段白麗
(山西省中條山國有林管理局,山西 侯馬 044400)
黃酮全稱為黃酮類化合物,是植物中分布非常廣泛的一類天然物質(zhì),具有抗心腦血管疾病、抗炎、抗免疫、抗微生物、保護(hù)消化性潰瘍、抗腫瘤等作用。黃酮作為一種功效成分,越來越受到人們的重視。沙棗(Elaeagnusangustifolia)是胡頹子科胡頹子屬落葉喬木或灌木,在山西省主要分布于黃土丘陵區(qū)和晉北風(fēng)沙區(qū),有研究報(bào)道沙棗是一種集生態(tài)效益與經(jīng)濟(jì)效益于一體的重要樹種。因此,研究山西沙棗果肉中的總黃酮含量對(duì)進(jìn)一步認(rèn)識(shí)其經(jīng)濟(jì)價(jià)值具有重要意義,可為山西沙棗藥用價(jià)值的開發(fā)提供參考依據(jù)。
2017年10月,在山西省黃土丘陵區(qū)和晉北風(fēng)沙區(qū)采集不同大小的沙棗果實(shí),取果肉后自然陰干,用粉碎機(jī)研碎,于室溫下保存?zhèn)溆谩?/p>
儀器:721紫外可見分光光度計(jì),上海第三分析儀器廠;BS110S型電子天平,北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司;Centrisart D-16C 實(shí)驗(yàn)室離心機(jī),賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司;SB25-12超聲波清洗器,寧波新芝生物科技股份有限公司。
試劑:蘆丁標(biāo)品,批號(hào)100080-200707,中國藥品生物制品檢定所。其余試劑均為分析純。
1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
準(zhǔn)確稱取20 mg蘆丁,用無水乙醇溶解后,定容至100 mL容量瓶中,配制成濃度為0.2 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在7個(gè)25 mL容量瓶中分別吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0 mL,0.5 mL,1.0 mL,2.0 mL,3.0 mL,4.0 mL,5.0 mL,之后在每個(gè)容量瓶中依次加入5%的NaNO2溶液0.3 mL,10%的Al(NO3)3溶液0.3 mL,4%的NaOH溶液4.0 mL.每加入1種溶液后要搖勻,并放置6 min,最后用60%的乙醇定容搖勻,放置15 min后,于498 nm波長處測(cè)定吸光度。
1.3.2 供試樣品的制備
稱取2.00 g沙棗果肉,按照料液比1∶22加入60%的乙醇溶液,在320 W功率下超聲處理15 min,之后在4 000 r/min下離心10 min,取上清液至25 mL容量瓶中,用蒸餾水定容。取1 mL樣液至25 mL容量瓶中,重復(fù)3次,按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作方法在498 nm波長處測(cè)定吸光度,計(jì)算總黃酮含量。
用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度值,見表1.
表1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度
以蘆丁濃度為X軸,對(duì)應(yīng)的吸光度值為Y軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,如圖1所示。
對(duì)蘆丁濃度和吸光度值數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸后,得線性方程式為:Y=14.698 0X+0.001 1,R2=0.998 0.
以測(cè)定樣品的吸光度值為基礎(chǔ),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程計(jì)算山西沙棗兩個(gè)分布區(qū)果肉中的總黃酮含量,如圖2所示。
圖1 蘆丁吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線
圖2 不同分布區(qū)沙棗果肉中的總黃酮含量
從圖2可看出,黃土丘陵區(qū)沙棗果肉中的總黃酮含量(7.37 mg/g)高于晉北風(fēng)沙區(qū)(6.21 mg/g)。對(duì)兩個(gè)分布區(qū)沙棗果肉中的總黃酮含量運(yùn)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件中的One-way ANOVA模塊進(jìn)行方差分析,結(jié)果表明,沙棗果肉中總黃酮含量在兩個(gè)分布區(qū)間差異不顯著(p>0.05)??梢?,沙棗分布的立地條件對(duì)其果肉中總黃酮含量的影響不明顯。
將不同分布區(qū)的沙棗果實(shí)分別按照縱徑、橫徑進(jìn)行聚類分析,結(jié)果表明,兩個(gè)分布區(qū)的沙棗果實(shí)均可分為大果、中果、小果3類。運(yùn)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件中的One-way ANOVA模塊對(duì)兩個(gè)分布區(qū)不同大小沙棗果實(shí)果肉中的總黃酮含量進(jìn)行方差分析,并用Duncan法對(duì)其進(jìn)行多重比較,結(jié)果見表2.
表2 不同大小沙棗果實(shí)果肉總黃酮含量 mg/g
從表2可以看出,兩個(gè)分布區(qū)不同大小沙棗果實(shí)果肉中總黃酮含量變化規(guī)律不一致。黃土丘陵區(qū)沙棗果肉中總黃酮含量呈現(xiàn)出隨著果實(shí)的增大而增加的趨勢(shì),晉北風(fēng)沙區(qū)沙棗果肉中總黃酮含量則表現(xiàn)為隨著果實(shí)的增大而減少的趨勢(shì)。黃土丘陵區(qū)大果中的總黃酮含量明顯高于中果和小果的總黃酮含量,中果和小果果肉中總黃酮含量差異不顯著;晉北風(fēng)沙區(qū)大果中的總黃酮含量明顯小于中果和小果的,但中果和小果果肉中總黃酮含量差異不顯著。
山西黃土丘陵區(qū)沙棗果肉中的總黃酮含量高于晉北風(fēng)沙區(qū),但兩者間差異不顯著,即立地條件對(duì)沙棗果肉中總黃酮含量的影響不明顯。果實(shí)大小對(duì)果肉中總黃酮含量的變化有顯著影響,黃土丘陵區(qū)沙棗果肉中總黃酮含量呈現(xiàn)出隨著果實(shí)的增大而增加的趨勢(shì),晉北風(fēng)沙區(qū)的則表現(xiàn)為隨果實(shí)的增大而減少的趨勢(shì),但中果和小果果肉中的總黃酮含量間均無顯著差異。