手足口病檢測(cè)中應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的應(yīng)用效果

王倩 黨一兵 李天順

1 營(yíng)口市衛(wèi)生健康事務(wù)中心 （遼寧 營(yíng)口 115000）2 營(yíng)口海關(guān) （遼寧 營(yíng)口 115003）

內(nèi)容提要： 目的：研究采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)于手足口病進(jìn)行檢測(cè)所取得的效果。方法：本文選擇的研究對(duì)象均為2017年5月～2018年9月本市各縣區(qū)送來的疑似手足口病病例50例作為本文研究對(duì)象，對(duì)于所有研究對(duì)象均選擇采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法進(jìn)行檢驗(yàn)，同時(shí)將檢驗(yàn)結(jié)果和實(shí)驗(yàn)室酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析，調(diào)查實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢查方法檢驗(yàn)的效率。結(jié)果：通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢驗(yàn)方法最終檢驗(yàn)的陽(yáng)性率為96.00%（48/50），檢驗(yàn)結(jié)果和實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，P＞0.05，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果也能夠得出，本文50例患兒的發(fā)病時(shí)間主要集中在夏秋季，而且男性患兒的發(fā)病率比女性患兒更多，隨著患兒年齡增長(zhǎng)，手足口病的發(fā)病率表現(xiàn)為下降的趨勢(shì)。結(jié)論：對(duì)于手足口病在進(jìn)行檢驗(yàn)的過程中，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方案進(jìn)行檢查可有效的對(duì)于患兒病情進(jìn)行診斷，是一種良好的輔助檢查依據(jù)。

手足口病一般是因?yàn)槟c道病毒導(dǎo)致的一種傳染病，病情多發(fā)生在小兒群體當(dāng)中，發(fā)病群體的年齡一般不超過五周歲。發(fā)病之后患兒臨床主要表現(xiàn)為厭食癥狀，存在有低熱和口痛，在患兒的手部和足部以及口腔等部位存在有小潰瘍、皰疹情況，嚴(yán)重的會(huì)對(duì)于患兒的生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生阻礙[1]。臨床大部分患兒會(huì)在一周之內(nèi)可自行康復(fù)，但是有一少部分患兒會(huì)因此而導(dǎo)致出現(xiàn)肺水腫和心肌炎等情況，個(gè)別患兒甚至?xí)霈F(xiàn)無(wú)菌性腦膜炎，并發(fā)癥嚴(yán)重的對(duì)患兒的生活質(zhì)量和生命安全產(chǎn)生影響，甚至?xí)菀讓?dǎo)致患兒死亡。對(duì)于這種病情需要進(jìn)行有效的診斷以便于及早對(duì)患兒進(jìn)行干預(yù)性治療。本文針對(duì)于此分析選擇采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)手足口病進(jìn)行檢驗(yàn)所取得的效果，并將主要研究情況進(jìn)行如下的報(bào)告。

1. 資料與方法

1.1 一般資料

本文選擇的研究對(duì)象為本市各個(gè)縣區(qū)所送來的疑似手足口病病例50例作為研究對(duì)象，對(duì)于所有研究對(duì)象的相關(guān)情況進(jìn)行分析，其中有男性患兒38例，女性患兒12例，患兒的年齡區(qū)間為1～5歲，平均（2.8±0.5）歲。所有患兒存在不同程度的低熱癥狀，此外還有厭食癥38例，在患兒的手部、足部和口腔等部位均存在不同程度的潰瘍和皰疹，通過實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)以后，本文所有患兒均得到確診。本研究所有研究對(duì)象排除存在嚴(yán)重器質(zhì)性損傷的患兒，也不存在有基礎(chǔ)性病癥患兒，本文排除不同意，進(jìn)行此次研究觀察的研究對(duì)象，排除存在有精神類病癥和意識(shí)障礙的患兒。

1.2 方法

選擇采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)過程當(dāng)中對(duì)于所有患兒咽拭子進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)復(fù)溫，然后利用全自動(dòng)核酸提取儀進(jìn)行核酸的提取工作，之后按照試劑盒的相關(guān)操作方法進(jìn)行操作，主要對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行腸道通用病毒EV、柯薩奇A組16型（CA-16）、腸道病毒71型（EV-71）的進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢驗(yàn)，選擇采用實(shí)時(shí)熒光PCR儀器ABI7500，試劑為江蘇碩世熒光核酸檢測(cè)試劑盒，按試劑盒說明配制20μl的檢測(cè)反應(yīng)體系，以核酸提取液為模板吸取5μl加入反應(yīng)體系中，反應(yīng)條件為：逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)30min 50°C，預(yù)變性5min 95°C，變性10s 95°C，退火、延伸及FAM通道檢測(cè)熒光40s 55°C，同時(shí)變性和退火延伸需要45個(gè)循環(huán)。診斷的標(biāo)準(zhǔn)是檢測(cè)樣品的核酸Ct值≤35且曲線呈S型并有明顯指數(shù)增長(zhǎng)為陽(yáng)性，Ct值＞38或未檢出為陰性。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)于熒光定量檢驗(yàn)結(jié)果和實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析，評(píng)價(jià)熒光定量檢驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本文數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件IBM SPSS25.0對(duì)于所有研究對(duì)象進(jìn)行檢驗(yàn)，本文的計(jì)數(shù)資料選擇采用卡方值（χ2）進(jìn)行檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異明顯，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2. 結(jié)果

通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢驗(yàn)方法最終檢驗(yàn)的陽(yáng)性率為96.00%（48/50），檢驗(yàn)結(jié)果和實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，P＞0.05，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果也能夠得出，本文的50例患兒的發(fā)病時(shí)間主要集中在夏秋季，而且男性患兒的發(fā)病率比女性患兒更多，隨著患兒年齡增長(zhǎng)，手足口病的發(fā)病率表現(xiàn)為下降的趨勢(shì)。見表1。

表1. 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)方法的比較

3. 討論

臨床有研究認(rèn)為腸道病毒當(dāng)中的EV71病毒感染的患兒均存在有嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，而且會(huì)在一定程度上對(duì)于患兒產(chǎn)生危害，容易導(dǎo)致患兒病死。然而由CA16病毒感染而導(dǎo)致患兒出現(xiàn)手足口病，預(yù)后效果相對(duì)較好，出現(xiàn)死亡的現(xiàn)象相對(duì)較低。手足口病一般多發(fā)生在兒童群體當(dāng)中患兒年齡通常不超過5周歲。本文針對(duì)于此簡(jiǎn)單分析手足口病在檢驗(yàn)過程中選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)的效果。

腸道病毒感染會(huì)導(dǎo)致手足口病存在一定的潛伏期，大約為一周左右?；純涸诔霈F(xiàn)感染癥狀后存在有病毒的免疫能力，不同類型的病毒感染之后，其抗體不存在交叉的保護(hù)作用。手足口病的分布相對(duì)廣泛，一年當(dāng)中最為多見的季節(jié)為夏秋季節(jié)，這種病毒的感染性存在隱匿的特點(diǎn)，所以對(duì)患兒進(jìn)行早期診斷尤為重要，能夠避免患兒病情的嚴(yán)重化。選擇酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)手足口病，檢測(cè)的陽(yáng)性率相對(duì)較低，靈敏度也相對(duì)較差，所以檢驗(yàn)過程中存在有一定的局限性[2]。選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢驗(yàn)方法進(jìn)行檢驗(yàn)，主要是因?yàn)檎麄€(gè)檢驗(yàn)過程通過PCR儀器完成，檢驗(yàn)不需要進(jìn)行紫外燈和電泳觀察，能夠減少相關(guān)的復(fù)雜操作的過程，加速了檢驗(yàn)的進(jìn)程，提升了檢驗(yàn)的可靠性，可在完全封閉的情況之下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增反應(yīng)，在一定程度上避免了PCR產(chǎn)生氣溶膠污染的狀況。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)過程當(dāng)中，檢驗(yàn)時(shí)間相對(duì)較短，全程一般只需要3～5個(gè)小時(shí)，可以將腸道病毒檢驗(yàn)時(shí)間大大縮短，這樣就能夠?qū)τ谑肿憧诓〉脑\斷提供充足的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，對(duì)于患兒的治療提供可行的幫助。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法通過對(duì)腸道通用病毒EV，CA16病毒和EV71病毒的分析，可以得出因?yàn)檫@兩種病毒感染而導(dǎo)致得手足口病的患兒在臨床癥狀表現(xiàn)方面，存在著一定的差異，CA16病毒導(dǎo)致患兒出現(xiàn)手足口病的病情表現(xiàn)相對(duì)較輕，而由EV71病毒感染而導(dǎo)致手足口病的患兒，病癥表現(xiàn)相對(duì)較為嚴(yán)重，很容易導(dǎo)致患兒出現(xiàn)神經(jīng)源性肺水腫和腦干腦炎等相關(guān)并發(fā)癥，因此對(duì)于患兒的生命安全產(chǎn)生嚴(yán)重的威脅。而本文的這一結(jié)果和相關(guān)臨床報(bào)道具有一致性，也能起到相互驗(yàn)證的作用。同時(shí)也提示我們?cè)谕ㄟ^實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢驗(yàn)的時(shí)候，對(duì)患兒病情診斷和治療都起到積極的作用。本文的相關(guān)數(shù)據(jù)也能提示我們，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢驗(yàn)方法對(duì)手足口病患兒進(jìn)行檢驗(yàn)具有較高的陽(yáng)性率，因此在臨床應(yīng)用予以重視。

綜上所述，對(duì)于手足口病在進(jìn)行檢驗(yàn)的過程中采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法進(jìn)行檢測(cè)可有效的對(duì)于患兒病情進(jìn)行診斷，是一種良好的輔助檢查依據(jù)。