雷氏養(yǎng)心活血湯加味對心力衰竭大鼠血壓、Na+-K+-ATP酶、心鈉素、血管緊張素Ⅱ水平的影響

心力衰竭(heart failure，HF)是高血壓、冠心病等各種心臟疾病導(dǎo)致的心功能不全綜合征。《中國心血管病報告2017(概要)》報道[1]，我國心血管病患病率及死亡率逐年在升高，患病人數(shù)約2.9億，其中心力衰竭病人約450萬人。心血管病導(dǎo)致的死亡率在我國居民疾病死亡構(gòu)成中居首位，約占40%以上。今后10年患病人數(shù)仍將快速增長。

國醫(yī)大師雷忠義教授從事心血管疾病研究60余年，根據(jù)現(xiàn)代心血管疾病的發(fā)病機(jī)制及特征，集痰濁、瘀血并見的臨床實(shí)踐，于20世紀(jì)70年代提出胸痹心痛痰瘀互結(jié)理論[2-4]，并形成理法方藥等完善的理論體系。雷氏養(yǎng)心活血湯加味(Lei′s YXT)是雷忠義教授基于痰瘀互結(jié)理論在生脈飲的基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代病人疾病演變特征加減組方，治療各種心臟病引起的慢性心力衰竭證屬氣陰兩虛、痰瘀互結(jié)者，功能益氣養(yǎng)陰、活血化痰利水，在臨床取得較好療效。本實(shí)驗(yàn)立足于雷氏養(yǎng)心活血湯加味的臨床功效，采用心力衰竭大鼠模型研究雷氏養(yǎng)心活血湯加味的初步藥效及作用機(jī)制，以期初步闡明雷氏養(yǎng)心活血湯加味治療心力衰竭可能的作用機(jī)制，為其防治慢性心力衰竭提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 選用雄性SD大鼠60只，體重190～210 g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量合格證號：0012084，許可證號：SCXK(陜)2012-003。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 雷氏養(yǎng)心活血湯加味每1 mL相當(dāng)于1.78 g生藥，由陜西省中醫(yī)藥研究院中藥研究所提供；芪藶強(qiáng)心膠囊，石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)(國藥準(zhǔn)字 H61020015)；卡托普利，常州制藥廠生產(chǎn)(批號：14032911)；注射用鹽酸多柔比星(阿霉素)，由浙江海正輝瑞制藥有限公司生產(chǎn)(國藥準(zhǔn)字H，批號：33021980)。

1.3 試劑與儀器 烏拉坦(氨基甲酸乙酯)，由中國曹楊第二試劑廠生產(chǎn)(滬Q/HG22-771-68)；0.9%氯化鈉注射液，由西安京西雙鶴藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(國藥準(zhǔn)字 H61020015)；肝素鈉注射液，由上海第一生化藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(國藥準(zhǔn)字H31022051)；RM6240BD型多導(dǎo)生理信號采集系統(tǒng)，由成都儀器廠生產(chǎn)；MB1830型血細(xì)胞分析儀，由四川養(yǎng)生科技有限公司生產(chǎn)；AU580全自動生化分析儀，由四川養(yǎng)生科技有限公司生產(chǎn)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 將60只雄性SD大鼠按體重隨機(jī)分成空白對照組、阿霉素模型組、Lei′s YXT低劑量組(5 g/kg)、Lei′s YXT高劑量組(10 g/kg)、芪藶強(qiáng)心膠囊組(1.2 g/kg)、卡托普利組(12.5 mg/kg)，每組10只。除空白對照組外其余各組于1～6周以阿霉素4 mg/kg腹腔注射造模，每周1次，連續(xù)6周。Lei′s YXT低劑量組、Lei′s YXT高劑量組、芪藶強(qiáng)心膠囊組、卡托普利組從實(shí)驗(yàn)第1天開始灌胃給藥，每日1次，連續(xù)8周，每周稱體重1次。

1.5 檢測指標(biāo) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時以10%烏拉坦1.0 g/kg腹腔注射麻醉，分離頸動脈，以充滿肝素生理鹽水的壓力換能器(YPJ01型)插入頸總動脈，并連接多導(dǎo)生理信號采集系統(tǒng)，記錄大鼠收縮壓、舒張壓、平均壓、心率、脈壓，計算代表心肌耗氧量的心肌張力時間指數(shù)。頸總動脈取血，Elisa試劑盒測定血清Na+-K+-ATP酶、心鈉素(ANP)、血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ)水平，全自動生化儀檢測血清肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、血糖(GLU)、血脂[總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)]、電解質(zhì)水平。解剖大鼠，分離出心、肝、脾、肺、腎，稱重并根據(jù)處死時的體重計算臟器指數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1 雷氏養(yǎng)心活血湯加味對體重的影響 采用單因素方差分析，給藥后，阿霉素模型組體重變化不明顯，Lei′s YXT高劑量組、芪藶強(qiáng)心膠囊組、卡托普利組大鼠體重較給藥前顯著升高(P<0.05或P<0.01)。詳見表1。

表1 雷氏養(yǎng)心活血湯加味對體重的影響(±s) g

與阿霉素模型組同時間比較，1)P<0.05，2)P<0.01

2.2 雷氏養(yǎng)心活血湯加味對臟器指數(shù)的影響 與空白對照組比較，阿霉素模型組心臟指數(shù)顯著降低(P<0.05)，與阿霉素模型組比較，Lei′s YXT低劑量組、高劑量組心臟指數(shù)升高(P<0.01)，提示雷氏養(yǎng)心活血湯加味可顯著對抗心臟指數(shù)的降低，可能有保護(hù)心臟作用。與空白對照組比較，阿霉素模型組肝臟指數(shù)升高(P<0.05)，與阿霉素模型組比較，Lei′s YXT低劑量組、高劑量組肝臟指數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義，卡托普利組肝臟指數(shù)顯著降低(P<0.01)，提示阿霉素可引起肝腫大，Lei′s YXT不能對抗，但卡托普利組可對抗肝腫大。與空白對照組比較，阿霉素模型組脾臟指數(shù)升高(P<0.01)，與阿霉素模型組比較，Lei′s YXT高劑量組、芪藶強(qiáng)心膠囊組、卡托普利組脾臟指數(shù)顯著降低(P<0.01)。詳見表2。

表2 雷氏養(yǎng)心活血湯加味對大鼠主要臟器指數(shù)的影響(±s) g/100 g

與阿霉素模型組比較，1)P<0.05，2)P<0.01

2.3 雷氏養(yǎng)心活血湯加味對血壓的影響 與空白對照組比較，阿霉素模型組大鼠收縮壓、舒張壓、平均壓、脈壓、心肌張力時間指數(shù)均顯著降低(P<0.05或P<0.01)，與阿霉素模型組比較，Lei′s YXT高劑量組收縮壓、舒張壓及平均壓升高(P<0.05或P<0.01)，Lei′s YXT低劑量、芪藶強(qiáng)心膠囊和卡托普利對血壓的作用不明顯。詳見表3。

表3 雷氏養(yǎng)心活血湯加味對大鼠血壓的影響(±s)

與阿霉素模型組比較，1)P<0.05，2)P<0.01

2.4 雷氏養(yǎng)心活血湯加味對Na+-K+-ATP酶、ANP、AngⅡ水平的影響 與空白對照組比較，阿霉素模型組血清AngⅡ、ANP、Na+-K+-ATP酶水平顯著升高(P<0.01)，與阿霉素模型組比較，Lei′s YXT高劑量組、芪藶強(qiáng)心膠囊組、卡托普利組血清AngⅡ、ANP、Na+-K+-ATP酶水平顯著降低(P<0.01)。詳見圖1。

與阿霉素模型組比較，*P<0.01圖1 雷氏養(yǎng)心活血湯加味對大鼠血Na+-K+-ATP、ANP、AngⅡ水平的影響

2.5 雷氏養(yǎng)心活血湯對血糖、血脂的影響 與空白對照組比較，阿霉素模型組GLU、TC、HDL-C、LDL-C、TG水平顯著升高(P<0.05或P<0.01)，與阿霉素模型組比較，Lei′s YXT高劑量組、Lei′s YXT低劑量組及芪藶強(qiáng)心膠囊組GLU水平顯著降低(P<0.01)，但對血脂代謝無顯著影響。詳見表4。

表4 雷氏養(yǎng)心活血湯加味對大鼠糖、脂代謝的影響(±s)

與阿霉素模型組比較，1)P<0.05，2)P<0.01

2.6 雷氏養(yǎng)心活血湯對心肌酶及電解質(zhì)的影響 與空白對照組比較，阿霉素模型組CK、LDH水平顯著升高(P<0.01)，與阿霉素模型組比較，Lei′s YXT高劑量組、Lei′s YXT低劑量組、芪藶強(qiáng)心膠囊組、卡托普利組CK顯著降低(P<0.01)，Lei′s YXT高劑量組、Lei′sYXT低劑量組LDH水平顯著降低(P<0.05或P<0.01)。阿霉素注射對離子代謝無顯著影響，說明采用Lei′s YXT、芪藶強(qiáng)心膠囊及卡托普利治療后，亦對離子代謝無顯著影響。詳見表5。

表5 雷氏養(yǎng)心活血湯加味對大鼠心肌酶及電解質(zhì)的影響(±s)

與阿霉素模型組比較，1)P<0.05，2)P<0.01

3 討 論

心力衰竭是多種心血管疾病發(fā)展至后期階段的共同結(jié)果，應(yīng)屬中醫(yī)學(xué)“水氣病”“心水”“水腫”“喘證”“心衰病”等證范疇。雷忠義教授認(rèn)為，HF的基本病機(jī)是心陽氣虧虛[5]，陽虛不能溫化水飲，致水邪為患，水氣上凌。而水邪既是一種病理性產(chǎn)物，又是一種致病因素，使心陽氣進(jìn)一步受到損傷。心陽氣虧虛日久，由心而涉及脾、腎，故兼見心、脾、腎陽俱損。心陽氣虧虛不足以推動血液運(yùn)行，則血必有瘀。因此，血瘀是HF的另一個重要病理基礎(chǔ)。血瘀的生成又可導(dǎo)致水液代謝障礙。氣、血、水三者相互影響，不斷變化而形成HF的病理基礎(chǔ)。因此，HF為本虛標(biāo)實(shí)之證，氣虛陽虛為本，痰濁、血瘀、水停為標(biāo)，病情發(fā)展到一定階段，氣虛導(dǎo)致陰虛，發(fā)展到終末期，陰傷及陽則致陰陽兩虛。其治療應(yīng)以益氣養(yǎng)陰、平衡陰陽為基本治則，并配合化痰、活血、利水之法。雷忠義教授運(yùn)用雷氏養(yǎng)心活血湯治療各種心臟病引起的慢性心力衰竭證屬氣陰兩虛、痰瘀互結(jié)者，療效顯著，功能益氣養(yǎng)陰、活血化痰。本方以西洋參益氣養(yǎng)陰、安魂魄、定精神，麥冬養(yǎng)陰清心，丹參活血化瘀止痛、補(bǔ)心定志，陳皮可燥濕化痰、理氣止痛，諸藥合用益氣養(yǎng)陰、活血化痰利水[6]。

本實(shí)驗(yàn)研究證明，雷氏養(yǎng)心活血湯可降低心力衰竭大鼠的體重，對抗阿霉素引起心臟指數(shù)的降低；阿霉素引起收縮壓、舒張壓、平均壓、脈壓、心肌張力時間指數(shù)顯著降低，雷氏養(yǎng)心活血湯可顯著升高收縮壓、舒張壓、平均壓。血管緊張素是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)中最重要的一部分，可以引起血管收縮、血壓上升[7-8]，與HF的發(fā)生存在著十分緊密的聯(lián)系。Ang Ⅱ通過激活蛋白激酶C(PKC)，通過核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)通路增加腫瘤壞死因子(TNF)表達(dá)，引起心肌細(xì)胞的重構(gòu)效應(yīng)[9-10]。Ang Ⅱ與G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合后，激活細(xì)胞膜及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的Ca2+通道，迅速增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，引起鈣超載，進(jìn)而造成心肌收縮力增強(qiáng)、傳導(dǎo)加快和心率加快，這對HF非常危險[11-12]。Ang Ⅱ還可通過激活NF-κB信號通路造成冠狀動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞重塑，加重心肌細(xì)胞缺血缺氧，NF-κB信號通路是調(diào)控細(xì)胞生存和凋亡的重要信號通路，可致心肌纖維化、心肌肥厚。Ang Ⅱ還可促進(jìn)醛固酮的生成，增加Na+-K+-ATP酶活性，引起水鈉潴留。本研究結(jié)果顯示，Lei′s YXT可顯著抑制Ang Ⅱ表達(dá)，降低Na+-K+-ATP活性，提示雷氏養(yǎng)心活血湯可能通過抑制Ang Ⅱ表達(dá)，改善心肌重構(gòu)，減少水鈉潴留，從而改善心力衰竭癥狀，但其具體機(jī)制需要更加深入的研究以進(jìn)一步闡明。

CK是肌酸激酶能量傳遞系統(tǒng)的關(guān)鍵酶，調(diào)控三磷酸腺苷(ATP)和磷酸肌酸(PCr)之間的能量轉(zhuǎn)換。CK和LDH異常升高反映心臟能量代謝、能量物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)出現(xiàn)異常。血漿心鈉素是反映心功能的重要指標(biāo)，ANP具有利尿排鈉作用，還參與心臟血管損傷修復(fù)過程，干預(yù)心肌細(xì)胞及血管壁生長，影響其僵硬度[13]。白延平等[14]報道，HF病人治療1～5個月后，心功能改善的病人ANP含量均顯著降低。在本研究中，阿霉素注射導(dǎo)致大鼠血清ANP水平顯著升高，造成心功能損傷，灌服高劑量雷氏養(yǎng)心活血湯后，CK、LDH、ANP水平顯著降低，提示雷氏養(yǎng)心活血湯的治療作用與抑制CK、LDH、ANP表達(dá)，改善其引起的心功能異常相關(guān)。

Na+-K+-ATP酶是存在于細(xì)胞膜上的一種膜蛋白，能夠逆電化學(xué)梯度跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)Na+和K+。心肌細(xì)胞內(nèi)的Na+-K+-ATP酶能為心肌細(xì)胞持續(xù)收縮和舒張?zhí)峁﹦恿ΓS持細(xì)胞內(nèi)外的鈉鉀平衡[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，高劑量雷氏養(yǎng)心活血湯可顯著降低阿霉素引起的Na+-K+-ATP酶升高，調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)功能，修正鈉鉀平衡。另外，研究還發(fā)現(xiàn)雷氏養(yǎng)心活血湯對抗阿霉素引起的血糖顯著升高，具有一定的降糖作用。

綜上所述，雷氏養(yǎng)心活血湯對慢性心力衰竭病人臨床治療作用顯著，本研究通過阿霉素所致的心力衰竭大鼠模型初步探討了雷氏養(yǎng)心活血湯治療慢性心力衰竭的功能及作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)雷氏養(yǎng)心活血湯主要通過調(diào)節(jié)Ang Ⅱ、ANP、Na+-K+-ATP、CK、LDH酶表達(dá)發(fā)揮對心肌的保護(hù)及心臟的改善作用，但其具體機(jī)制需要更加深入的研究以進(jìn)一步闡明。