不同產(chǎn)地、炮制方法、采收時間的芍藥中有效成分含量差異研究進(jìn)展

浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 杭州 310053

白芍為毛莨科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗、柔肝止痛、平抑肝陽的效果。赤芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍Paeonia veitchii Lynch的干燥根，有清熱涼血、散瘀止痛的功效。白芍和赤芍含有多種相同的有效成分[1]，包括單萜苷類、沒食子?；咸烟呛头宇惖榷喾N化合物[2]。目前，檢測芍藥有效成分的方法有紫外指紋圖譜[3]、高效液相色譜[4]、超高效液相色譜[5-7]、核磁共振圖譜[8]等。僅有少數(shù)化合物被發(fā)現(xiàn)只在某種芍藥中含有，如白芍含有苯甲酰芍藥苷而赤芍不含有，乙酰芍藥苷則只在赤芍中含有[9]。白芍主產(chǎn)于浙江、安徽、四川、山東等地，赤芍主產(chǎn)于內(nèi)蒙古、河北、四川、遼寧、黑龍江等地，不同產(chǎn)地的芍藥品質(zhì)會有較大程度的差異。而不同的炮制方法也會導(dǎo)致芍藥中化學(xué)成分的種類和含量發(fā)生變化，如白芍經(jīng)麥麩炒過后與其生品進(jìn)行比較，多種化學(xué)成分的含量發(fā)生了變化[6]；酒炙也會改變芍藥中酚酸類化學(xué)成分的含量[10]。本文對不同產(chǎn)地、炮制方法、采收時間的芍藥中芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷等有效成分的含量差異進(jìn)行匯總和綜述，以期為芍藥的栽培、炮制、品質(zhì)評價等提供參考。

1 芍藥苷（paeoniflorin）

芍藥中含有多種單萜苷類，其中芍藥苷最具有代表性，因此被用來作為芍藥生藥質(zhì)量鑒定的標(biāo)記化合物[11]。中國藥典2015版規(guī)定芍藥苷在白芍藥材中的含量不得少于1.6%，在白芍飲片中不得少于1.2%，在赤芍藥材中不得少于1.8%，在赤芍飲片中不得少于1.5%[12]。

1.1 不同產(chǎn)地的影響 分析表1和表2的數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地的芍藥中芍藥苷的含量差異較大，其中大部分的芍藥生品中芍藥苷的含量符合中國藥典2015版的要求，同時飲片中也存在含量較低的問題。河北的野生芍藥中芍藥苷的含量明顯高于其他產(chǎn)地的芍藥，北京、安徽亳州等地的含量也較高。在芍藥飲片中芍藥苷的含量是來自浙江磐安、安徽亳州、河南等地的較高。這反映出不同的生長條件可以產(chǎn)生明顯的差異，不同的炮制方法也會影響芍藥中有效成分的含量[13]。來自同一產(chǎn)地的芍藥也有較大的差別，如同樣來自安徽的白芍生品，其芍藥苷含量低的只有9.7 mg·g-1，高的則達(dá)到 38.9mg·g-1，這可能與不同的土壤環(huán)境等因素有關(guān)。

1.2 不同炮制方法的影響 分析表3的數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，對比芍藥飲片和其他炮制方法的芍藥，經(jīng)過酒制和炒制的白芍中芍藥苷的含量比芍藥飲片中的含量更低（酒白芍較炒白芍的芍藥苷含量略高）。如要提取分離芍藥苷，不建議選用經(jīng)過酒制和炒制的白芍，因其經(jīng)過炮制，損失了約40%的芍藥苷[15]。在飲片中，顯然是經(jīng)過煎煮或隔水蒸這些簡單的炮制方法處理過的白芍含有更多芍藥苷。Kong Ming等[20]發(fā)現(xiàn)白芍中芍藥苷的含量在煎煮5分鐘后增加至56.0mg·g-1，30分鐘后減少至48.8mg·g-1，但仍比未煎煮的45.1mg·g-1高。推測是煎煮的過程影響了白芍化學(xué)成分的量和組成。這可能涉及兩個潛在的機(jī)制：首先，煎煮的過程促進(jìn)了極性化合物的溶解，而且一些天然的化學(xué)成分（尤其是苷類），由于一些復(fù)雜的機(jī)制，會發(fā)生結(jié)構(gòu)上的轉(zhuǎn)化，發(fā)生水解、氧化、還原等反應(yīng)形成二聚物。也有實驗證實，與未經(jīng)蒸制和煎煮的白芍相比，蒸制和煎煮處理所得的白芍中，芍藥苷含量均有所升高，證明蒸制和煎煮處理可以提高白芍的品質(zhì)[18]。這可能是因為蒸制和煎煮過程中白芍含有的化學(xué)成分存在著一定的轉(zhuǎn)化，如加熱可使異麥芽芍藥苷等成分轉(zhuǎn)化為芍藥苷等。有研究者采用Q-TOF-MS定性分析發(fā)現(xiàn)，白芍、赤芍的化學(xué)成分基本一致，均以單萜苷類、酚酸類和沒食子?；咸烟穷悶榇硇猿煞諿16]。最大的區(qū)別是由于白芍在加工過程中經(jīng)硫磺熏蒸，產(chǎn)生了單萜苷亞硫酸酯類，而赤芍未含有。Jida Zhang等[23]的研究表明，硫磺熏蒸可以促使芍藥苷轉(zhuǎn)變成芍藥苷的磺酸鹽，在硫磺熏蒸過的樣品中可檢測到五種單萜糖苷磺酸鹽衍生物（氧化芍藥苷磺酸鹽、芍藥苷磺酸鹽、牡丹皮苷E磺酸鹽、苯甲酰芍藥苷磺酸鹽、沒食子酰芍藥苷磺酸鹽）。從湖北、安徽等地的飲片中可以看出，在白芍中芍藥苷的含量明顯低于赤芍，這可能是因為白芍經(jīng)過硫磺熏蒸導(dǎo)致其芍藥苷類成分大量轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的芍藥苷亞硫酸酯類以及磺酸鹽衍生物。白芍硫磺熏蒸自古就有，在硫磺熏蒸小于26小時的白芍樣品中，芍藥苷的含量高于1.2%，這符合中國藥典規(guī)定，盡管這些樣品中芍藥苷磺酸鹽的含量已高達(dá)1.8%[17]。最近有研究發(fā)現(xiàn)在血漿、膽汁中存在芍藥苷磺酸鹽及其四種毒性尚未明確的代謝產(chǎn)物[24]，因此有必要對這些亞硫酸酯類和磺酸鹽類成分的生物活性展開進(jìn)一步的研究，這不僅有利于白芍的質(zhì)量控制，同時也有利于臨床用藥的安全性。

表1 不同產(chǎn)地的芍藥生品中芍藥苷的含量

表2 不同產(chǎn)地的芍藥飲片中芍藥苷的含量

表3 不同炮制方法的芍藥飲片中芍藥苷的含量

1.3 不同采收時間的影響 有研究者通過對比野生芍藥不同部位和不同采收期中芍藥苷的含量，發(fā)現(xiàn)芍藥苷在芍藥新鮮的葉和莖中就存在，在根部含量最高[19]。比較不同季節(jié)的檢測結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，春秋季芍藥苷的含量比夏季的高。野生芍藥根莖中芍藥苷的含量變化呈現(xiàn)先增加、后減少、再增加的趨勢。有研究表明[25]，芍藥根莖的產(chǎn)量有一個特殊的循環(huán)，在最初的3年，根生長得很慢。第4年是一個爆發(fā)生長的階段，之后一直是生長很緩慢。隨著第2次生長，木質(zhì)部的生長速度高于軟木和皮部，直到直徑達(dá)到1.0～1.7cm，相關(guān)的生長速度達(dá)到平衡。這可以解釋為什么含量首先減少（在木質(zhì)部生長期），然后增加（當(dāng)所有的組織生長速度開始變慢）。

2 芍藥內(nèi)酯苷（albiflorin）

2.1 不同產(chǎn)地的影響 芍藥內(nèi)酯苷是芍藥苷的同分異構(gòu)體[26]。從表4和表5可以看出，與芍藥苷一樣，芍藥內(nèi)酯苷的含量在不同產(chǎn)地的芍藥中有較大差異。經(jīng)過炮制的芍藥中芍藥內(nèi)酯苷的含量比生品芍藥中多，但不同于芍藥苷的是，野生的芍藥中芍藥內(nèi)酯苷的含量并不高。在安徽的芍藥生品中芍藥內(nèi)酯苷含量較高；對于芍藥飲片和其他炮制品，地域間的差異并不十分明顯，其中浙江、安徽的含量相對較高。與芍藥苷一樣，芍藥內(nèi)酯苷在同一產(chǎn)地的芍藥中差異也較大，如在浙江各地區(qū)，產(chǎn)自磐安的芍藥中芍藥內(nèi)酯苷的含量較高，而東陽、永康等地的含量則較低。

2.2 不同炮制方法的影響 從表6可以看出，KongMing等[20]測得芍藥內(nèi)酯苷的含量在煎煮前10分鐘呈現(xiàn)小幅度的上升，30分鐘后又下降至接近初始含量。有實驗結(jié)果顯示[18]，與未經(jīng)蒸制和煎煮的白芍加工品相比，蒸制和煎煮處理所得白芍加工品中，芍藥內(nèi)酯苷的含量有所升高，而在煎煮液中，芍藥內(nèi)酯苷的含量是生藥中的8.7倍[14]。由此可見，經(jīng)過短時間的煎煮，可以有效提高芍藥內(nèi)酯苷的含量，推測在這個過程中也存在著一定程度的轉(zhuǎn)化。而硫磺熏蒸對芍藥內(nèi)酯苷的影響并不像芍藥苷那么明顯，在熏蒸前后，其含量稍有下降。

表4 不同產(chǎn)地的芍藥生品中芍藥內(nèi)酯苷的含量

2.3 不同采收時間和不同部位的影響 簡在友等[19]分析了野生芍藥中有效成分在不同部位、采收時間及年限的變化規(guī)律，發(fā)現(xiàn)芍藥內(nèi)酯苷在根莖中有較高的含量，但在根中的含量遠(yuǎn)沒有芍藥苷含量高。而且相比其他季節(jié)，其含量在夏季較高。根據(jù)芍藥根長度和直徑的不同可將其分為不同的等級[25]，一等品長8cm，直徑大于1.7cm；二等品長6cm，直徑大于1.3cm；三等品長4cm，直徑大于0.8cm；四等品及之后的等級，長度和直徑依次下降。從一等到四等，芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷的含量下降，但是從六等到七等，含量升高，證明了最小直徑的根有最高的含量。有研究表明，白芍的木質(zhì)部和外表皮部含有相同的化學(xué)成分，芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷的平均含量在軟木和皮部高于韌皮部、木質(zhì)部維管束、木質(zhì)部射線，在七個等級里都是這樣，這與組織化學(xué)的研究結(jié)果一致（芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷主要分布在軟木和皮部）[27]。而直徑小于0.5cm的根，軟木和皮部占多數(shù)，因此它們含有這些小根的內(nèi)含物：最高含量的芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷。

表5 不同產(chǎn)地的芍藥飲片中芍藥內(nèi)酯苷的含量

3 其他成分

3.1 不同產(chǎn)地的影響 從表7和表8的數(shù)據(jù)可知，各化合物在不同產(chǎn)地芍藥中的分布各有不同。在生品中，來自河北的芍藥中兒茶素（catechin）和丹皮酚（paeonol）的含量高于安徽亳州，而沒食子酸（gallic acid）和苯甲酸（benzoic acid）的含量則是安徽亳州的芍藥較高。從不同產(chǎn)地的飲片來看，安徽亳州的芍藥除了丹皮酚的含量較低[17]，其他成分的含量均高于浙江等地[18]。同是產(chǎn)自安徽亳州的芍藥，其中各成分的含量也不相同。比較金林等[26]測得的苯甲酰芍藥苷（benzoylpaeoniflorin）和丹皮酚的含量可以發(fā)現(xiàn)，浙江的白芍飲片質(zhì)量最好，安徽的次之，山東的則較差。比較各成分的含量可以發(fā)現(xiàn)，五沒食子?；咸烟牵╬entagalloylglucose）的含量相對較高，丹皮酚的含量較低。

表6 不同炮制方法的芍藥飲片中芍藥內(nèi)酯苷的含量

表7 不同產(chǎn)地白芍生品中兒茶素等成分的含量（mg·g-1）

表8 不同產(chǎn)地白芍飲片中兒茶素等成分的含量（mg·g-1）

3.2 不同炮制方法的影響 何忠梅等[10]對酒芍藥水煎液中各色譜峰的峰面積與芍藥水煎液中對應(yīng)的色譜峰的峰面積進(jìn)行對比分析，發(fā)現(xiàn)除了芍藥苷的峰面積基本未變外(3.9%)，其余色譜峰的峰面積均有不同程度的減少，這說明酒芍藥水煎液中主要活性成分芍藥苷的含量并未產(chǎn)生大的變化，但其它酚酸類化學(xué)成分含量相對于芍藥水煎液均有不同程度的下降。尤其是兒茶素的含量下降尤為明顯，僅為酒炙前的37.2%，其它酚酸性成分下降至酒炙前的40.7%～87.4%不等。這可能是酒炙過程中經(jīng)過高溫炒制所致。隨著硫磺熏蒸的時間延長，氧化芍藥苷（oxypaeoniflorin）、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷和丹皮酚的含量降低，丹皮酚磺酸鹽明顯增加，沒食子酸、沒食子酸甲酯（methyl gallate）、兒茶素、五沒食子?；咸烟堑暮繘]有顯著變化[17]。苯甲酸和丹皮酚的含量分別降低了74.5%和51.9%。硫磺熏蒸66小時后，丹皮酚磺酸鹽的含量從0增加到47.7mg·g-1。證明硫磺熏蒸不僅可以改變單萜苷類的組成和含量，而且可以改變白芍其他生物活性組分的含量。許源等[18]用不同方法處理白芍，發(fā)現(xiàn)與生品相比，蒸制和煎煮處理所得白芍炮制品中，兒茶素、沒食子酸含量均有所升高，苯甲酰芍藥苷、氧化芍藥苷含量稍有升高但變化不大，苯甲酸含量有所下降。Ming Kong等[24]發(fā)現(xiàn)白芍的10種主要生物活性物質(zhì)隨著水煮時間的延長，也有著不同的變化。兒茶素、苯甲酸、五沒食子?；咸烟?、丹皮酚在30分鐘的煎煮過程中有不規(guī)則的波動。沒食子酸在30分鐘的水煮過程中，含量一直增加，從0.1mg·g-1到2.8mg·g-1。沒食子酸甲酯的含量一直在減少，從 1.9mg·g-1到 0.5mg·g-1。這是由于沒食子酸甲酯是沒食子酸通過甲基的酯化得到的，在水煮的條件下，沒食子酸甲酯通過酯水解得到?jīng)]食子酸。也有研究報道，與芍藥生品相比，炮制品中除了沒食子酸含量稍有下降，兒茶素、苯甲酸、丹皮酚的含量均有所升高[28]。以上各成分的含量變化文獻(xiàn)報道呈現(xiàn)不一致的情況，推測是炮制方法等條件不同導(dǎo)致的。

4 結(jié)論

不同產(chǎn)地的芍藥，其中的芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷含量差異明顯，即使來源于同一個產(chǎn)地，其含量也會有較大差異。不同炮制方法會導(dǎo)致芍藥中有效成分的含量和種類發(fā)生變化，同時也會在一定程度上影響芍藥的藥效。對比多種炮制方法可以發(fā)現(xiàn)，短時間的煎煮可以有效提高芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含量，而經(jīng)過硫磺熏蒸的白芍，芍藥苷含量大量減少，芍藥內(nèi)酯苷的含量也有所下降，酒制和麩炒也會對其品質(zhì)產(chǎn)生一定影響。根皮的存在則可對化學(xué)成分的轉(zhuǎn)化和流失起到一定的保護(hù)作用。由于多數(shù)文獻(xiàn)側(cè)重于比較芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含量，對兒茶素、沒食子酸等含量的研究相對較少，因此對這些成分的含量差異還有待進(jìn)一步研究。采收季節(jié)、根的直徑等條件的不同，均會影響芍藥的品質(zhì)，實際應(yīng)用過程中需根據(jù)不同的用途選擇合適的采收條件。