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    單味中草藥提取物對豬源沙門氏菌的抑菌效果

    2019-07-29 05:26:38倪吉榮
    國外畜牧學·豬與禽 2019年6期

    倪吉榮

    摘 ?要:本試驗旨在探討黃連、苦參、黃柏、黃芪、甘草五種中草藥對豬源沙門氏菌的抑菌效果。試驗制備黃連、苦參、黃柏、黃芪、甘草五種中草藥提取物后,采用牛津杯法測定五種中草藥提取物對豬霍亂沙門氏菌的抑菌作用,并采用梯度稀釋法測定其最小抑菌濃度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC),觀察其對沙門氏菌的體外抑制作用。結果表明,空白對照組無抑菌圈,陽性對照組抑菌圈直徑為(20.13±1.47)mm;與對照組相比,苦參、黃芪組抑菌作用差異顯著(P>0.05),敏感程度均為高敏;黃連、黃柏、甘草組的差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01),敏感程度為高敏或中低敏;黃連、苦參、黃柏、黃芪、甘草五種中草藥的MIC濃度分別為20 g/L、10 g/L、80 g/L、20 g/L、160 g/L。試驗顯示,黃連、苦參、黃柏、黃芪、甘草五種中草藥均可一定程度地抑制豬源沙門氏菌,苦參抑制作用最強,與抗生素效果一致,其次分別為黃芪、黃連、黃柏、甘草。

    關鍵詞:單味中草藥;豬源沙門氏菌;抑菌效果

    中圖分類號:S816.7 文獻標志碼:A 文章編號:1001-0769(2019)06-0024-03

    沙門氏菌寄生于人類和動物腸道內(nèi),屬于革蘭氏陰性桿菌,是一種常見的人獸共患病病原菌,它不僅能導致仔豬副傷寒、母豬流產(chǎn)等動物性癥狀,還能使人類發(fā)生傷寒、副傷寒、敗血癥、腸胃炎和食物中毒[1]。豬沙門氏菌病又稱豬副傷寒,致病菌主要有豬傷寒沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌等,常發(fā)生于6月齡以下仔豬,以1~4月齡仔豬多發(fā),臨床上常表現(xiàn)為急性(敗血癥)、亞急性和慢性三種類型,其中急性病死率達90%以上,慢性病死率達25%~50%,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失[2]。據(jù)臨床試驗研究,引起豬沙門氏菌病的主要病原菌為豬傷寒沙門氏菌,傳統(tǒng)抗生素的廣泛應用雖然控制了沙門氏菌的傳播,但也存在著極為嚴重的安全隱患,導致了細菌耐藥性增強、畜產(chǎn)品抗生素殘留等問題,影響著豬沙門氏菌病的治療效果和畜產(chǎn)品質(zhì)量安全,對人體健康也造成了極大的影響[3]。

    中草藥作為我國傳統(tǒng)藥材,多系天然植物成分,具有抗菌、抗病毒、抗毒素、免疫調(diào)節(jié)等作用,且不易殘留、毒副作用小,具有西藥無法比擬的優(yōu)勢[4]。但是,目前在中藥提取物對豬源沙門氏菌的抑菌效果的研究中,多見于復方中藥制劑對豬沙門氏菌病的治療效果評價,對于單味中藥提取物對豬源沙門氏菌病抑菌效果的評價研究較少,致使中藥提取物的臨床應用缺乏一定的依據(jù)。本文就單味中草藥對豬源沙門氏菌的抑菌效果進行分析,結果表明黃連等五種中草藥對豬源沙門氏菌有一定的抑制作用[5],苦參抑制作用最強,且與抗生素效果一致,其次分別為黃芪、黃連、黃柏、甘草。

    1 ?材料與方法

    1.1 試驗材料

    黃連、苦參、黃柏、黃芪、甘草購自毫州市林中森藥業(yè)銷售公司。硫酸慶大霉素購自杭州微生物試劑有限公司。豬霍亂沙門氏菌(NEAU0452)購自中國獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心[6]。營養(yǎng)瓊、酵母浸粉脂和瓊脂粉購自北京奧博星生物技術有限責任公司,牛肉浸膏和蛋白胨購自北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠,營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基購自青島海博生物技術有限公司。

    1.2 ?研究方法

    1.2.1 提取物的制備

    黃連單味藥提取物的制備:稱取一定質(zhì)量的經(jīng)粉碎處理的黃連,按料液比1∶10加入蒸餾水浸泡30 min,然后用超聲清洗儀處理 ?20 min,再用電爐加熱至沸,保持微沸1 h,過濾后加入等量蒸餾水,保持微沸20 min,過濾,將兩次濾液合并,轉至60 ℃水浴鍋濃縮至0.5 g/mL。其余四種中藥提取制備同黃連。

    1.2.2 各提取物抑菌效果的測定與評判

    試驗分為空白對照組、陽性對照組、各單味中草藥組,空白組即為蒸餾水200 μL給藥,陽性對照組為硫酸慶大霉素10 μg/mL給藥,各單味中草藥組分別以0.5 mg/mL給藥[7]。

    抑菌作用評定采用牛津杯法。將待試細菌制成細菌混懸液,調(diào)菌落總數(shù)為106 CFU/mL,用滅菌棉簽在平皿培養(yǎng)基表面均勻涂布細菌混懸液[8]。采用無菌操作將經(jīng)過高壓滅菌處理的牛津杯垂直放置在培養(yǎng)基上,輕輕加壓,使其與培養(yǎng)基緊密接觸,隨后進行給藥,每種菌做5個平行[9]。加滿后置37 ℃培養(yǎng) ? ?16 h~18 h,觀察牛津杯孔周圍是否有透明圈,用游標卡尺直接測量其大小,記錄數(shù)據(jù)。判斷標準如下:抑菌圈直徑≥20 mm為高敏,抑菌圈直徑在15 mm~20 mm之間為中敏,抑菌圈直徑≤15 mm為低敏,無抑菌圈為耐藥[10]。

    1.2.3 各提取物對致病菌最小抑菌濃度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)的測定

    在試管架上依次排列裝有營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的滅菌試管,在試管中加入一定體積的中草藥提取物使培養(yǎng)基與所加中草藥提取物溶液總體積為5 mL,制得藥物濃度分別為10 mg/mL、20 mg/mL、40 mg/mL、80 mg/mL、160 mg/mL、320 mg/mL和640 mg/mL培養(yǎng)基。向上述所制含不同藥物濃度的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中分別加入 0.5 mL備用菌液,混勻備用。將各試管置于37 ℃恒溫培養(yǎng)20 h。從培養(yǎng)20 h的試管中取出100 μL混合液,均勻涂布于固體LB平板,37 ℃恒溫倒置培養(yǎng)24 h后觀察結果,以第一個出現(xiàn)稀疏單菌落的平板所對應的藥物濃度為最低抑菌濃度[11]。

    1.3 數(shù)據(jù)分析

    本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進行分析處理,試驗數(shù)據(jù)均為平均數(shù)和標準差。樣本獨立性采用t檢驗,數(shù)據(jù)有效性采用卡方檢驗。

    2 ?試驗結果

    2.1 各提取物對豬源沙門氏菌的抑制程度

    五種中草藥提取物抑菌作用結果見表1??瞻讓φ諢o抑菌圈,陽性對照抑菌圈直徑為(20.13±1.47)mm。與陽性對照組相比,苦參、黃芪組抑菌作用差異不顯著(P>0.05),敏感程度均為高敏;黃連、黃柏、甘草組的差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01),敏感程度為高敏或中低敏。

    2.2 各提取物對豬源沙門氏菌的MIC

    表2為各提取物對致病菌MIC的測定結果,五種MIC濃度分別為20 g/L、10 g/L、80 g/L、20 g/L、160 g/L。結果表明,抑菌效果最佳的是苦參,其次分別為黃芪、黃連、黃柏、甘草。

    3 ?討論

    隨著土霉素、四環(huán)素、磺胺類和喹諾酮類抗生素的廣泛使用,細菌耐藥性以及藥物殘留等問題極大地損害了食品質(zhì)量安全,也威脅著人類健康。因此,尋找安全有效的飼用抗生素替代物是目前畜牧業(yè)研究的重要方向,中草藥作為傳統(tǒng)中醫(yī)藥的瑰寶,具有抗菌、抗病毒、抗毒素、免疫調(diào)節(jié)、補充營養(yǎng)、提高生產(chǎn)性能等作用,且不易殘留、毒副作用小,具有西藥無法比擬的優(yōu)勢,在抗生素替代品研究和提高畜禽生產(chǎn)性能上倍受關注,成為了當今畜牧業(yè)和飼料業(yè)研究的熱點[12]。

    本研究基于文獻的積累篩選了五種中草藥,包括黃連、苦參、黃柏、黃芪、甘草,通過制備提取物,分別分析其對豬源沙門氏菌的抑菌效果。黃連清熱燥濕、瀉火解毒,其主要成分小檗堿對金黃色葡萄球菌、溶血鏈球菌、肺炎鏈球菌、霍亂弧菌、炭疽桿菌、痢疾桿菌等均有較強的抗菌作用[13]。苦參苦寒降瀉、瀉火燥濕、清熱解毒,苦參堿可使雞大腸桿菌菌體變形、細胞質(zhì)固縮、質(zhì)壁分離、菌體中央出現(xiàn)空腔,最終引起細菌死亡[14]。黃柏苦寒沉降,清熱燥濕、瀉火解毒。黃芪可增強機體免疫功能,且具有較廣泛的抗菌作用[13]。甘草具有清熱解毒的功效,甘草黃酮類化合物對金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、酵母菌、真菌、鏈球菌等均有抑制作用[15]。

    試驗結果表明,對照陽性硫酸慶大霉素組,苦參、黃芪組抑菌作用有顯著差異,敏感程度均為高敏;黃連、黃柏、甘草組敏感程度為中低敏,且差異顯著,具有統(tǒng)計學意義。此外,黃連、苦參、黃柏、黃芪、甘草五種中草藥提取物MIC濃度分別為20 g/L、10 g/L、80 g/L、20 g/L、160 g/L。綜上所述,黃連、苦參、黃柏、黃芪、甘草五種中草藥均對豬源沙門氏菌有一定的抑制作用,苦參抑制作用最強,與抗生素效果一致,其次分別為黃芪、黃連、黃柏、甘草?!酢?/p>

    參考文獻:(15篇,略)

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