血紅蛋白電泳聯(lián)合地中海貧血基因檢測在地中海貧血早期診斷中的價值

王先玉 鄒愛軍

地中海貧血是一組由珠蛋白基因表達(dá)障礙導(dǎo)致肽鏈合成受限或完全抑制引起的常染色體不完全顯性遺傳性溶血性疾病，具有分布范圍廣、發(fā)病率高、危害嚴(yán)重等特點，越來越受到臨床的重視［1-2］。迄今為止，臨床尚無有效方法治療地中海貧血，尤其是重型患兒，要靠規(guī)范化終身輸血聯(lián)合祛鐵治療維持生命，不僅造成醫(yī)療衛(wèi)生資源的巨大浪費，終身輸血還可能導(dǎo)致患兒出現(xiàn)鐵超載等相關(guān)并發(fā)癥，生存質(zhì)量降低［3-4］。因此，做好地中海貧血的篩查和早期診斷對阻止重型患兒的出生具有重要意義。為此，本研究分析血紅蛋白（hemoglobin，Hb）電泳聯(lián)合地中海貧血基因檢測對地中海貧血早期診斷的應(yīng)用價值，旨在為該病的防治提供依據(jù)，現(xiàn)報告如下。

1 資料和方法

1.1 研究對象及分組 選取2017年1月—2019年3月本院收治的地中海貧血的兒童作為地中海貧血組，另選同期參加體檢的健康兒童作為健康對照組。排除其他類型溶血性貧血（如小細(xì)胞低色素性貧血、自身免疫性溶血性貧血、遺傳性球形細(xì)胞增多癥、鐮狀細(xì)胞貧血等），近期接受輸血治療以及合并其他系統(tǒng)疾病者。本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，對患兒所采取的檢測方法得到過患兒監(jiān)護(hù)人的知情同意。

1.2 檢測方法 兩組受檢者均進(jìn)行Hb電泳診斷，地中海貧血組同時進(jìn)行地中海貧血基因檢測。

1.2.1 Hb電泳 采集受檢者的空腹靜脈血5 mL，乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）抗凝后以5 000 r/min的速度離心5 min（離心半徑13.5 cm），采用10倍體積0.9%氯化鈉注射液洗滌紅細(xì)胞3次去血漿；取10 μL紅細(xì)胞加入130 μL溶血液中震蕩10 s混勻，室溫培育5 min。采用全自動Hb電泳儀、掃描儀和分析系統(tǒng)檢測Hb指標(biāo)（包括HbA、HbA2和HbF）并打印圖譜。正常參考值：HbA為97%～98%，HbA2為2.0%～3.5%，HbF為0%～1.0%，且無異常 Hb（如 HbH、HbBarts）。

1.2.2 基因檢測 取受檢者外周靜脈血3～5 mL，注入含EDTA抗凝的無菌離心管中，輕輕顛倒試管混勻幾次后密閉送檢。按照操作說明書用人體細(xì)胞DNA提取試劑盒提取血液樣本DNA，采用缺口-聚合酶鏈反應(yīng)（gap-polymerase chain reaction，Gap-PCR）技術(shù)檢測3種常見缺失型α地中海貧血基因，采用PCR-反向斑點雜交（PCR-reverse dot blot，PCR-RDB）基因芯片技術(shù)檢測17種常見β-地中海貧血基因突變位點。檢測嚴(yán)格按照α-地中海貧血和β地中海貧血基因診斷試劑盒說明書操作。

1.3 觀察指標(biāo) 記錄地中海貧血組以及健康對照組的HbA、HbA2和HbF濃度，統(tǒng)計單一Hb電泳或Hb電泳聯(lián)合地中海貧血基因檢測對不同地中海貧血類型的有效檢出情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用Excel 2003建立數(shù)據(jù)庫，整理數(shù)據(jù)錄入計算機。用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，檢驗標(biāo)準(zhǔn)α＝0.05。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以例（率）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 共納入205例受檢者。其中地中海貧血組兒童155例，男性96例，女性59例；年齡1個月～12歲，平均（2.94±1.89）歲；α-地中海貧血87例，β-地中海貧血68例。健康對照組兒童50例，男性32例，女性18例；年齡1個月～12歲，平均（3.06±1.93）歲。兩組性別、年齡等一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。

2.2 不同標(biāo)本Hb指標(biāo)的比較 健康對照組、α-地中海貧血組、β-地中海貧血組的HbA呈逐步降低趨勢，HbF呈逐步升高趨勢，各組之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）；與α-地中海貧血組比較，β-地中海貧血組患兒HbA明顯降低，HbA2和HbF明顯升高（均P＜0.05）。地中海貧血組患兒HbA、HbA2和HbF與健康對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。見表1。

表1 不同標(biāo)本中Hb指標(biāo)的比較（±s）

表1 不同標(biāo)本中Hb指標(biāo)的比較（±s）

注：與健康對照組比較，aP＜0.05；與α-地中海貧血組比較，bP＜0.05；

HbF（%）健康對照組 50 97.81±1.76 2.76±0.55 0.85±0.24 α-地中海貧血組 87 95.85±2.94 a1.65±0.61 a1.42±0.40 a β-地中海貧血組 68 94.35±2.45 ab4.03±1.09 ab2.69±1.38 ab組別 例數(shù)（例）HbA（%）HbA2（%）

2.3 不同檢測方法對地中海貧血檢出率比較 健康對照組兒童經(jīng)Hb電泳檢查均未發(fā)現(xiàn)異常。Hb電泳聯(lián)合地中海貧血基因檢測對α-地中海貧血和β-地中海貧血的檢出率以及總檢出率均明顯高于單一Hb電泳檢測（均P＜0.05）。見表2。

表2 不同檢測方法對α-地中海貧血組與β-地中海貧血組患兒的檢出率比較

3 討論

地中海貧血是一組單基因遺傳性疾病，根據(jù)珠蛋白基因缺失情況可分為α-地中海貧血、β-地中海貧血、γ-地中海貧血、δ-地中海貧血等類型，以前兩種最常見［5］。該病發(fā)病率高，危害嚴(yán)重，且尚無特效治療手段，中重型地中海貧血患者僅能通過輸血、祛鐵、藥物等維持生命，但預(yù)后不佳，易出現(xiàn)不良反應(yīng)和并發(fā)癥等，增加患兒的痛苦及家庭負(fù)擔(dān)［6］。由于地中海貧血具有遺傳性，因此做好早期篩查和診斷對減少缺陷患兒的出生有重要意義。

目前，我國臨床診斷地中海貧血主要依據(jù)臨床表現(xiàn)、實驗室檢查和基因診斷［7］。但地中海貧血的臨床表現(xiàn)多樣，輕者可無明顯癥狀，多體檢時發(fā)現(xiàn)；重者在出生數(shù)日內(nèi)即可出現(xiàn)貧血癥狀，表現(xiàn)為黃疸、肝脾腫大、頭大、眼距增寬等，并伴發(fā)育不良、殘疾，甚至死亡［8-9］。因此，僅通過單一方法進(jìn)行地中海貧血診斷存在明顯局限性。目前，Hb電泳以快速、簡便、敏感度和特異度高等優(yōu)點成為地中海貧血診斷的常用手段［10］。電泳測試能夠準(zhǔn)確定量檢測HbA、HbA2和HbF，從而將患者初步分類為α-地中海貧血和β-地中海貧血，還能檢測其他Hb指標(biāo)的異常，有助于臨床確診。但該方法的準(zhǔn)確性易受多種因素影響（如標(biāo)本處理、檢測時間、操作水平等），誤診、漏診率較高。基因檢測能更精準(zhǔn)地診斷地中海貧血，是診斷該病唯一的“金標(biāo)準(zhǔn)”［11］，隨著PCR技術(shù)的逐漸成熟，基因檢測可較為準(zhǔn)確地診斷相關(guān)基因的突變和缺失，無論在地中海貧血確診還是產(chǎn)前診斷方面，基因檢測均具有極高的應(yīng)用價值。

本研究將上述兩種檢測方法聯(lián)合用于地中海貧血的早期診斷，結(jié)果表明，地中海貧血組患兒HbA、HbA2和HbF與健康對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；其中HbA在健康對照組中最高，α-地中海貧血患兒次之，β-地中海貧血患兒最低；而HbA2在β-地中海貧血患兒中最高，健康對照組次之，α-地中海貧血患兒最低；HbF則在β-地中海貧血患兒中最高，α-地中海貧血患兒次之，健康對照組最低。提示Hb電泳檢測能夠?qū)Φ刂泻Ｘ氀M(jìn)行篩查，且在分型方面具有一定的應(yīng)用價值。本研究還顯示，Hb電泳聯(lián)合地中海貧血基因檢測對α-地中海貧血和β-地中海貧血的檢出率以及總檢出率分別為98.95%、92.65%和96.13%，均明顯高于單一Hb電泳檢測（分別為25.29%、22.06%和23.87%）。由此可見，Hb電泳聯(lián)合地中海貧血基因檢測對地中海貧血的檢出效果顯著，可作為早期診斷的有效指標(biāo)。

綜上所述，Hb電泳與地中海貧血基因檢測均是地中海貧血的常用診斷方法，前者操作方便、快捷，但漏診率較高，二者聯(lián)合檢測準(zhǔn)確率較高。但基因檢測相對復(fù)雜、成本高，在大樣本篩查中推廣難度大。因此，在臨床工作中應(yīng)結(jié)合醫(yī)院實際情況和患者需求等選擇合適的檢測手段，以節(jié)約醫(yī)療資源。