解淀粉芽孢桿菌PEBA20對(duì)柑橘綠霉病菌的抑制作用研究

宋宇靜，李琳琳，張會(huì)玲

（濟(jì)南市章丘區(qū)農(nóng)業(yè)局，山東濟(jì)南 250200）

1 研究的目的及意義

有些微生物在生長(zhǎng)過(guò)程中能產(chǎn)生抑制真菌的分泌物，這就為利用微生物抑制植物病原真菌，防止植物真菌病害提供了新的可能[1]。芽孢桿菌能產(chǎn)生多種抑菌物質(zhì)，且對(duì)人畜無(wú)害，不污染環(huán)境，常用于防治多種植物病害，因而在生物防治植物病害中起著重要的作用。有關(guān)芽孢桿菌的控病作用機(jī)制，國(guó)內(nèi)外學(xué)者從各個(gè)角度進(jìn)行了廣泛探討，概括起來(lái)主要有競(jìng)爭(zhēng)、拮抗、誘導(dǎo)植物抗病性和促進(jìn)植物生長(zhǎng)等幾個(gè)方面[2]。芽孢桿菌的競(jìng)爭(zhēng)作用主要包括營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)和空間位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)，即在植物根際、體表或體內(nèi)及土壤中快速、大量繁衍和定殖，有效地排斥、阻止和干擾植物病原微生物在植物上的定殖與侵染，從而達(dá)到抑菌控病效果。拮抗作用主要指兩種或兩種以上的微生物共同生長(zhǎng)時(shí)，一種微生物在同化作用中產(chǎn)生某種或某幾種特異的次生代謝產(chǎn)物（如抗菌素等抗菌物質(zhì)），改變其微環(huán)境，從而抑制甚至殺死另一種微生物的現(xiàn)象。芽孢桿菌可產(chǎn)生抗生素、細(xì)菌素、細(xì)胞壁降解酶類(lèi)和其它抗菌蛋白及揮發(fā)性抗菌物質(zhì)等拮抗物質(zhì)[3]。

2 試驗(yàn)方法

2.1 柑橘綠霉病病原菌的分離及鑒定

采用無(wú)菌操作，用接種針從感病柑橘中挑取少量皮下果肉接種在配制好的PDA培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)并純化后，得單一菌種，25 ℃恒溫培養(yǎng)并定期觀察菌落的顏色和形狀。

綠霉病病原菌屬半知菌亞門(mén)絲孢綱。綠霉病病原菌的分生孢子梗無(wú)色，先端具1～2 個(gè)分枝，掃帚狀，小梗中部稍寬，上下端稍狹細(xì)，呈細(xì)長(zhǎng)紡錘狀，其上串生分生孢子，分生孢子單孢無(wú)色，卵形，較大。經(jīng)顯微鏡觀察，所純化菌種符合以上特征，因此確定分離的病原菌是綠霉病病原菌。

2.2 解淀粉芽孢桿菌PEBA20菌活體對(duì)柑橘綠霉病菌菌落生長(zhǎng)的抑制作用

抑制率（%）=[（對(duì)照菌落半徑—處理菌落半徑）/對(duì)照菌落半徑]×100

2.3 解淀粉芽孢桿菌PEBA20發(fā)酵液對(duì)柑橘綠霉病菌孢子萌發(fā)的抑制作用

孢子萌發(fā)抑制率（%）= [（對(duì)照孢子萌發(fā)率-處理孢子萌發(fā)率）/對(duì)照孢子萌發(fā)率]×100

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 解淀粉芽孢桿菌PEBA20菌活體對(duì)柑橘綠霉病菌菌落生長(zhǎng)的抑制作用結(jié)果

均值（mm）抑制率%CK菌落半徑（mm）處理組菌落半徑（mm）被抑制菌落半徑（mm）8.8 23.46 72.72 2 31.0 10.1 22.16 68.69 3 31.3 10.5 21.76 67.45 4 9.8 22.46 69.62平均抑制率%1 34.5 32.26 69.62

解淀粉芽孢桿菌PEBA20對(duì)柑橘綠霉病菌有較強(qiáng)的抑制作用，菌落被抑制邊緣菌絲顏色加深，呈鐵銹色，出現(xiàn)抑菌帶，白色菌絲層稀少。

3.2 解淀粉芽孢桿菌PEBA20對(duì)柑橘綠霉病菌菌絲生長(zhǎng)的致畸作用

解淀粉芽孢桿菌PEBA20 產(chǎn)生的抗生物質(zhì)使菌絲的正常生長(zhǎng)受到抑制，菌絲的生長(zhǎng)速率明顯減慢，同時(shí)菌絲產(chǎn)生了一些畸變形態(tài)，主要變現(xiàn)為：菌絲分支增多、菌絲細(xì)胞間距變小、原生質(zhì)濃縮菌絲顏色加深。

3.3 解淀粉芽孢桿菌PEBA20發(fā)酵液對(duì)柑橘綠霉病菌孢子萌發(fā)的抑制作用結(jié)果

CK平均萌發(fā)抑制率（%）1 291 25 92.09 93.25發(fā)酵液處理萌發(fā)的孢子數(shù)量（個(gè)）未萌發(fā)的孢子數(shù)量（個(gè)）萌發(fā)率（%）平均萌發(fā)率（%）萌發(fā)的孢子數(shù)量（個(gè)）未萌發(fā)的孢子數(shù)量（個(gè)）萌發(fā)率（%）萌發(fā)抑制率（%）116 127 47.74 48.80 2 283 23 92.48 95 204 31.77 65.93 3 335 17 95.17 105 194 35.12 62.33 59.02

經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)可知柑橘綠霉病菌孢子萌發(fā)的高峰期在14h，孢子萌發(fā)率達(dá)到90%以上，PEBA20發(fā)酵液對(duì)柑橘綠霉病菌孢子萌發(fā)的抑制率達(dá)到59.02，致畸作用不明顯，顯微鏡下沒(méi)有觀察到異常萌發(fā)的孢子形態(tài)。這說(shuō)明PEBA20發(fā)酵液對(duì)柑橘綠霉病菌孢子萌發(fā)的抑制作用不明顯，可能只是延緩了孢子萌發(fā)的進(jìn)程。

4 結(jié)論

解淀粉芽孢桿菌PEBA20對(duì)柑橘綠霉病菌菌絲的生長(zhǎng)有較好的抑制作用，能夠明顯抑制病原菌菌落的生長(zhǎng)。