• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    昆侖胎菊水溶性黃酮提取工藝優(yōu)化及其對衰老小鼠肝組織SIRT1、p53表達的影響

    2019-07-26 08:25:14李福香李富華趙吉春曾凱芳
    食品科學(xué) 2019年14期
    關(guān)鍵詞:半乳糖昆侖液料

    田 勇,郅 琦,李福香,李富華,2,趙吉春,2,曾凱芳,2,明 建,2,*

    (1.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院,重慶 400715;2.西南大學(xué)食品貯藏與物流研究中心,重慶 400715)

    兩色金雞菊(Coreopsis tinctoria Nutt.)屬于菊科(Compositae)金雞菊屬(Coreopsis),是一種廣泛分布于世界各地的小型、無毛、芳香類一年生草本植物[1]。在中國,因其生長在新疆南部海拔3 000 m以上的喀喇昆侖山脈常年積雪高山區(qū)域而被當?shù)厝朔Q為“昆侖雪菊”或“昆侖雪茶”。它的干燥花蕾被稱為昆侖胎菊(C. tinctoria buds),不僅用作花茶類飲料,還用作維傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中治療高血壓和高脂血癥的民間藥物[2-3]。植物化學(xué)研究表明,雪菊含有多種生物活性物質(zhì),包括黃酮類、酚類、苯丙素類、聚乙炔糖苷和甾醇等,其中黃酮類化合物含量最為豐富,是其主要的功能活性成分[2,4-5]。目前,國內(nèi)外研究者們對雪菊黃酮類化合物的提取條件和工藝進行了部分研究,初步判斷出其主要黃酮類物質(zhì)包括總黃酮、水溶性黃酮、原花青素等[6-8]。昆侖胎菊在日常生活中主要作為花茶沖泡飲用,所以其水溶性黃酮的提取及功能活性研究更加值得關(guān)注。

    沙愛龍等[9]研究發(fā)現(xiàn)雪菊黃酮可顯著減緩動物腦和器官的萎縮和退化過程,促進新陳代謝,提高免疫功能,證明其具有抗衰老功能。Zhang Weixin等[10]研究發(fā)現(xiàn)雪菊水提取物顯著提高D-半乳糖致衰老小鼠體內(nèi)的抗氧化防御功能,從而延緩衰老。以上研究表明,昆侖雪菊黃酮具有良好的抗衰老作用,但對其作用機制研究尚不深入。沉默信息調(diào)節(jié)因子1(silent information regulator 1,SIRT1)是一種煙酰胺腺嘌呤二核苷酸依賴性核組蛋白去乙?;?,參與多種生理過程的調(diào)節(jié),包括衰老、DNA修復(fù)、細胞周期、新陳代謝、應(yīng)激條件下的細胞存活等[11-12]。p53是一種腫瘤抑制因子,可被許多應(yīng)激物激活,誘導(dǎo)細胞凋亡、細胞周期停滯或衰老,在衰老過程中也起著重要作用[13-14]。研究表明,SIRT1的激活對衰老調(diào)節(jié)因子p53有明顯的抑制作用,從而減少細胞凋亡,延緩衰老[15-16]。

    本實驗以干燥昆侖胎菊為原料,利用水浸提其水溶性黃酮,并采用響應(yīng)面法優(yōu)化浸提工藝。同時,通過D-半乳糖致衰老小鼠模型,探討優(yōu)化工藝提取條件下制備的昆侖胎菊水溶性黃酮(C. tinctoria buds water soluble flavonoids,CBF)對衰老小鼠肝組織SIRT1、p53表達的影響,以期為深入研究昆侖胎菊的營養(yǎng)價值及保健功能提供理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料、試劑與動物

    昆侖胎菊由新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)院提供,并經(jīng)主任醫(yī)師趙生俊鑒定。

    蘆丁標準品(色譜級)、D-半乳糖(分析純)美國Sigma-Aldrich公司;SIRT1抗體、p53抗體 美國Proteintech公司;BCA蛋白定量檢測試劑盒、抗兔二抗武漢賽維爾生物科技有限公司;乙醇、NaOH、NaNO2、Al(NO3)3均為國產(chǎn)分析純。

    60 只SPF級昆明小鼠(雌雄各半,(20±2)g)購于重慶市中藥研究院,動物生產(chǎn)許可證為SCXK(渝)2017-003。

    1.2 儀器與設(shè)備

    HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋 金壇市富華儀器有限公司;RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠;VIS-722紫外-可見分光光度計 上海精科科學(xué)儀器有限公司;FA1004A電子天平 上海精天電子儀器有限公司;LGJ-10冷凍干燥機 北京松源華興科技發(fā)展有限公司;DF8517超低溫冷凍儲存箱(-80 ℃) 韓國Ilshin公司;RM2016病理切片機 上海徠卡儀器有限公司;HI1220烤片機 德國LEICA公司;DYCZ-24DN雙垂直電泳儀 北京六一儀器廠;LC-20A高效液相色譜儀(配有二極管陣列檢測器) 日本島津公司。

    1.3 方法

    1.3.1 總黃酮提取量的測定

    參照吳瑛等[17]的方法進行。以蘆丁制作標準曲線:稱取蘆丁標準品11.2 mg,置于50 mL容量瓶中,加適量體積分數(shù)60%乙醇溶液,水浴加熱使之溶解,并定容至刻度,即得到0.224 mg/mL的對照品溶液。移取對照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL,分別置于25 mL容量瓶中,并用蒸餾水定容至6 mL。加入1 mL的50 g/L NaNO2溶液,搖勻后靜置6 min;加入1 mL的100 g/L Al(NO3)3溶液,搖勻后靜置6 min;加入10 mL的40 g/L NaOH試液,加蒸餾水稀釋至刻度,搖勻后靜置15 min。以不加樣品溶液為空白對照,于波長510 nm處測定各標準溶液吸光度。以吸光度(Y)為縱坐標,蘆丁對照溶液質(zhì)量濃度(X,μg/mL)為橫坐標,繪制標準曲線,得到回歸方程為Y=0.012 6X-0.006 1(R2=0.999 6)。在蘆丁質(zhì)量濃度0~53.76 μg/mL范圍內(nèi),質(zhì)量濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

    總黃酮提取量的測定:移取1 mL適當稀釋倍數(shù)的樣品溶液,加蒸餾水至6 mL,以不加樣品溶液為空白,按蘆丁標準曲線制作步驟處理后,在波長510 nm處測得吸光度,帶入標準曲線回歸方程,并按下式計算昆侖胎菊水提取液中總黃酮提取量:

    式中:C1為根據(jù)標準回歸方程計算的黃酮質(zhì)量濃度/(mg/mL);N1為稀釋倍數(shù);V1為樣品溶液總體積/mL;m1為樣品質(zhì)量(干基)/g。

    1.3.2 CBF提取的單因素試驗

    采用水溶劑提取法提取昆侖胎菊中水溶性黃酮類化合物,稱取3 g昆侖胎菊(干質(zhì)量),固定其他條件,分別考察水提時間(2、5、8、11、14、17 min)、水提溫度(75、80、85、90、95、100 ℃)、液料比(50∶1、60∶1、70∶1、80∶1、90∶1、100∶1(mL/g))3 個因素對昆侖胎菊總黃酮提取量的影響。

    1.3.3 響應(yīng)面分析法優(yōu)化提取條件

    根據(jù)單因素試驗結(jié)果,采用Box-Behnken試驗設(shè)計原理,以水提時間、水提溫度、液料比為自變量,提取液中總黃酮提取量為響應(yīng)值,進行3因素3水平的響應(yīng)面分析,優(yōu)化CBF提取條件。各因素水平編碼見表1。

    表1 響應(yīng)面試驗自變量因素與水平Table 1 Independent variable and levels used in response surface analysis

    1.3.4 CBF的高效液相色譜分析

    1.3.4.1 色譜條件

    參照Liang Qian等[18]的方法,稍作修改。采用BDS C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相A為乙腈、B為體積分數(shù)0.1%甲酸溶液;流速0.7 mL/min;進樣量10 μL;柱溫40 ℃;LC-20A二極管陣列檢測器;色譜數(shù)據(jù)在200~600 nm波長范圍內(nèi)掃描,檢測波長280 nm。梯度洗脫程序如表2所示。

    表2 高效液相色譜洗脫條件Table 2 Elution conditions for HPLC

    1.3.4.2 標準品溶液制備

    準確稱取綠原酸、黃諾馬苷、兒茶素、花旗松素和馬里苷標準品各5.0 mg,用色譜甲醇溶解并分別定容于5 mL棕色容量瓶中,配制成1 mg/mL標準儲備液,并稀釋成不同質(zhì)量濃度溶液(0、10、40、70、100、200、400 μg/mL),經(jīng)0.45 μm有機濾膜過濾,備用。按照上述的色譜條件制作標準曲線。以標準品液質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(x),以峰面積為縱坐標(y),繪制標準曲線,分別得到回歸方程:y綠原酸=24 279x-99 047,R2=0.999 1;y黃諾馬苷=17 868x-72 736,R2=0.999 2;y兒茶素=16 162x-53 422,R2=0.999 3;y花旗松素=29 328x-75 521,R2=0.999 5;y馬里苷=10 549x-18 026,R2=0.999 5;在0~400 μg/mL線性關(guān)系良好。結(jié)果以干質(zhì)量表示(mg/g)。

    1.3.5 動物分組與給藥

    用于動物模型給藥處理的CBF濃縮制備:稱取10 g干燥昆侖胎菊,按照響應(yīng)面優(yōu)化得到的最優(yōu)工藝條件提取3 次,每次提取液過濾后合并濾液。在減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中45 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后,真空冷凍干燥成棕褐色粉末。按照1.3.1節(jié)方法測定其總黃酮含量占(35.27±1.81)%。用藥處理時用滅菌生理鹽水溶解稀釋到相應(yīng)的黃酮濃度。參考Zhang Weixin等[10]的方法建立衰老小鼠模型,小鼠隨機分為5 組,每組12 只,除正常對照組外,其余4 組每日頸背部皮下注射D-半乳糖(無菌生理鹽水溶解,300 mg/(kg·d)),連續(xù)造模45 d。每日D-半乳糖造模后,每組分別進行給藥灌胃處理,小鼠分組及給藥情況如表3所示。小鼠體質(zhì)量每隔7 d稱量一次。

    表3 各組小鼠的基本給藥情況Table 3 Animal grouping and administration protocol

    1.3.6 小鼠一般行為學(xué)的觀察及肝組織樣品的制備

    造模給藥期間每天觀察并記錄各組小鼠的一般行為學(xué)變化,包括進食、皮膚、毛色、活動和精神等情況。小鼠造模45 d后,禁食不禁水24 h,頸椎脫臼處死,迅速摘取小鼠肝臟組織,用預(yù)凍4 ℃滅菌生理鹽水分別洗凈淤血。將肝組織分為2 份,一份固定在福爾馬林中,用于制備石蠟切片(4 μm);另一份液氮凍存于-80 ℃冰箱,用于測定衰老相關(guān)蛋白表達。

    1.3.7 肝組織切片的制作及病理學(xué)形態(tài)觀測

    新鮮肝組織→放入10%福爾馬林試劑固定24 h→分別經(jīng)體積分數(shù)為75%、85%、90%、95%乙醇溶液脫水處理4、2、2、1 h→無水乙醇I 30 min→無水乙醇II 30 min→醇苯5~10 min→二甲苯I 5~10 min→二甲苯II 5~10 min→石蠟包埋組織塊→石蠟切片機切片厚4 μm→烤片→石蠟切片脫蠟復(fù)水→蘇木素染液染3~5 min→分化液分化→返藍液返藍→流水沖洗→切片依次入體積分數(shù)85%、95%的梯度乙醇脫水各5 min→入伊紅染液中染色5 min→切片依次放入無水乙醇I、II、III和二甲苯I、II各5 min→中性樹膠封片→顯微鏡鏡檢(×200),圖像采集分析[19]。

    1.3.8 肝組織中SIRT1、p53蛋白表達水平

    采用Western blot法測定。稱取適量肝組織,加入蛋白酶抑制劑和蛋白裂解液,徹底勻漿,離心,提取總蛋白。BCA蛋白定量試劑盒檢測蛋白濃度,加熱使之變性,每個蛋白樣品等量(30 μg)進行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離,電泳后將蛋白轉(zhuǎn)印至PVDF膜上,用5%的脫脂牛奶封閉1 h后,加入稀釋一抗(SIRT1、p53)4 ℃孵育過夜,TBST洗3 次,加二抗(TBST稀釋3 000 倍)室溫下孵育30 min,TBST洗3 次,ECL化學(xué)發(fā)光法顯影曝光,掃描記錄,采用alphaEaseFC軟件測定條帶灰度值[20]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 單因素試驗結(jié)果

    2.1.1 水提時間對總黃酮提取量的影響

    圖1 水提時間對總黃酮提取量的影響Fig. 1 Effect of extraction time on the yield of flavonoids from C. tinctoria buds

    由圖1可知,在水提時間2~17 min的范圍內(nèi),隨著時間的延長,昆侖胎菊總黃酮的提取量均呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢。但考慮到日常生活中昆侖胎菊用于茶飲的水提時間一般不會超過15 min,故選擇水提時間14 min較佳。

    2.1.2 水提溫度對總黃酮提取量的影響

    圖2 水提溫度對總黃酮提取量的影響Fig. 2 Effect of extraction temperature on the yield of flavonoids from C. tinctoria buds

    由圖2可知,在水提溫度75~100 ℃的范圍內(nèi),隨著溫度的增加,昆侖胎菊總黃酮的提取量呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢,當溫度達到95 ℃以上,總黃酮提取量的增加不明顯。因此選擇水提溫度95 ℃較為合適。

    2.1.3 液料比對總黃酮提取量的影響

    圖3 液料比對總黃酮提取量的影響Fig. 3 Effect of water-to-material ratio on the yield of flavonoids from C. tinctoria buds

    由圖3可知,在液料比為50∶1~100∶1的范圍內(nèi),隨著液料比的增加,昆侖胎菊總黃酮的提取量呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢,當液料比為70∶1(mL/g)時,總黃酮提取量達到最高值。因此最合適的液料比為70∶1。

    2.2 響應(yīng)面分析法優(yōu)化試驗

    2.2.1 響應(yīng)面試驗結(jié)果與方差分析

    在單因素試驗結(jié)果基礎(chǔ)上,采用Design-Expert 8.0.6軟件進行響應(yīng)面試驗設(shè)計及數(shù)據(jù)分析,以考察各因素間的交互作用以及優(yōu)化最佳提取工藝,結(jié)果見表4。對表4的試驗數(shù)據(jù)進行多元回歸擬合,得到總黃酮提取量對水提時間(A)、水提溫度(B)和液料比(C)的二次回歸模型方程為:

    總黃酮提取量=-2 191.079 28+28.798 36A+36.740 05B+9.382 85C-0.163 97AB-0.010 747AC-0.045 800BC-0.385 66A2-0.160 00B2-0.033 759C2

    表4 響應(yīng)面試驗設(shè)計及結(jié)果Table 4 Experimental design and results for response surface analysis

    表5 響應(yīng)面回歸模型的方差分析Table 5 Analysis of variance (ANOVA) for the yield of flavonoids against various extraction conditions

    對此模型進行回歸方差分析,由表5可知,總黃酮提取試驗設(shè)計的整體模型呈現(xiàn)極顯著水平(P<0.01),失擬項不顯著(P>0.05),表明模型選擇合適。回歸模型的一次項、二次項均顯著,交互項AB、BC顯著,AC不顯著。表明各因素對于昆侖胎菊提取過程中總黃酮提取量的影響并不是簡單的線性關(guān)系。由F值可知,各因素對總黃酮提取量影響大小順序為水提時間(A)>水提溫度(B)>液料比(C)?;貧w方差分析結(jié)果表明,該模型的復(fù)相關(guān)系數(shù)R2為0.973 7,模型校正決定系數(shù)R2Adj為0.939 9,表明此模型可以解釋93.99%響應(yīng)值的變化,僅有總變異的6.01%,不能用此模型來解釋。模型的變異系數(shù)為1.11%,較小,表明試驗結(jié)果重復(fù)性較好。此外,模型的信噪比較高(為16.513),表明此模型的擬合度和可信度較好,可用于預(yù)測和優(yōu)化CBF提取工藝的實驗結(jié)果[21-22]。

    2.2.2 響應(yīng)面分析

    圖4 各因素交互作用對總黃酮提取量的影響Fig. 4 Response surface and contour plots showing the interactive effects of three extraction parameters on the yield of flavonoids from C. tinctoria buds

    為了更直觀反映各因素對昆侖胎菊總黃酮提取量的影響以及最佳工藝參數(shù)和參數(shù)間的交互作用,采用響應(yīng)面及其等高線圖分析,如圖4所示。圖4可以直觀地反映出水提時間、水提溫度和液料比3 個因素之間的交互作用對昆侖胎菊水溶性總黃酮提取量的影響。響應(yīng)面陡峭表明該因素對總黃酮提取量的影響較強,曲面平緩表明影響較弱;等高線的形狀可反映出各因素間交互效應(yīng)的強弱,趨于橢圓形表明兩因素的交互作用顯著,而圓形表明不顯著[23-24]。由圖4可知,比較響應(yīng)面的陡峭程度為水提時間(A)>水提溫度(B)>液料比(C),表明各因素對總黃酮提取量影響大小順序為水提時間(A)>水提溫度(B)>液料比(C),其結(jié)論同表5方差分析結(jié)論一致;比較3 個因素交互作用的等高線:AB橢圓形,AC圓形,BC橢圓形,表明水提時間與水提溫度、水提溫度與液料比交互作用顯著,水提時間與液料比交互作用不顯著,其結(jié)論同表5方差分析結(jié)論一致。

    2.2.3 提取工藝條件的優(yōu)化及驗證

    根據(jù)Box-Behnken試驗設(shè)計獲得的結(jié)果和二次回歸方程,利用Design-Expert軟件優(yōu)化分析得到總黃酮的最佳提取條件為:水提時間15.39 min、水提溫度95.89 ℃、液料比71.04∶1(mL/g),在此條件下預(yù)測的總黃酮提取量為143.04 mg/g,結(jié)合實際操作,選取最佳條件的近似值,即水提時間15 min、水提溫度96 ℃、液料比71∶1(mL/g)進行3 次重復(fù)驗證實驗,得到總黃酮提取量為(145.45±4.60)mg/g,與理論預(yù)測值相比,相對誤差僅為1.68%,表明該回歸模型優(yōu)化得到的提取工藝條件實際有效。

    2.2.4 CBF的高效液相色譜分析

    研究表明,昆侖胎菊的活性成分主要是黃酮類化合物[2-3]。由圖5所示,CBF包含綠原酸(0.94±0.09) mg/g、黃諾馬苷(13.64±0.13)mg/g、兒茶素(2.22±0.11)mg/g、花旗松素(2.11±0.10) mg/g和馬里苷(13.39±0.34)mg/g,表明CBF的主要活性成分由酚酸和黃酮類化合物組成,其中黃酮類化合物種類更多且含量更高。

    圖5 標準品(A)與CBF(B)色譜圖Fig. 5 Chromatograms of reference substances of CBF (A) and flavonoid composition of CBF (B)

    2.3 CBF對衰老小鼠體質(zhì)量及一般行為學(xué)的影響

    圖6 CBF對衰老小鼠體質(zhì)量變化的影響Fig. 6 Effect of CBF on body mass changes of aging mice

    D-半乳糖長期注射導(dǎo)致衰老小鼠動物模型是抗衰老理論及藥理學(xué)研究的經(jīng)典方法[25-26]。D-半乳糖造衰老小鼠模型期間,觀測小鼠體質(zhì)量的增長變化情況可反映其生長發(fā)育及健康狀況[27]。由圖6所示,隨著衰老造模期間的延長,各組小鼠體質(zhì)量均有所增加。衰老模型組小鼠體質(zhì)量增長逐漸緩慢,并出現(xiàn)精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、行動緩慢、皮膚松弛、毛色灰暗粗糙、經(jīng)常脫毛炸毛、經(jīng)常扎堆嗜睡、活動量明顯減少等一般行為學(xué)狀況。從第7天開始,衰老模型組小鼠體質(zhì)量低于正常組,呈顯著性差異(P<0.05),并且差異隨時間延長呈逐漸增大的趨勢。整個實驗期間,陽性對照組(VE)和高劑量組(CBF-H)小鼠體質(zhì)量與正常組之間無顯著差異(P>0.05),同時衰老小鼠在精神狀況、行動、皮膚及毛發(fā)等狀態(tài)方面均得到一定改善。這說明CBF對小鼠生長發(fā)育無不良影響且可改善衰老小鼠的行為狀況,具有抗衰老作用[28]。

    2.4 CBF對衰老小鼠肝臟病理學(xué)形態(tài)變化的影響

    圖7 CBF對衰老小鼠肝組織形態(tài)學(xué)的影響(HE染色,×200)Fig. 7 Effect of CBF on liver tissues of aging mice observed by HE staining (× 200)

    大量研究表明,許多天然成分的用藥處理能在D-半乳糖誘導(dǎo)的動物衰老模型中發(fā)揮有效的保肝作用[29-30]。如圖7所示,正常組小鼠肝組織顯示出正常的結(jié)構(gòu)和明顯的肝細胞邊界,沒有充血現(xiàn)象。與正常組小鼠相比,衰老模型組小鼠肝組織切片顯示出明顯的損傷,表現(xiàn)出幾種類型的病理損傷,如細胞間隙增大(長箭頭)和氣球樣變性(短箭頭)。此外,肝細胞還觀察到其他損傷,如局灶性壞死,纖維化,淋巴細胞浸潤等。CBF的灌胃給藥有效地改善了D-半乳糖引起的肝臟異常變化。在VE組和低劑CBF-L組中,可觀察到肝臟細微充血,氣球樣變性和纖維化的改善;CBF-H組的改善效果更顯著,小鼠肝臟的組織病理學(xué)形態(tài)與正常組沒有明顯差異。結(jié)果表明,CBF對D-半乳糖引起的衰老小鼠肝損傷有一定抑制作用。

    2.5 CBF對衰老小鼠肝臟SIRT1、p53蛋白表達的影響

    大量研究表明,SIRT1與p53基因參與衰老過程的調(diào)節(jié)[15-16]。如圖8A所示,衰老模型組小鼠肝組織中SIRT1蛋白表達量顯著低于正常組(P<0.05),降低了57.75%。與衰老組相比,VE及CBF高低劑量給藥處理均能顯著地提高衰老小鼠肝組織SIRT1蛋白表達(P<0.05),VE、CBF-L和CBF-H組分別提高了106.99%、160.45%和279.02%。如圖8B所示,衰老模型組小鼠肝組織中p53蛋白表達量顯著高于正常組(P<0.05),提高了390.13%。與衰老組相比,除CBF-L組降低效果不顯著外,VE及CBF-H能顯著降低衰老小鼠肝組織p53蛋白表達(P<0.05),VE、CBF-L和CBF-H組分別降低了23.22%、12.25%和30.90%。結(jié)果表明,CBF抑制衰老作用可能與激活SIRT1/p53信號通路有關(guān)。

    圖8 CBF對衰老小鼠肝組織中SIRT1、p53蛋白表達的影響Fig. 8 Effect of CBF on protein expression levels of SIRT1 and p53 in liver tissues of aging mice

    3 結(jié) 論

    本實驗以昆侖胎菊為原料,采用水溶劑提取法對其水溶性總黃酮進行提取并通過響應(yīng)面法優(yōu)化提取工藝,即水提時間15 min、水提溫度96 ℃、液料比71∶1(mL/g),在此最優(yōu)條件下進行驗證得到提取液中的總黃酮提取量可達到145.45 mg/g,與理論預(yù)測值的相對誤差僅為1.68%,表明該回歸模型合理可靠,優(yōu)化得到的提取工藝條件實際有效。

    本實驗同時研究CBF對D-半乳糖致衰老小鼠的抗衰老作用及其對衰老小鼠肝組織中SIRT1、p53蛋白表達的影響。造模過程觀測各組小鼠體質(zhì)量變化和一般行為學(xué)狀態(tài)表明,CBF對小鼠生長發(fā)育無不良影響且可改善衰老小鼠的行為狀況;各組小鼠肝組織病理學(xué)形態(tài)觀測表明,VE和CBF能顯著改善D-半乳糖引起的肝組織異常變化,特別是CBF-H組小鼠肝組織細胞結(jié)構(gòu)完整,幾乎沒有充血現(xiàn)象,與正常組小鼠肝組織細胞基本一致;Western blot法分析各組小鼠肝組織SIRT1、p53蛋白表達情況表明,CBF能顯著提升衰老小鼠肝組織中SIRT1蛋白表達(P<0.05),有效抑制D-半乳糖引起的p53過量表達(P<0.05)。以上結(jié)果說明CBF具有良好的抗衰老作用,其作用機理可能與激活SIRT/p53信號通路有關(guān)。

    本實驗以響應(yīng)面法優(yōu)化確定CBF的提取工藝,并初步探討其抗衰老作用機制,為昆侖胎菊實際應(yīng)用及食藥作用的進一步研究提供理論基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    半乳糖昆侖液料
    《昆侖之境》
    我在南昌 你在哪
    心聲歌刊(2022年3期)2022-06-06 06:31:42
    跨越昆侖
    昆侖
    新型多功能飲品復(fù)合調(diào)配分離瓶的研發(fā)
    科技視界(2018年22期)2018-10-08 01:41:38
    澤蘭多糖對D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用
    中成藥(2018年8期)2018-08-29 01:28:24
    黃芩-黃連藥對防治D-半乳糖癡呆小鼠的作用機制
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:11
    半乳糖凝集素-3與心力衰竭相關(guān)性
    半乳糖凝集素-3在心力衰竭中的研究進展
    混砂機液料流量的精確控制
    久久久色成人| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产成人影院久久av| 嫩草影院入口| 日韩成人av中文字幕在线观看 | 日韩亚洲欧美综合| 日本黄色片子视频| 久久人妻av系列| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲国产精品成人久久小说 | 人妻少妇偷人精品九色| 嫩草影院精品99| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 在线观看一区二区三区| 国产一区二区激情短视频| 日韩强制内射视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 最新在线观看一区二区三区| 国产片特级美女逼逼视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 丰满的人妻完整版| 欧美又色又爽又黄视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日韩中字成人| 国产精品免费一区二区三区在线| 最近2019中文字幕mv第一页| 久久中文看片网| av在线观看视频网站免费| 国产男人的电影天堂91| 日韩精品有码人妻一区| 久久久久久久久大av| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产精品久久久久久久电影| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 国产男靠女视频免费网站| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产麻豆成人av免费视频| 国产亚洲欧美98| 干丝袜人妻中文字幕| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 如何舔出高潮| 国产 一区 欧美 日韩| 观看免费一级毛片| 国产大屁股一区二区在线视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 99热全是精品| 国产v大片淫在线免费观看| 国产精品野战在线观看| 午夜视频国产福利| 免费人成在线观看视频色| 插阴视频在线观看视频| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲人与动物交配视频| 国产男人的电影天堂91| 国产精品爽爽va在线观看网站| 久久精品国产清高在天天线| 色综合亚洲欧美另类图片| a级毛片a级免费在线| 日韩av在线大香蕉| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产v大片淫在线免费观看| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲中文日韩欧美视频| av福利片在线观看| 99久久精品热视频| 国产人妻一区二区三区在| 欧美潮喷喷水| 亚洲精品一区av在线观看| 我要看日韩黄色一级片| 成年免费大片在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 99久久精品热视频| 最近手机中文字幕大全| 在线国产一区二区在线| 精华霜和精华液先用哪个| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产精品一二三区在线看| 国产精品亚洲美女久久久| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 久久久久久九九精品二区国产| 国产美女午夜福利| 亚洲人成网站高清观看| ponron亚洲| 97在线视频观看| 少妇人妻精品综合一区二区 | 欧美日本视频| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 免费人成视频x8x8入口观看| 久久精品综合一区二区三区| 日韩成人伦理影院| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久久精品大字幕| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 18+在线观看网站| 久久久久国产网址| 国产高清视频在线播放一区| 日韩中字成人| 国模一区二区三区四区视频| 又爽又黄无遮挡网站| 午夜视频国产福利| 在线播放无遮挡| 久久久久久久久大av| 91av网一区二区| www.色视频.com| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产精品一及| 舔av片在线| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产精品电影一区二区三区| 一区二区三区高清视频在线| av在线播放精品| 九九爱精品视频在线观看| 日本成人三级电影网站| 丰满乱子伦码专区| 最新在线观看一区二区三区| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲av免费在线观看| 亚洲高清免费不卡视频| 激情 狠狠 欧美| 日本黄大片高清| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 免费av不卡在线播放| 熟女电影av网| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产精品一及| 可以在线观看的亚洲视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 成人三级黄色视频| 最近手机中文字幕大全| 看黄色毛片网站| 亚洲自拍偷在线| 欧美成人a在线观看| 日本一本二区三区精品| 国产一区二区三区av在线 | 性色avwww在线观看| 国产成人a区在线观看| 波多野结衣高清无吗| 日韩成人av中文字幕在线观看 | 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲欧美清纯卡通| 日韩成人伦理影院| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲av熟女| 一级av片app| 特级一级黄色大片| 国产三级在线视频| 久久久久久久午夜电影| 久久久色成人| 亚洲三级黄色毛片| 日韩一本色道免费dvd| 哪里可以看免费的av片| 久久久国产成人免费| 精品久久久久久久久久免费视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 麻豆av噜噜一区二区三区| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 久久这里只有精品中国| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲欧美精品综合久久99| 欧美高清成人免费视频www| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久久午夜欧美精品| 日韩精品有码人妻一区| 有码 亚洲区| 三级毛片av免费| 国内精品久久久久精免费| 久久久久久久久久成人| 亚洲真实伦在线观看| 免费大片18禁| 少妇人妻精品综合一区二区 | 午夜福利18| 久久精品综合一区二区三区| 麻豆国产av国片精品| 日本一本二区三区精品| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲av.av天堂| 岛国在线免费视频观看| 国产日本99.免费观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 少妇熟女aⅴ在线视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 偷拍熟女少妇极品色| 男人和女人高潮做爰伦理| 欧美一级a爱片免费观看看| 身体一侧抽搐| 免费高清视频大片| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 在线观看午夜福利视频| 国产色爽女视频免费观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 亚洲av美国av| 欧美成人a在线观看| 久久午夜福利片| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 看免费成人av毛片| 小说图片视频综合网站| 少妇丰满av| 日本爱情动作片www.在线观看 | 日韩欧美一区二区三区在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 国产一区二区激情短视频| av视频在线观看入口| 最近在线观看免费完整版| 亚洲久久久久久中文字幕| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产成人精品久久久久久| 久久久成人免费电影| 亚洲精品影视一区二区三区av| 最新在线观看一区二区三区| 天天一区二区日本电影三级| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 最近在线观看免费完整版| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产伦在线观看视频一区| 精华霜和精华液先用哪个| 波多野结衣高清作品| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 久久亚洲国产成人精品v| 精华霜和精华液先用哪个| 免费人成视频x8x8入口观看| av黄色大香蕉| 日本黄大片高清| 亚洲自偷自拍三级| 久久午夜亚洲精品久久| 青春草视频在线免费观看| 最好的美女福利视频网| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲精品粉嫩美女一区| 日本欧美国产在线视频| 在线播放国产精品三级| 亚洲av二区三区四区| 五月玫瑰六月丁香| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 免费电影在线观看免费观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 日韩精品青青久久久久久| 最近中文字幕高清免费大全6| av在线老鸭窝| 久久99热这里只有精品18| 国产中年淑女户外野战色| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 精品久久久久久成人av| 久久久久久九九精品二区国产| 日本爱情动作片www.在线观看 | 亚洲国产欧洲综合997久久,| 内地一区二区视频在线| 成人三级黄色视频| 久久精品夜色国产| 人妻夜夜爽99麻豆av| av视频在线观看入口| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 久久韩国三级中文字幕| 波多野结衣巨乳人妻| 色综合亚洲欧美另类图片| 在线看三级毛片| 国产一级毛片七仙女欲春2| 69人妻影院| 国产伦精品一区二区三区四那| 成人三级黄色视频| 最近2019中文字幕mv第一页| 永久网站在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 啦啦啦韩国在线观看视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 欧美中文日本在线观看视频| 日日啪夜夜撸| 国产人妻一区二区三区在| 国产黄片美女视频| 综合色丁香网| 91狼人影院| 国产精品一区二区三区四区久久| 久久久久性生活片| 免费在线观看影片大全网站| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲最大成人中文| 色综合站精品国产| 啦啦啦啦在线视频资源| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 1000部很黄的大片| 一级毛片电影观看 | 天堂av国产一区二区熟女人妻| 女同久久另类99精品国产91| 国产私拍福利视频在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 观看免费一级毛片| 嫩草影视91久久| 毛片一级片免费看久久久久| 观看免费一级毛片| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 日韩 亚洲 欧美在线| 99久久九九国产精品国产免费| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产精品人妻久久久影院| 99久国产av精品国产电影| 国产精品人妻久久久久久| 午夜a级毛片| 午夜免费激情av| 观看免费一级毛片| 国产乱人视频| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 成熟少妇高潮喷水视频| 国内精品美女久久久久久| 变态另类丝袜制服| 午夜福利视频1000在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 婷婷精品国产亚洲av| 五月伊人婷婷丁香| 国产精品女同一区二区软件| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产精品人妻久久久久久| 欧美日韩精品成人综合77777| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲不卡免费看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 一进一出好大好爽视频| 免费观看的影片在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 成人永久免费在线观看视频| 国产成人a区在线观看| 一区二区三区高清视频在线| 在线观看美女被高潮喷水网站| 禁无遮挡网站| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 亚洲精品国产成人久久av| 国产69精品久久久久777片| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 又黄又爽又免费观看的视频| 香蕉av资源在线| 国产麻豆成人av免费视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| 成人国产麻豆网| 男人和女人高潮做爰伦理| av在线亚洲专区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 日韩欧美精品免费久久| 18+在线观看网站| avwww免费| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 日韩一区二区视频免费看| 日韩欧美精品v在线| 久久久久九九精品影院| 欧美高清成人免费视频www| 3wmmmm亚洲av在线观看| 春色校园在线视频观看| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 色播亚洲综合网| 天堂网av新在线| 美女免费视频网站| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲无线观看免费| 日日撸夜夜添| 欧美3d第一页| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 99久久精品一区二区三区| 搡老岳熟女国产| 精品欧美国产一区二区三| 免费看光身美女| a级毛片a级免费在线| 亚洲天堂国产精品一区在线| 欧美bdsm另类| 亚洲成a人片在线一区二区| 日本黄大片高清| 嫩草影院新地址| 99久久精品一区二区三区| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 日本爱情动作片www.在线观看 | 国产精品福利在线免费观看| 日本免费a在线| 国产综合懂色| 国产免费一级a男人的天堂| 岛国在线免费视频观看| 国产伦精品一区二区三区四那| 久久人人精品亚洲av| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲国产精品合色在线| 一级毛片电影观看 | 国产成人91sexporn| 人妻久久中文字幕网| 3wmmmm亚洲av在线观看| 久久久久久久久久久丰满| 国产成人91sexporn| 国产又黄又爽又无遮挡在线| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲人成网站在线观看播放| 天美传媒精品一区二区| 大香蕉久久网| 性色avwww在线观看| av.在线天堂| 国产欧美日韩一区二区精品| 神马国产精品三级电影在线观看| 少妇熟女欧美另类| 成人三级黄色视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲自拍偷在线| 免费看av在线观看网站| 久久精品国产自在天天线| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 99热网站在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产精品,欧美在线| 欧美一级a爱片免费观看看| 精品久久国产蜜桃| 国产精品人妻久久久久久| 中国国产av一级| 亚洲中文日韩欧美视频| 黄色视频,在线免费观看| 色5月婷婷丁香| 日本精品一区二区三区蜜桃| 极品教师在线视频| 国产精品电影一区二区三区| 白带黄色成豆腐渣| 少妇丰满av| 99riav亚洲国产免费| 亚洲成av人片在线播放无| 欧美精品国产亚洲| 国产91av在线免费观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 综合色丁香网| 美女被艹到高潮喷水动态| 久久中文看片网| 99热这里只有精品一区| av天堂在线播放| 久久九九热精品免费| 成人亚洲欧美一区二区av| 男人的好看免费观看在线视频| 在线观看66精品国产| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 一本久久中文字幕| 老熟妇仑乱视频hdxx| 在线看三级毛片| 久久精品国产自在天天线| 在线播放国产精品三级| 欧美精品国产亚洲| 欧美高清成人免费视频www| 一级毛片久久久久久久久女| 又黄又爽又免费观看的视频| 精品久久久久久久末码| 永久网站在线| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 22中文网久久字幕| 国产视频内射| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 97碰自拍视频| 日本爱情动作片www.在线观看 | 午夜老司机福利剧场| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 精品无人区乱码1区二区| av国产免费在线观看| 亚洲久久久久久中文字幕| 99国产极品粉嫩在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 22中文网久久字幕| 国产人妻一区二区三区在| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲无线观看免费| 丰满人妻一区二区三区视频av| 精品无人区乱码1区二区| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲高清免费不卡视频| 少妇熟女aⅴ在线视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久久久久久久大av| 性欧美人与动物交配| 欧美最新免费一区二区三区| 日韩av在线大香蕉| 看免费成人av毛片| 午夜免费激情av| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲av不卡在线观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产成人a区在线观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产成人freesex在线 | 亚洲美女搞黄在线观看 | 国产精品人妻久久久久久| 久久这里只有精品中国| 秋霞在线观看毛片| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲高清免费不卡视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| or卡值多少钱| 99久久成人亚洲精品观看| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 中出人妻视频一区二区| 看非洲黑人一级黄片| 校园春色视频在线观看| 国产真实伦视频高清在线观看| 精品日产1卡2卡| 久久这里只有精品中国| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 免费大片18禁| 国产高清不卡午夜福利| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 日韩精品有码人妻一区| 国产av麻豆久久久久久久| 免费大片18禁| av.在线天堂| 欧美3d第一页| 亚洲自偷自拍三级| 国产免费男女视频| 99久久精品国产国产毛片| 欧美又色又爽又黄视频| 国产乱人偷精品视频| a级毛片a级免费在线| 三级经典国产精品| av女优亚洲男人天堂| 一级a爱片免费观看的视频| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲内射少妇av| 黄色配什么色好看| 99在线视频只有这里精品首页| 一区二区三区高清视频在线| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲人成网站在线观看播放| 精品久久久久久久末码| 欧美又色又爽又黄视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 长腿黑丝高跟| 亚洲国产精品合色在线| 简卡轻食公司| 久久亚洲精品不卡| 久久久欧美国产精品| 一区二区三区免费毛片| 久久久午夜欧美精品| 在线播放国产精品三级| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲国产精品成人久久小说 | a级毛片a级免费在线| 在线观看66精品国产| 秋霞在线观看毛片| 我的女老师完整版在线观看| 伦精品一区二区三区| 亚洲四区av| 久久国产乱子免费精品| 午夜精品一区二区三区免费看| 听说在线观看完整版免费高清| 成年版毛片免费区| 51国产日韩欧美| 日韩制服骚丝袜av| 中文字幕av在线有码专区| 免费搜索国产男女视频| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产av一区在线观看免费| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 午夜激情欧美在线| 91麻豆精品激情在线观看国产| a级一级毛片免费在线观看| 欧美成人a在线观看| av在线观看视频网站免费| 国产精品一区二区免费欧美| 一夜夜www| 成人毛片a级毛片在线播放| 欧美高清性xxxxhd video| 国产精品爽爽va在线观看网站| 三级经典国产精品| aaaaa片日本免费| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 久久久久久久久中文| 六月丁香七月| 日本五十路高清| 十八禁国产超污无遮挡网站| 综合色丁香网| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产乱人偷精品视频| 亚洲av一区综合| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲美女搞黄在线观看 | 久久久久国产网址| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 久久人人精品亚洲av| 中文字幕久久专区| 夜夜爽天天搞| 最好的美女福利视频网| 亚洲人成网站高清观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产精品久久久久久久电影| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲av成人av| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国内精品久久久久精免费| av视频在线观看入口| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲第一电影网av| 亚洲性夜色夜夜综合| 国内精品美女久久久久久| 久久精品国产亚洲av天美|