快速檢測法在蔬菜毒死蜱農(nóng)藥殘留去除研究中的應(yīng)用

李葉青 皮小弟 丘舒雅 陳美君 吳少平 凌小芳 鄧桂美 李琬瑜

摘要? ? 為研究日常生活中鹽水、果蔬洗滌劑水、碳酸氫鈉水溶液和淘米水清洗對蔬菜農(nóng)藥殘留去除的作用效果，模擬生菜毒死蜱農(nóng)藥殘留超標（抑制率為90%左右），采用農(nóng)殘快速檢測試劑盒配合農(nóng)殘快速檢測儀檢測不同方式清洗后毒死蜱的殘留量，在單因素研究的基礎(chǔ)上L9（34）正交優(yōu)化。結(jié)果表明，鹽水清洗方式的優(yōu)化結(jié)果為鹽水濃度3‰、30 ℃水溫浸泡15 min，毒死蜱去除率達78.0%±1.87%;洗滌劑水清洗方式的優(yōu)化結(jié)果為某超能洗滌劑水濃度5%、35 ℃水溫浸泡20 min，毒死蜱去除率達65.38%±2.12%;碳酸氫鈉水溶液清洗方式的優(yōu)化結(jié)果為碳酸氫鈉水溶液濃度7 g/100 mL、40 ℃水溫浸泡15 min，毒死蜱去除率達73.79%±2.63%;淘米水清洗方式的優(yōu)化結(jié)果為淘米水濃度80%、浸泡10 min、浸泡1次，毒死蜱去除率72.35%±2.66%。4種清洗方式都能將抑制率90%左右的毒死蜱超標生菜通過清洗達到合格，建議采用鹽水和淘米水清洗方式。

關(guān)鍵詞? ? 生菜;快速檢測;清洗方式;毒死蜱殘留;去除率

中圖分類號? ? TS207.5+3? ? ? ? 文獻標識碼? ? A? ? ? ? 文章編號? ?1007-5739（2019）09-0095-05

Abstract? ? In order to study the effect of saline water，fruit and vegetable detergent water，sodium bicarbonate solution and rice washing water on the removal of pesticide residues in vegetables in daily life，the residues of chlorpyrifos in lettuce were simulated to exceed the standard（inhibition rate was about 90%）.The residues of chlorpyrifos after different cleaning were detected by rapid detection kit of pesticide residues combined with rapid detection instrument of pesticide residues. Based on single factor study，L9（34）orthogonal experiment was conducted.The results showed that the optimum cleaning method of saline water was 3‰ salt content（m/V），soaked at 30 ℃ for 15 minutes，and the removal rate of chlorpyrifos was 78.0%±1.87%;the optimum cleaning method of detergent water was 5% super-energy detergent（m/V），soaked at 35 ℃ for 20 minutes，and the removal rate of chlorpyrifos was 65.38%±2.12%;the optimum cleaning method of sodium bicarbonate solution concentration was 7 g/100 mL，soaked at 40 ℃ for 15 minutes，and the removal rate of chlorpyrifos was 73.79%±2.63%;the optimum cleaning method of rice washing water was 80% rice washing water（V/V），soaked once for 10 minutes，and the removal rate of chlorpyrifos was 72.35%±2.66%.All the four cleaning methods can achieve the qualified rate of chlorpyrifos-exceeding lettuce with inhibition rate of about 90%.It is suggested that salt water and rice washing water can be used to clean the vegetables.

Key words? ? lettuce;rapid detection;cleaning method;chlorpyrifos residue;removal rate

毒死蜱（chlorpyrifos）又名氯蜱硫磷，化學品名O，O-二乙基-O-（3，5，6-三氯-2-吡啶基）硫代磷酸，是目前全世界使用最廣泛的有機磷酸酯殺蟲劑之一。有報道稱，因空心菜未用流水沖洗，僅簡單清洗，會引發(fā)由毒死蜱引起的食物中毒[1]。

農(nóng)業(yè)部第2032號公告[2]稱，自2013年12月9日起，停止受理毒死蜱在蔬菜上的登記申請，停止批準毒死蜱在蔬菜上的新增登記;自2014年12月31日起，撤銷毒死蜱在蔬菜上的登記，自2016年12月31日起，禁止毒死蜱在蔬菜上使用。李麗燕等[3]分析了欽州市2011—2017年隨機抽檢的2 968批次蔬菜樣品，毒死蜱檢出229批次，占總體的7.72%;超標41批次，占總體的1.38%。葉菜類蔬菜毒死蜱檢出率和超標率均最高，分別為9.97%、2.19%。自2016年底禁止在蔬菜上使用毒死蜱后，2017年檢出率同比減少僅0.05%，但超標率為2.07%。毒死蜱等農(nóng)藥在市售蔬菜尤其是葉類蔬菜中仍存在農(nóng)藥殘留超標問題，嚴重威脅人體健康。

鑒于蔬菜中農(nóng)藥殘留超標的存在，采用清洗法去除農(nóng)藥殘留的研究[4-17]陸續(xù)有報道，主要涉及清水、洗潔精水、洗滌劑水、小蘇打水、純堿水、淘米水、面粉水和鹽水等清洗方法。農(nóng)藥成分主要有毒死蜱、二嗪磷、樂果、殺撲磷、亞胺硫磷、甲基乙拌磷、對硫磷、苯硫磷、敵敵畏、百菌清和氧樂果等，研究過程中采用的農(nóng)藥殘留檢測方法主要是氣相色譜法、質(zhì)譜法等一些需要借助大型儀器、耗時長、成本高的檢測方法，清洗方式的深入研究較少。

相比之下，快檢技術(shù)具有高效、經(jīng)濟、操作便捷等優(yōu)點，在蔬菜農(nóng)藥殘留監(jiān)管中發(fā)揮著不可替代的作用[18]。本研究采用農(nóng)藥殘留快速檢測法，模擬生菜毒死蜱農(nóng)藥殘留超標樣品，選取日常生活中常用的4種蔬菜清洗方式，對各種方式的清洗條件進行系統(tǒng)、全面的優(yōu)化，以期得到最合適的清洗方法，為消費者提供參考。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 儀器與試劑

毒死蜱（有效成分含量為480 g/L，連云港立本農(nóng)藥化工有限公司），TL-310多通道農(nóng)藥殘留快速測試儀（廣東達元食品藥品安全技術(shù)有限公司）;JJ-2002電子天平（廣州玉治儀器有限公司）;農(nóng)殘快速檢測試劑盒：內(nèi)含底物、顯色劑、膽堿酯酶、緩沖劑;農(nóng)殘速測儀（廣東達元食品藥品安全技術(shù)有限公司）。

1.2? ? 樣品處理

將市售農(nóng)藥毒死蜱按推薦使用劑量兌水稀釋，按農(nóng)藥與水的比例為1∶500 000（V/V）配制農(nóng)藥稀釋液。為力求農(nóng)藥沾污均勻一致，取200 g原始蔬菜樣品均勻分散浸泡在農(nóng)藥稀釋液內(nèi)60 min，取出自然晾干，常溫放置12 h，備用。反復進行上述程序，隨機取樣分析，當蔬菜中農(nóng)藥殘留抑制率為90%左右時樣品處理完成。

1.3? ? 清洗方式

1.3.1? ? 鹽水清洗。稱取食鹽溶于1 500 m L蒸餾水中，混勻，設(shè)定不同鹽水濃度（1‰、3‰、5‰、7‰、10‰）。將1.2處理過的樣品置于鹽水中進行浸泡，設(shè)定不同浸泡液溫度（20、25、30、35、40 ℃）和不同浸泡時間（5、10、15、20、25 min），其間揉搓3～5次。浸泡結(jié)束后用流動清水沖洗30 s，晾干。

1.3.2? ? 洗滌劑水清洗。稱取品牌果蔬洗滌劑溶于1 500 mL蒸餾水中，混勻，設(shè)定不同洗滌劑水濃度（1%、3%、5%、7%、9%）。將1.2處理過的樣品置于洗滌劑水中進行浸泡，設(shè)定不同浸泡液溫度（25、30、35、40、45 ℃）和不同浸泡時間（10、15、20、25、30 min），其間揉搓3～5次。浸泡結(jié)束后用流動清水沖洗30 s，晾干。

1.3.3? ? 碳酸氫鈉水溶液清洗。稱取碳酸氫鈉溶于1 500 mL蒸餾水中，混勻，設(shè)定不同的碳酸氫鈉溶液濃度（1、3、5、7、9 g/100 mL）。將1.2處理過的樣品置于碳酸氫鈉水溶液中進行浸泡，設(shè)定不同浸泡液溫度（30、35、40、45、50 ℃）和不同浸泡時間（5、10、15、20、25 min），其間揉搓3～5次。浸泡結(jié)束后用流動清水沖洗30 s，晾干。

1.3.4? ? 淘米水清洗。選擇經(jīng)農(nóng)藥殘留檢測合格的大米，以1.0∶1.5（m/V）加入蒸餾水進行淘洗，合并2次操作即得淘米水母液。以1 500 mL總體積，設(shè)定不同淘米水濃度（V/V，20%、40%、60%、80%、100%），將1.2處理過的樣品置于淘米水中進行浸泡，設(shè)定不同浸泡時間（5、10、15、20、25 min）和不同浸泡次數(shù)（1、2、3、4、5次），其間揉搓3～5次。浸泡結(jié)束后用流動清水沖洗30 s，晾干。

1.4? ? 檢測方法

檢測操作參照儀器說明進行：選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成1.0 cm左右見方的碎片，取樣品1.0 g（精確到0.02 g），放入燒杯或提取瓶中，加入5 mL緩沖溶液，振蕩1～2 min，倒出提取液，靜置3～5 min，待用。然后進行對照溶液測試，先于試管中加入2.5 mL緩沖溶液，再加入0.1 mL酶液、0.1 mL顯色劑，搖勻后于37 ℃放置15 min以上（每批樣品的控制時間應(yīng)一致）。加入0.1 mL各項底物搖勻，此時檢液開始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入儀器比色池中，記錄反應(yīng)3 min的吸光度變化值。再對待測樣液進行測試，先于試管中加入2.5 mL樣品提取液，其他操作與對照溶液測試相同，記錄反應(yīng)3 min的吸光度變化值。計算公式如下：

式（1）中：I為抑制率;ΔAc為3 min對照溶液吸光度的變化;ΔAs為3 min樣品溶液吸光度的變化。

式（2）中，x為去除率，a為樣品未處理的農(nóng)藥殘留量，b為樣品處理后的農(nóng)藥殘留量。

2? ? 結(jié)果與分析

2.1? ? 鹽水浸泡清洗對毒死蜱殘留去除的影響

按照1.3.1所設(shè)條件，控制鹽水浸泡時間20 min、浸泡鹽水溫度30 ℃，研究鹽水濃度對毒死蜱殘留去除的影響，結(jié)果如圖1所示;控制浸泡鹽水濃度5‰、浸泡鹽水溫度30 ℃，研究鹽水浸泡時間對毒死蜱殘留去除的影響，結(jié)果如圖2所示;控制浸泡鹽水濃度5‰、鹽水浸泡時間15 min，研究浸泡鹽水溫度對毒死蜱殘留去除的影響，結(jié)果如圖3所示。

可以看出，單因素條件下，鹽水濃度5‰、30 ℃水溫浸泡15 min，毒死蜱的去除效果最好。在此基礎(chǔ)上取鹽水濃度3‰、5‰、7‰，浸泡時間10、15、20 min和浸泡溫度25、30、35 ℃設(shè)計進行L9（34）正交試驗，結(jié)果顯示，鹽水濃度5‰、35 ℃水溫浸泡15min為最佳，去除率達到78.8%，而鹽水濃度3‰、30 ℃水溫浸泡15 min的去除率也達到了78.7%;極差分析結(jié)果表明，對農(nóng)藥殘留去除率的影響由大到小為鹽水浸泡時間>浸泡鹽水溫度>鹽水濃度。驗證3組條件（n=5），分別得到去除率為75.38%±1.18%、78.6%±2.05%、78.0%±1.87%?？紤]到鹽水和高水溫浸泡會影響蔬菜口感，選擇鹽水濃度3‰、30 ℃水溫浸泡15 min為最佳鹽水浸泡清洗方式。

李? 楊等[5]采用氣相色譜檢測，研究了5%鹽水浸泡清洗對模擬韭菜樣品（未指明濃度農(nóng)藥稀釋浸泡10 min）中毒死蜱農(nóng)藥殘留的去除效果，去除率未達到20%，淘米水浸泡去除率超過50%;張艷麗等[8]采用氣相色譜檢測，研究了2%鹽水清洗方法對模擬小白菜、黃瓜樣品（45%毒死蜱乳油稀釋1 000倍浸泡1 h）中農(nóng)藥殘留的去除效果，對黃瓜去除率為4.51%，對小白菜去除率也僅4.25%;李? 華等[7]采用快檢技術(shù)，研究市場上農(nóng)殘未超標青菜（酶抑制率12.34%），經(jīng)10‰鹽水浸泡清洗20 min后酶抑制率為12.30%，去除效果幾乎為0;王? 娜等[11]認為，1‰淡鹽水浸泡15 min對氧樂果的去除效果較好。結(jié)合本研究可知，鹽水浸泡清洗需要較低的濃度，與生理鹽水濃度相近時有較好的清洗效果;但是當農(nóng)藥殘留濃度過大或者較低時，鹽水去除效果較差。

2.2? ? 洗滌劑水浸泡清洗對毒死蜱殘留去除的影響

從5種果蔬洗滌劑中優(yōu)選出某超能洗滌劑進行試驗。按照1.3.2所設(shè)條件，控制洗滌劑水浸泡時間20 min，浸泡鹽水溫度30 ℃，研究洗滌劑水濃度對毒死蜱殘留去除的影響，結(jié)果如圖4所示;控制浸泡洗滌劑水濃度5%、浸泡洗滌劑水溫度30 ℃，研究洗滌劑水浸泡時間對毒死蜱殘留去除的影響，結(jié)果如圖5所示;控制浸泡洗滌劑水濃度5%、洗滌劑水浸泡時間20 min，研究浸泡洗滌劑水溫度對毒死蜱殘留去除的影響，結(jié)果如圖6所示。

可以看出，單因素條件下，洗滌劑水濃度5%、35 ℃水溫浸泡20 min，毒死蜱的去除效果最好。在此基礎(chǔ)上，取洗滌水濃度3%、5%、7%，浸泡時間15、20、25 min和浸泡溫度30、35、40 ℃設(shè)計進行L9（34）正交試驗，結(jié)果顯示，洗滌劑水濃度5%、35 ℃水溫浸泡20 min，效果最佳，去除率達到60.1%;極差分析結(jié)果表明，對農(nóng)藥殘留去除率的影響由大到小為洗滌劑水濃度>浸泡時間>浸泡洗滌劑水溫度。重復最優(yōu)條件（n=5），得到去除率為65.38%±2.12%。張? 哲等[19]研究了10種洗滌劑清洗模擬豆角樣品，毒死蜱的最高去除率可達到61.90%;張艷麗等[8]研究表明，洗潔精清洗對黃瓜毒死蜱的去除率為60.04%，對小白菜毒死蜱的去除率為13.02%?？梢?，洗滌劑水清洗對毒死蜱有較好的去除效果。

2.3? ? 碳酸氫鈉水溶液浸泡清洗對毒死蜱殘留去除的影響

按照1.3.3所設(shè)條件，控制碳酸氫鈉水溶液浸泡時間20 min、浸泡碳酸氫鈉水溶液溫度30 ℃，研究碳酸氫鈉水溶液濃度對毒死蜱殘留去除的影響，結(jié)果如圖7所示;控制浸泡碳酸氫鈉水溶液濃度7 g/100 mL、浸泡碳酸氫鈉水溶液溫度30 ℃，研究碳酸氫鈉水溶液浸泡時間對毒死蜱殘留去除的影響，結(jié)果如圖8所示;控制浸泡碳酸氫鈉水溶液濃度7 g/100 mL、碳酸氫鈉水溶液浸泡時間15 min，研究浸泡碳酸氫鈉水溶液溫度對毒死蜱殘留去除的影響，結(jié)果如圖9所示。

可以看出，單因素條件下，碳酸氫鈉水溶液7 g/100 mL、40 ℃水溫浸泡15 min，毒死蜱的去除效果最好。在此基礎(chǔ)上，取碳酸氫鈉水溶液濃度5、7、9 g/100 mL，浸泡時間10、15、20 min和浸泡溫度35、40、45 ℃設(shè)計進行L9（34）正交試驗，結(jié)果顯示，碳酸氫鈉水溶液濃度7 g/100 mL、45 ℃水溫浸泡15 min的效果最佳，去除率達到77.0%;極差分析結(jié)果表明，對農(nóng)藥殘留去除率的影響由大到小為浸泡時間>碳酸氫鈉水溶液濃度>碳酸氫鈉水溶液溫度。驗證2組條件（n=5），得到去除率分別為73.79%±2.63%、77.4%±3.08%。

李? 楊等[5]研究結(jié)果表明，3%堿水清洗毒死蜱的去除率接近40%;張艷麗等[8]研究認為，堿水浸泡清洗對于黃瓜毒死蜱去除率為50.3%，對于小白菜毒死蜱的去除率為7.47%;韓? 禮等[13]研究表明，毒死蜱的降解隨浸泡時間延長呈逐步上升趨勢，在20 min時為65%左右，20 min后生菜稍顯萎蔫且顏色變深。本研究中也發(fā)現(xiàn)，隨浸泡濃度增大、浸泡時間延長、浸泡溫度升高，生菜出現(xiàn)發(fā)蔫的現(xiàn)象，可見堿水清洗影響蔬菜口感，清洗時間并非越長越好。

2.4? ? 淘米水浸泡清洗對毒死蜱殘留去除的影響

按照1.3.4所設(shè)條件，控制淘米水浸泡時間10 min、浸泡1次，研究淘米水濃度對毒死蜱殘留去除的影響，結(jié)果如圖10所示;控制浸泡淘米水濃度60%、浸泡1次，研究淘米水浸泡時間對毒死蜱殘留去除的影響，結(jié)果如圖11所示;控制浸泡淘米水濃度60%、淘米水浸泡時間15 min，研究淘米水浸泡次數(shù)對毒死蜱殘留去除的影響，結(jié)果如圖12所示。

由圖10可以看出，淘米水的濃度越高，其毒死蜱去除率越高，60%以后去除率增加幅度減小?？紤]到濃度越高浸泡后清洗時間越長，而且日常生活中也很難用純淘米水浸泡蔬菜，量不夠，故采用60%的濃度為優(yōu)化中點。由圖11可以看出，試驗時間內(nèi)，毒死蜱的去除率隨浸泡時間延長呈上升趨勢，15 min后增長平緩，采用15 min浸泡時間為優(yōu)化中點。如圖12所示，浸泡2次毒死蜱去除率最高。在單因素基礎(chǔ)上，取淘米水濃度40%、60%、80%，浸泡時間10、15、20 min和浸泡次數(shù) 1、2、3次設(shè)計進行L9（34）正交試驗，結(jié)果顯示，淘米水濃度60%、浸泡20 min浸泡1次效果最佳，去除率達到58.75%;極差分析結(jié)果表明，對農(nóng)藥殘留去除率的影響由大到小為淘米水濃度>浸泡時間>清洗次數(shù)，得到優(yōu)化組合為淘米水濃度80%、浸泡10 min、浸泡1次。驗證2組條件（n=5），分別得到去除率為56.65%±3.12%、72.35%±2.66%。

李? 楊等[5]研究發(fā)現(xiàn)，淘米水清洗方法效果最好，毒死蜱去除率達51.3%，其模擬韭菜樣品為未指明濃度農(nóng)藥稀釋浸泡10 min;張艷麗等[8]研究認為，淘米水浸泡清洗對于黃瓜毒死蜱去除率為21.67%，對于小白菜毒死蜱的去除率為7.18%，其模擬小白菜、黃瓜樣品為45%毒死蜱乳油稀釋1 000倍浸泡1 h;李? 華等[7]采用快檢技術(shù)研究市場上農(nóng)殘未超標青菜（酶抑制率12.34%），經(jīng)淘米水浸泡清洗20 min后酶抑制率為9.29%，去除率僅24.7%。結(jié)合本文研究可知，淘米水浸泡對農(nóng)藥殘留去除有一定效果，但若農(nóng)藥殘留濃度過大或較低，淘米水去除效果也一般。

3? ? 結(jié)論與討論

本研究采用快速檢測法測定鹽水、洗滌劑水、碳酸氫鈉水溶液和淘米水等4種不同方式清洗對模擬樣品生菜中毒死蜱農(nóng)藥殘留的去除效果。在分析4種不同清洗方式單因素的基礎(chǔ)上，進行L9（34）正交試驗，極差分析并驗證結(jié)果，得到鹽水清洗方式的優(yōu)化結(jié)果為鹽水濃度3‰、30 ℃水溫浸泡15 min，毒死蜱去除率達78.0%±1.87%;洗滌劑水清洗方式的優(yōu)化結(jié)果為某超能洗滌劑水濃度5%、35 ℃水溫浸泡20 min毒死蜱去除率達65.38%±2.12%;碳酸氫鈉水溶液清洗方式的優(yōu)化結(jié)果為碳酸氫鈉水溶液濃度7 g/100 mL、40 ℃水溫浸泡15 min，毒死蜱去除率達73.79%±2.63%;淘米水清洗方式的優(yōu)化結(jié)果為淘米水濃度80%、浸泡10 min、浸泡1次，毒死蜱去除率為72.35%±2.66%。4種清洗方式都能將抑制率90%左右的毒死蜱超標生菜通過清洗達到合格，建議采用鹽水和淘米水清洗方式。

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基金項目? ?廣東省大學生科技創(chuàng)新培育專項資金“攀登計劃”項目（pdjh2018b0884）;廣東省科技計劃項目（2017A040403010）。

作者簡介? ?李葉青（1985-），女，湖南邵東人，碩士，高級工程師。研究方向：食品安全分析與檢測。

收稿日期? ?2019-01-15