肺炎支原體肺炎患兒血清citron和polo樣激酶表達(dá)水平及意義

李玲飛 馮利平 王恩智 童夏生

肺炎支原體感染致病機(jī)制十分復(fù)雜，至今未完全闡明[1]。目前認(rèn)為，炎癥因子及炎性細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在肺炎支原體感染的炎癥過(guò)程中起了重要作用[2-3]。絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族與多種疾病的炎癥有關(guān)，其活化后可產(chǎn)生大量促炎細(xì)胞因子，參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)[4]。Citron和polo樣激酶均屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族成員，與癌癥、腦發(fā)育有關(guān)[5]。最近發(fā)現(xiàn)，Polo樣激酶也具有介導(dǎo)炎癥反應(yīng)及促進(jìn)釋放細(xì)胞因子的作用[6]，但citron和polo樣激酶參與肺炎支原體肺炎的作用如何，目前知之不多。本研究通過(guò)檢測(cè)肺炎支原體肺炎患兒血清citron和polo樣激酶的表達(dá)，探討絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族在肺炎支原體肺炎中的炎癥機(jī)制。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選自浙江省臺(tái)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院兒科2017年8月—2018年5月間住院的肺炎支原體肺炎患兒61例，另選擇同期健康體檢兒童30名作對(duì)照。本研究均取得患兒家長(zhǎng)知情同意，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]具有發(fā)熱、咳嗽等癥狀，胸部X片見片狀陰影等，單次血清肺炎支原體-IgM抗體滴度≥1∶160。肺炎支原體肺炎輕、重度的診斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)《兒童社區(qū)獲得性肺炎管理指南》[8]，輕度肺炎的判定標(biāo)準(zhǔn)為有發(fā)熱、咳嗽等癥狀，不伴有低氧血癥及肺內(nèi)外并發(fā)癥等表現(xiàn)；重度肺炎的判定標(biāo)準(zhǔn)為有發(fā)熱、咳嗽等癥狀，出現(xiàn)胸壁吸氣性凹陷或鼻翼扇動(dòng)或呻吟之一提示有低氧血癥，和（或）伴有肺內(nèi)外并發(fā)癥表現(xiàn)。

1.3 納入、排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：符合肺炎支原體肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)，病程在48h內(nèi)，伴有發(fā)熱、咳嗽及肺部啰音，胸部X片見片狀陰影，血清肺炎支原體IgM陽(yáng)性。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）伴有肺結(jié)核、支氣管哮喘等其他呼吸系統(tǒng)疾??；（2）近1個(gè)月內(nèi)使用過(guò)糖皮質(zhì)激素；（3）伴有腫瘤、糖尿病、腎病綜合癥等疾病。

2 方法

2.1 治療方法 對(duì)輕度感染患兒給予阿奇霉素10mg·kg-1·d-1用 3天停 4天，及止咳、化痰等治療 2周；對(duì)重度感染患兒給予阿奇霉素10mg·kg-1·d-1用3天停4天，及止咳、化痰等治療3周基礎(chǔ)上，加用甲潑尼龍（1～2）mg·kg-1·d-1，連續(xù)3～7天。

2.2 標(biāo)本采集 采集患兒入院當(dāng)時(shí)及治療后2周靜脈血各2mL，室溫放置2h，離心后取上清液-80℃冰箱貯存，集中檢測(cè)。對(duì)照組為就診當(dāng)時(shí)抽取，方法同上。

2.3 肺炎支原體抗體測(cè)定 肺炎支原體試劑盒購(gòu)自深圳亞輝龍生物科技股份有限公司（批號(hào)20180101），化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血清IgM表達(dá)強(qiáng)度。

2.4 血清citron和polo樣激酶的檢測(cè) citron和polo樣激酶試劑盒均購(gòu)自上海研吉生物科技有限公司（批號(hào) SU-B14722，SU-B14642）。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法，檢測(cè)血清citron和polo樣激酶的蛋白濃度[9]。由專人負(fù)責(zé)檢測(cè)，具體步驟嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間均數(shù)比較采用方差分析，治療前后比較采用配對(duì)資料的t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 肺炎支原體肺炎患兒與健康對(duì)照者一般資料比較 肺炎支原體肺炎患兒61例中男33例，女28例，年齡 3～8 歲，平均（5.8±1.3）歲；病程 72h 內(nèi)；其中重度26例，輕度35例。健康對(duì)照30名中男18例，女 12例，年齡 3～9歲，平均（5.7±1.2）歲。兩組年齡、性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3.2 肺炎支原體肺炎患兒與健康對(duì)照者血清citron和polo樣激酶蛋白濃度比較 輕度和重度肺炎支原體肺炎組血清citron和polo樣激酶蛋白的濃度均顯著高于對(duì)照組（P均＜0.01）；且重度組血清citron和polo樣激酶蛋白的濃度顯著高于輕度組（P＜0.01），見表1。

表1 肺炎支原體肺炎患兒與健康對(duì)照者血清citron和polo樣激酶蛋白濃度比較（ng/mL

表1 肺炎支原體肺炎患兒與健康對(duì)照者血清citron和polo樣激酶蛋白濃度比較（ng/mL

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.01；與輕度肺炎支原體肺炎組比較，△P＜0.01；對(duì)照組為健康體檢者；輕度肺炎支原體肺炎組給予阿奇霉素治療；重度肺炎支原體肺炎組給予阿奇霉素加甲潑尼龍

組別對(duì)照組輕度肺炎支原體肺炎組重度肺炎支原體肺炎組例數(shù)30 35 26 citron 1.31±0.62 4.09±1.65*10.01±3.14*△polo樣激酶0.77±0.30 2.10±1.00*4.54±1.23*△

3.3 肺炎支原體肺炎患兒治療前后血清citron和polo樣激酶表達(dá) 治療后輕度肺炎支原體肺炎組血清citron和polo樣激酶的蛋白濃度顯著低于治療前（P均＜0.01）；重度肺炎支原體肺炎組血清polo樣激酶蛋白濃度低于治療前（P＜0.05），而citron蛋白濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表 2。

4 討 論

機(jī)體感染肺炎支原體后，免疫系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生應(yīng)答，天然免疫和獲得性免疫系統(tǒng)共同起到防御感染的作用。多種炎癥介質(zhì)（包括白細(xì)胞介素）和免疫細(xì)胞參與了肺炎支原體感染的免疫反應(yīng)[10]。

Citron是一種含多個(gè)結(jié)構(gòu)域蛋白，定位于有絲分裂溝與中間體，在有絲分裂的最后時(shí)期，發(fā)揮細(xì)胞漿移動(dòng)的功能，促進(jìn)收縮環(huán)元件間的交互作用[11]。目前已知，citron的表達(dá)水平與水皰性口炎病毒（HIV-1假病毒）感染有關(guān)，HIV-1假病毒可引起citron水平大量升高，繼而誘導(dǎo)HIV-1假病毒的產(chǎn)生，當(dāng)CD4+T細(xì)胞衰竭后citron的水平明顯下降[12-13]。Polo樣激酶是一類在細(xì)胞周期進(jìn)程中有重要作用的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在有絲分裂的啟動(dòng)、中心體成熟、紡錘體分離、分裂中期至后期的過(guò)渡、有絲分裂的結(jié)束和胞質(zhì)分離的啟動(dòng)等過(guò)程中都起著重要的調(diào)控作用[14]。

表2 肺炎支原體肺炎患兒治療前后血清citron和polo樣激酶表達(dá)（ng/mL，x±s）

本研究發(fā)現(xiàn)，肺炎支原體肺炎感染患兒血清citron和polo樣激酶的表達(dá)升高，提示同其它絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族成員一樣，在肺炎支原體感染后，citron和polo樣激酶的活性提高，可能促進(jìn)了肺炎支原體感染的炎癥過(guò)程。且重度組citron和polo樣激酶的表達(dá)水平高于輕度組，提示這兩種酶的濃度隨著疾病的嚴(yán)重程度增加相應(yīng)地發(fā)生改變，表明它們可能與炎癥程度有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)抗感染治療后，輕度肺炎支原體肺炎組citron和polo樣激酶的表達(dá)水平都得到下調(diào)，提示隨著病情的恢復(fù)機(jī)體內(nèi)的炎癥因子也相應(yīng)隨之下降，從而減輕了炎癥反應(yīng)。重度肺炎支原體肺炎組polo樣激酶的表達(dá)水平也得到下調(diào)，但citron無(wú)變化，提示炎癥因子之間對(duì)感染的反應(yīng)不完全相同，與疾病的不同時(shí)期及病情輕重有關(guān)；也可能由于重度肺炎組受到甲潑尼龍對(duì)免疫抑制的作用，從而影響了citron和polo樣激酶的表達(dá)，有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，肺炎支原體肺炎患兒血清citron和polo樣激酶的表達(dá)水平升高，絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族在肺炎支原體肺炎的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能起著非常重要作用，它們的血清濃度可能反映肺炎支原體肺炎病情輕重的指標(biāo)之一。