甲硝唑口頰片的釋放度測定及不同測定方法的結(jié)果比較

謝莉 張億 朱蓉 熊玲 陳紅

(成都市食品藥品檢驗研究院，成都 610045)

甲硝唑是臨床使用歷史較久的一種廣譜抗厭氧菌藥和抗滴蟲藥，其不同給藥途徑分別發(fā)揮著全身作用和局部作用。當其發(fā)揮全身作用時，由于較多副作用的產(chǎn)生，已逐漸被替硝唑、奧硝唑等硝基咪唑類衍生物替代。當其制成栓劑、凝膠等劑型局部給藥時，發(fā)揮著良好的療效，并且副作用少。甲硝唑口頰片可用于牙齦炎、牙周炎、冠周炎及口腔潰瘍，一般將其置于牙齦和齦頰溝間含服，用于口腔潰瘍時黏貼于黏膜患處。目前該品種有兩個生產(chǎn)廠家。中國藥典以及其他國家藥典均未收載該品種。兩廠家樣品的執(zhí)行標準分別為YBH03122014[1]以及WS1-(X-523)-2003Z[2]，兩標準進行的釋放度檢查采用的裝置均為小杯法，溶出介質(zhì)均為0.1mol/L的鹽酸溶液，測定方法分別為HPLC法和UV吸收系數(shù)法。但由于唾液的pH值為6.0～7.5[3]，原釋放度檢查方法采用的溶出介質(zhì)酸度太高，不能模擬藥物溶出的真實生理環(huán)境，介質(zhì)選擇不合理。且美國FDA溶出方法數(shù)據(jù)庫中公布的口腔用藥膜或藥物貼片的溶出介質(zhì)多為磷酸鹽緩沖液[4]，本研究采用磷酸鹽緩沖液(pH6.6)作為溶出介質(zhì)。

小杯法是我國特有的溶出度檢查方法，最早收載于1995年版中國藥典。該方法被收載的主要原因是20多年前，儀器的檢測靈敏度低，小劑量固體制劑在籃法和槳法裝置下的樣品溶液濃度低于儀器檢測靈敏度，小杯法通過使用較少的溶出介質(zhì)，提高了樣品溶液的濃度，使得小劑量固體制劑的溶出度有法可控，得以全面控制該類固體制劑的質(zhì)量。而現(xiàn)階段儀器的檢測靈敏度普遍較高，用槳法檢查小劑量固體制劑也能找到與之相適的高靈敏度檢測方式，保留小杯法的現(xiàn)實意義值得重新考慮。

流通池法是一種較新的釋放度檢查方法，有閉環(huán)和開環(huán)兩種系統(tǒng)，以滿足不同藥品的需求。其中，閉環(huán)式流通池法將樣品置于樣品架或者玻璃珠上，在恒流泵的作用下，溶出介質(zhì)經(jīng)過恒溫裝置由流通池下端進入，通過樣品表面后，經(jīng)過流通池上端的過濾裝置流出，回到介質(zhì)瓶，溶出介質(zhì)循環(huán)使用，樣品溶液從介質(zhì)瓶進行采集。開環(huán)式流通池法為新鮮介質(zhì)經(jīng)過樣品的溶出介質(zhì)后不回到介質(zhì)瓶，濾過后進入樣品收集器。流通池法的流體力學與傳統(tǒng)溶出度檢查法完全不同，且可以用于微量藥物制劑、藥物支架、緩控釋制劑、透皮貼劑、速釋制劑等，能解決制劑漂浮的問題，并且在體內(nèi)外相關(guān)性上有更好的發(fā)展空間[5]。目前，流通池法被國際廣泛認可，被收載于美國藥典(USP)、歐洲藥典(EP)、英國藥典(BP)及日本藥局方(JP)，中國藥典尚未收載該方法，由于儀器昂貴，目前國內(nèi)針對該方法的研究報道也較少[6-11]，國外使用該方法進行溶出度測定的品種也極少。

考慮到小杯法被收入中國藥典的歷史局限性，且其他國家藥典均未收載小杯法，為與國際接軌，本研究采用USP四法流通池法和中國藥典一法籃法分別對甲硝唑口頰片釋放度進行檢查，并與原標準的小杯法進行比較。

1 儀器與試藥

CE7 smart溶出度儀(瑞士Sotax公司)，SotaxAT7 smart溶出度儀(瑞士Sotax公司)，Sotax AT xtend溶出度儀(瑞士Sotax公司)，MPS溶媒制備儀(瑞士Sotax公司)，1260高效液相色譜儀(美國Aglilent公司)，BP211D 電子天平(Sartorius公司)，Whatman GF/F玻璃纖維濾膜，Whatman GF/D玻璃纖維濾膜。

甲硝唑?qū)φ掌?批號：100191-201507，中國食品藥品檢定研究院)，甲硝唑口腔黏貼片(規(guī)格：3mg；A廠，批號170103；B廠，批號：170904)，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 釋放度試驗方法

2.1.1 流通池法

采用USP溶出度四法流通池法的閉合系統(tǒng)裝置，將本品放入片夾，置于錐形部裝滿玻璃珠(直徑1mm)的流通池內(nèi)，以磷酸鹽緩沖液(pH6.6)100mL為溶出介質(zhì)，溫度為37℃，流速為4mL/min，于20、50、90、120、180、240和300min取已在線濾過的樣品溶液1mL，作為供試品溶液。

2.1.2 籃法

采用中國藥典溶出度一法籃法裝置，以磷酸鹽緩沖液(pH6.6)500mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50r/min，溫度為37℃，于20、50、90、120、180、240和300min取已在線濾過的樣品溶液1mL，作為供試品溶液。

2.2 HPLC方法

以SPOLAR C18(150mm×4.6mm, 5μm)為色譜柱；以甲醇-水(20:80)為流動相，流速為1.0mL/min，柱溫為35℃；檢測波長為320nm。取甲硝唑?qū)φ掌愤m量，精密稱定，加溶出介質(zhì)溶解并定量稀釋制成分別約含0.006、0.015和0.03mg/mL的溶液，作為相應方法的對照品溶液。分別精密量取供試品溶液和濃度對照品溶液各20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算。

2.3 方法學驗證

甲硝唑在3.012～50.20μg/mL范圍內(nèi)線性良好(r=0.9999)，線性方程為：Y=62.99X-5.561。分別取濃度為6.024、15.06和30.12μg/mL的對照品溶液，分別重復測定6次，RSD均小于0.1%。精密量取各方法下300min時間點供試品溶液適量，分別加入相當于甲硝唑已知濃度30%、50%和100%的對照品溶液依法進行測定，結(jié)果回收率為99.0%～99.8%。供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 釋放度結(jié)果

采用所建流通池法和籃法與YBH03122014中采用的小杯法共3種方法分別對兩個廠家的甲硝唑口頰片的釋放度進行測定，計算累積釋放百分率，結(jié)果見表1。

2.5 釋放度數(shù)據(jù)分析

采用相似因子法對相同裝置不同廠家的f2因子進行比較，結(jié)果采用新建立的流通池法和籃法測得兩廠家樣品的釋放曲線的f2因子分別為27和29，原標準采用的小杯法測得兩廠家的釋放曲線的f2因子為45，在3種方法下，兩廠家的樣品均不相似。

采用多個模型對數(shù)據(jù)進行擬合，最終采用擬合效果最優(yōu)的Weibull模型(r＞0.999)得到溶出參數(shù)，比較達到重要溶出率所需要的時間T25、T50、Td和T80(藥物溶出25%、50%、63.2%和80%所需的時間)，結(jié)果見表2。在不同方法下，分別將兩廠家樣品的各特征溶出參數(shù)進行統(tǒng)計學分析，結(jié)果A廠樣品在籃法和流通池法下所得的溶出參數(shù)無顯著性差異(P＞0.05)，B廠樣品在3種方法下，兩兩方法間的溶出參數(shù)均存在顯著性差異(P＜0.01)。

3 討論

3.1 釋放度條件優(yōu)化

本研究對藥品的放置方式進行考察，分別采用平放在玻璃珠面上和使用片夾兩種方式進行試驗，結(jié)果兩種放置方式結(jié)果無差異。在進行B廠樣品的研究過程中，曾采用孔徑為0.7μm的Whatman GF/F玻璃纖維濾膜置于在線的過濾器，結(jié)果因為過濾器處壓力過高，流通池法有明顯漏液，籃法第一個時間點未取到供試品溶液。換成2.7μm的Whatman GF/D玻璃纖維濾膜，兩問題均得到解決。A廠樣品因其未崩散，未發(fā)現(xiàn)上述問題。

3.2 釋藥狀態(tài)與處方分析

本研究在試驗過程中發(fā)現(xiàn)，A廠樣品在3種裝置下，藥片均漸漸溶脹，釋放試驗結(jié)束時藥片呈半透明的溶脹狀態(tài)；B廠樣品在各裝置下，藥片約1h全部崩解。將兩廠家樣品的輔料進行對比，A廠使用的輔料中有羥丙甲纖維素，其在冷水中溶脹成澄清或微渾濁的膠體溶液，該輔料的加入可能與該廠家樣品最終呈半透明的溶脹狀態(tài)有關(guān)。在3種不同釋放度檢查方法下，A廠樣品所得的到釋放數(shù)據(jù)極其相似，而B廠樣品所得數(shù)據(jù)則差異較大，這可能與兩廠家的處方不同有關(guān)，是否還與兩廠家的工藝有關(guān)，還需要進一步的研究。另外，甲硝唑口頰片治療口腔疾病發(fā)揮的是局部作用，如果藥品迅速崩解，其停留在口腔的時間將會縮短，不利于其局部作用的發(fā)揮，且筆者曾研究市售兩廠家的甲硝唑口腔黏貼片(因規(guī)格和名稱不同，處方差異大，未在本文中進行對比)，實驗結(jié)束仍保持半透明的溶脹狀態(tài)，建議B廠對其產(chǎn)品的處方和工藝進行優(yōu)化。

表1 兩廠家樣品不同溶出方法下的累積釋放百分率(%, n=6)Tab.1 Cumulative release percentages of samples from two manufacturers with different test methods (%, n=6)

表2 各廠家樣品不同方法的威布爾參數(shù)計算結(jié)果Tab.2 Weibull parameters of metronidazolebuccal tablets

3.3 本品種下流通池法與籃法比較

新建立的流通池法和籃法測得兩廠家樣品的釋放曲線的f2因子非常接近(分別為27和29，釋放曲線均不相似)，兩方法均可用于甲硝唑口頰片的釋放度檢查。釋放度實驗結(jié)束后，兩廠藥品呈現(xiàn)不同的狀態(tài)，A廠藥品不崩散，B廠藥品崩散，在籃法和流通池法下所得的釋放參數(shù)中，A廠藥品無顯著性差異，B廠藥品存在顯著性差異。由此可初步得出，籃法和流通池法均可用于A廠樣品的釋放度檢查，是否可適用于所有不崩散的藥品，還需要對不崩散的不同品種藥品進行進一步研究。由于流通池法溶出度儀的價格昂貴(是普通溶出儀的幾倍甚至10倍)，如果能得出對某一類制劑(如非崩散型制劑)進行釋放度檢查，流通池法與傳統(tǒng)方法(如籃法)能得出相似溶出參數(shù)的推論，可節(jié)約資源，降低廠家的生產(chǎn)成本。

3.4 關(guān)于甲硝唑口腔貼片的建議

中國藥典2015年版四部制劑通則中對口腔貼片的描述是黏貼于口腔，經(jīng)黏膜吸收后起局部或全身作用的片劑[12]。而我國批準的以甲硝唑為單一原料藥局部用于牙齦炎、牙周炎、冠周炎及口腔潰瘍的片劑通用名為甲硝唑口腔黏貼片(有甲、乙兩個公司藥品)和甲硝唑口頰片(有A、B兩個廠家藥品)。其中甲硝唑口腔黏貼片的藥品特征為規(guī)格5mg，藥片小而薄(片重約0.04g)，藥片釋放度實驗結(jié)束后不崩散，甲硝唑口頰片的藥品特征為規(guī)格3mg，藥片大而厚(片重約0.5g)，藥片釋放度實驗結(jié)束后A廠藥品不崩散，B廠藥品崩散。兩通用名下相應藥品的處方差異大，主要是輔料種類和用量差別大，釋放行為差異大(主要是甲硝唑口頰片兩廠家產(chǎn)品間的差異)，但二者均為甲硝唑口腔貼片，適應癥與用法均相同。建議相關(guān)部門規(guī)范該類藥品的通用名，建議統(tǒng)一為甲硝唑口腔貼片，與藥典制劑通則一致，有助于研究者對該類藥品的質(zhì)量標準進行優(yōu)化，同時節(jié)約了藥品流通及管理過程的資源。同時建議藥品的生產(chǎn)廠家及時對藥品的處方和工藝進行優(yōu)化，找出影響產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵參數(shù)，進行深入研究，提升自身藥品的質(zhì)量，確保藥品質(zhì)量的可靠性和穩(wěn)定性，以提升藥品質(zhì)量來增加產(chǎn)品的市場競爭力。