（焦作市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測(cè)中心，河南焦作 454003）

1 概述

β-受體激動(dòng)劑是一類動(dòng)物用藥的總稱，它包含數(shù)種藥物，因其作用于β腎上腺素受體，加強(qiáng)脂肪分解，促進(jìn)蛋白合成，提高畜禽的酮體瘦肉率，故國(guó)內(nèi)較長(zhǎng)一段時(shí)間將其作為促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、減少脂肪率的一種飼料添加劑。隨著瘦肉精事件在全球頻發(fā)，使其在全球遭到禁用，國(guó)內(nèi)也加大了對(duì)瘦肉精的抽檢力度，但仍屢禁不絕，且有由豬向牛羊轉(zhuǎn)移的趨勢(shì)。

目前，我國(guó)針對(duì)β-受體激動(dòng)劑的檢測(cè)品種主要涉及有豬肉、豬肝、牛奶、雞蛋、豬尿等，但沒有關(guān)于牛羊組織中β-受體激動(dòng)劑殘留檢測(cè)的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，因此，筆者以超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜建立了牛羊組織中的β-受體激動(dòng)劑殘留檢測(cè)的方法。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器

UPLC-Xevo TQ-S型超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)Waters公司配電噴霧離子源）；氮吹儀；渦旋混合器；高速冷凍離心機(jī)；分析天平；振蕩器；MCX陽離子交換柱：規(guī)格60mg，3ml。

2.2 試劑

標(biāo)準(zhǔn)品：特布他林、西馬特羅、沙丁胺醇、非諾特羅、氯丙那林、萊克多巴胺、鹽酸克倫特羅、妥布特羅和噴布特羅共9種，其純度均≥98.0 %。

同位素內(nèi)標(biāo)：克倫特羅-D9、萊克多巴胺-D3、沙丁胺醇-D3，純度均≥95.0 %。

甲醇、乙腈（色譜純）；甲酸（質(zhì)譜純）。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100μg/ml）：準(zhǔn)確稱取適量的9種標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇分別配制成100μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

混合標(biāo)準(zhǔn)中間工作液（20ng/ml）：分別準(zhǔn)確量取9種標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液置同一100ml容量瓶中，用甲醇稀釋至濃度為20ng/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)中間工作液。

同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液（100μg/ml）：準(zhǔn)確稱取適量的三種同位素內(nèi)標(biāo)，各自用甲醇配成濃度約為100μg/ml的儲(chǔ)備液。

混合同位素內(nèi)標(biāo)工作液（20ng/ml）：將上述三種同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋成約20ng/ml的混合工作液。

2.3 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取2g±0.02 g試樣于50ml離心管內(nèi)，加入100 μl混合同位素內(nèi)標(biāo)工作液，加入10%碳酸鈉水溶液5ml，加入10ml乙酸乙酯提取，渦旋震蕩10min，10000 r/min高速離心10 min，取上清液與另一50 ml離心管內(nèi)，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液。向合并的上清液中加入0.1mol/L鹽酸溶液5ml，渦旋混勻，震蕩10min，5000 r/min離心5min后，取下層水相于另一50ml離心管內(nèi)，重復(fù)提取一次，合并兩次水相，備用。

凈化：MCX固相萃取柱依次用甲醇、一級(jí)水各3 mL活化，取備用液全部過柱，再依次用水、甲醇各3mL淋洗，抽干，用5%氨化甲醇溶液（5：95，V/V）3mL洗脫；洗脫液在50℃下氮?dú)獯蹈伞?/p>

殘余物用乙腈-0.1 %甲酸水溶液（5：95，V/V）1.0 mL溶解，渦旋混勻，過0.22 μm微孔濾膜，供超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

2.4 色譜采集條件

色譜柱：Waters Acquity UPLC BEHC18（1.7μm，2.1mm×50mm）。柱溫：35℃。流動(dòng)相：A：乙腈；B：0.1%甲酸溶液。進(jìn)樣量：5μl。流動(dòng)相：A：乙腈；B：0.1 %甲酸水溶液。流速：0.4 ml/min；采用梯度洗脫程序：0～1min，5%A；1～5min，5%A～80%A；5～6min，80%A；6.1min，5%A。

2.5 質(zhì)譜條件

離子源：ESI；掃描方式：正離子；毛細(xì)管電壓：3.0 kV；萃取補(bǔ)償電壓：70V；源溫：150℃；霧化溫度：450℃；錐孔氣流速：150 L/hr；霧化氣流速：1000 L/hr；

目標(biāo)藥物保留時(shí)間、母離子與錐孔電壓、子離子與碰撞能量

3 結(jié)果

稱取空白樣品，按照2.3處理，在氮吹前混合標(biāo)準(zhǔn)工作液適量，加入洗脫液中，制得基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液，在相關(guān)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。