28個(gè)農(nóng)藥產(chǎn)品推薦劑量對(duì)西瓜噬酸菌的抑制活性

白慶榮　陳悅　孫于淼　吳佳鴻　白雪　趙廷昌

摘 ? ?要： 西瓜噬酸菌（Acidovorax citrulli，簡(jiǎn)稱Ac）引起的西瓜細(xì)菌性果斑?。˙acterial Fruit Blotch，簡(jiǎn)稱BFB）是西瓜和甜瓜生產(chǎn)上重要的毀滅性種傳細(xì)菌病害。一旦發(fā)病，用于該病害防治的有效藥劑的選擇就極為重要。為了篩選出高防效藥劑，筆者采用抑菌圈法測(cè)定了乙酸素等28個(gè)農(nóng)藥產(chǎn)品的推薦劑量對(duì)2株西瓜噬酸菌的抑制活性。試驗(yàn)結(jié)果表明，供試藥劑0.3%四霉素AS稀釋30倍液和50倍液、30%乙蒜素EC 500倍液和700倍液、80%乙蒜素EC 1 500倍液和1 800倍液對(duì)供試菌株AacJ-N和Aac7500的抑菌活性較好，抑菌圈直徑均在15 mm以上;46%氫氧化銅WG 700倍液和1 000倍液、53.8%氫氧化銅WG 500倍液和600倍液、20%溴硝醇WP 1 000倍液和1 500倍液、2%春雷·45%王銅WP（江門植保）470倍液和750倍液、3%噻霉酮ME 360倍液對(duì)供試菌株AacJ-N和Aac7500的抑菌圈直徑在10～15 mm;其余供試藥劑在試驗(yàn)劑量下均無(wú)抑菌作用。不同菌株對(duì)相同藥劑同一濃度的敏感性存在差異。

關(guān)鍵詞： 西瓜; 西瓜噬酸菌; 殺菌劑; 毒力測(cè)定

Inhibition activities of 28 bactericides to Acidovorax citrulli

BAI Qingrong1， CHEN Yue1， SUN Yumiao1， WU Jiahong1， BAI Xue1，2， ZHAO Tingchang2

（1 Jilin Agricultural University， Changchun 130118，Jilin， China; 2 Institute of Plant Protection， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Beijing 100193， China）

Abstract： Bacterial fruit blotch caused by Acidovorax citrulli is a destructive disease of watermelon and melon. The selection of the control agents is very important when once it occurred. In order to screen out high efficiency control agent， the inhibitory effect of 28 reagents against two A. citrulli strains was determined by using inhibitory halo method. The inhibitory haloes of 30- and 50-fold dilution of 0.3% Tetramycin AS，500-and 700-fold dilution of 30% Ethylicin AS， 1 500 and 1 800-fold dilution of 80% Ethylicin were above 15 mm against strains AacJ-N and Aac7500. The inhibitory haloes of 700- and 1 000-fold dilution of 46% Sodium hydroxide WG， 500- and 600-fold dilution of 53.8% Sodium hydroxide WG， 1 000- and 1 500-fold dilutions of 20% Bronopo WPl， 470- and 750-fold dilutions of 2% kasugamycin·45% Copper（Ⅱ）busic chloride WP （Jiangmen plant protection Co.， Ltd.）， 360-fold dilution of 3% benziothiazolinone ME were ranged from 10-15 mm against strains AacJ-N and Aac7500， while rest of the tested reagents did not show any inhibitory effects. Additionally， the two strains showed different resistance to the same reagent at same concentration.

Keywords： Watermelon; Acidovorax citrulli; Bactericide; Virulence determination

西瓜細(xì)菌性果斑?。╞acterial fruit blotch， BFB）由西瓜噬酸菌（Acidovorax citrulli Schaad et al.）引起。1965年Webb等首次報(bào)道該病害在美國(guó)佛羅里達(dá)洲發(fā)現(xiàn)[1]，1989年Somodi和Rane報(bào)道該病害在佛羅里達(dá)州商品西瓜上危害[2-3]，隨后美國(guó)東南部10多個(gè)州相繼嚴(yán)重發(fā)生，損失慘重，對(duì)西瓜制種業(yè)和種植業(yè)造成了巨大的沖擊和重大威脅。目前該病害現(xiàn)已成為世界性檢疫性病害，嚴(yán)重危害多種葫蘆科作物的葉片和果實(shí)[4]。在我國(guó)西瓜、甜瓜生產(chǎn)及制種田均有發(fā)生，嚴(yán)重影響我國(guó)西瓜和甜瓜的生產(chǎn)[5-12 ]。種子帶菌是造成該病害發(fā)生流行的主要原因，種子處理是防治該病害的最佳方法。生產(chǎn)上種子處理劑對(duì)該病害的防治效果又因種子帶菌率、帶菌部位以及栽培管理水平的不同存在較大差異[13-17]。生產(chǎn)中一旦種子處理效果不理想或播種沒(méi)有處理的帶菌種子，就會(huì)導(dǎo)致病害在苗床和田間繼續(xù)傳播和擴(kuò)散，病害控制可選用的藥劑很少，防控難度極大。

宋順華等[18-22]對(duì)西瓜噬酸菌具有抑制活性的藥劑進(jìn)行了室內(nèi)藥劑篩選，王雪等[22-26]對(duì)病害田間藥劑防治進(jìn)行了比較研究，研究結(jié)果中藥劑的用量多用濃度單位表示，而實(shí)際應(yīng)用者多為瓜農(nóng)或農(nóng)藥經(jīng)銷商，對(duì)這種表示方式很難掌握和應(yīng)用。因此，筆者開(kāi)展了28個(gè)可用于細(xì)菌病害防治的農(nóng)藥產(chǎn)品在推薦劑量下對(duì)吉林省罹病西瓜上分離到的西瓜噬酸菌及中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所提供的西瓜噬酸菌菌株進(jìn)行室內(nèi)抑菌測(cè)定，以期篩選到方便使用的最佳藥劑種類及推薦使用劑量，為該病害防控提供技術(shù)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株 西瓜噬酸菌AacJ-N，吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理教研室分離鑒定并保存;Aac7500中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所提供。

1.1.2 供試藥劑 本試驗(yàn)搜集了28個(gè)吉林省常用于細(xì)菌病害防治的農(nóng)藥產(chǎn)品，有效成分、劑型及生產(chǎn)廠家詳見(jiàn)表1。

1.2 方法

含菌培養(yǎng)基的配置：瓊脂粉用量為16.0 g·L-1的NA培養(yǎng)基溫度降到約40 ℃時(shí)與培養(yǎng)48 h供試菌株配置成的108 CFU·mL-1菌懸液按體積比20∶1混合均勻，制成混菌平板。

藥劑配置：根據(jù)所選藥劑推薦使用的最高和最低劑量進(jìn)行配置。產(chǎn)品中以g·667 m-2為推薦劑量單位時(shí)，按照667 m2用水量40 L換算成稀釋倍數(shù)，準(zhǔn)確量取藥劑配置成推薦使用的最高及最低稀釋倍數(shù)的藥液。將直徑為6 mm 的滅菌濾紙片置于直徑為9 cm 的含菌平板培養(yǎng)基上， 每皿3片，等邊三角形放置。分別取上述藥劑不同濃度的藥液15 μL滴于紙碟上， 每個(gè)處理3次重復(fù)， 無(wú)菌水為對(duì)照。28 ℃下培養(yǎng)48 h后， 十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑。

1.3 試驗(yàn)時(shí)間及地點(diǎn)

試驗(yàn)在吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病害綜合治理研究室進(jìn)行，起止時(shí)間為2018年3—7月。

2 結(jié)果與分析

室內(nèi)平板抑菌活性測(cè)定結(jié)果表明：0.3%四霉素AS 30倍液和50倍液、30%乙蒜素EC（河南中威）500倍液和700倍液、80%乙蒜素EC 1 500倍液和1 800倍液對(duì)供試菌株AacJ-N和Aac7500的抑菌活性較好，抑菌圈均在15 mm以上（圖1-A～C）;46%氫氧化銅WG（美國(guó)杜邦）700倍液和1 000倍液、53.8%氫氧化銅WG（美國(guó)杜邦）500倍液和600倍液、20%溴硝醇WP 1 000倍和1 500倍液、2%春雷·45%王銅WP（江門植保） 470倍液和750倍液、3%噻霉酮ME 360倍液對(duì)供試菌株AacJ-N和Aac7500的抑菌圈直徑在10～15 mm（圖1-D～H）;2%春雷霉素AS和30%噻唑鋅SC等其余藥劑在試驗(yàn)劑量下對(duì)供試菌株均無(wú)抑菌作用（圖1-I～J）。AacJ-N菌株對(duì)0.3%四霉素AS、30%乙蒜素EC、80%乙蒜素EC、20%溴硝醇WP和3%噻霉酮ME的敏感性在相同稀釋倍數(shù)時(shí)低于菌株Aac7500，對(duì)其他藥劑3種藥劑的敏感性高于菌株Aac7500（表2）。

3 討 論

關(guān)于西瓜細(xì)菌性果斑病的防治，種子處理是有效手段，種子處理方法和藥劑的篩選均有相關(guān)報(bào)道[14-22]，研究結(jié)果中藥劑的用量多以濃度為單位進(jìn)行表示，若以稀釋倍數(shù)表示相比用濃度單位表示更易被瓜農(nóng)和經(jīng)銷商掌握和應(yīng)用。本研究測(cè)定了28個(gè)農(nóng)藥產(chǎn)品推薦劑量（稀釋倍數(shù)）對(duì)2個(gè)來(lái)源不同的西瓜嗜酸菌菌株的抑制活性，篩選獲得的有效藥劑可以直接按照推薦稀釋倍數(shù)使用，對(duì)生產(chǎn)中該病害的防治具有很強(qiáng)的實(shí)用性和可操作性。

筆者篩選到8種對(duì)西瓜噬酸菌有抑制活性的藥劑，其中乙蒜素、四霉素在試驗(yàn)劑量下對(duì)2個(gè)供試西瓜嗜酸菌表現(xiàn)出較好的抑制活性，抑菌圈直徑在15 mm以上;53.8%氫氧化銅WG（美國(guó)杜邦）、20%溴硝醇WP（遼寧丹東）、2%春雷·45%王銅WP（江門植保）、3%噻霉酮ME（江蘇輝豐）在試驗(yàn)劑量下對(duì)2個(gè)供試菌株的抑菌圈直徑在10～15 mm。46%氫氧化銅WG（美國(guó)杜邦）700倍液和1 000倍液對(duì)2個(gè)供試菌株的抑菌圈直徑測(cè)量值在11～14.83 mm之間，但抑菌圈較模糊，可能對(duì)病菌的抑制效果不完全，部分病菌仍能繼續(xù)生長(zhǎng)所致。選用抑菌效果好的藥劑在病害發(fā)生前或病害發(fā)生期進(jìn)行周到細(xì)致的噴霧，對(duì)病害控制具有重要作用，大大減少了病害防治中無(wú)效藥劑的使用，對(duì)西瓜生產(chǎn)中農(nóng)藥減施具有極其重要的理論及實(shí)踐意義。

王雪等[22]篩選到的80%乙蒜素EC（河南省南陽(yáng)臥龍農(nóng)藥廠）、80%乙蒜素EC（北京愛(ài)威達(dá)生物科技有限公司）、80%乙蒜素EC（浙江平湖農(nóng)藥廠）在濃度為3 200 μg·mL-1以上即稀釋倍數(shù)低于312.5倍的情況下對(duì)西瓜噬酸菌室內(nèi)抑菌效果較好，但該藥劑在各種作物上的推薦劑量為800～5 000倍。本研究選用30%乙蒜素EC（河南中威高科技化工有限公司）在推薦劑量500倍液和700倍液，80%乙蒜素EC（河南科邦化工有限公司）1 500倍液和1 800倍液下抑菌抑菌圈直徑在15 mm以上。王雪等[20]篩選到0.15%四霉素AS（遼寧微科生物工程股份有限公司）對(duì)西瓜噬酸菌在濃度為30～150 μg·mL-1時(shí)，相當(dāng)于稀釋倍數(shù)為33 333～6 667倍時(shí)抑菌圈直徑13.25～21.58 mm，本試驗(yàn)中0.3%四霉素AS在推薦劑量稀釋30～50倍的情況下對(duì)西瓜嗜酸菌的抑菌圈直徑在24.67～23.83 mm，用量差異較大，上述3個(gè)農(nóng)藥產(chǎn)品能否用于該病害的防治還有待于進(jìn)一步驗(yàn)證。

試驗(yàn)中春雷霉素、多抗霉素、中生菌素、噻唑鋅、葉枯唑、噻菌銅、噻森銅、喹啉酮、琥膠肥酸銅、烷醇辛菌胺及一些復(fù)配藥劑在推薦使用的最高及最低劑量下均無(wú)抑菌效果，在病害防治中應(yīng)慎重選擇。

筆者也發(fā)現(xiàn)，不同菌株對(duì)這些藥劑的敏感性存在差異，這與王雪等[22]的研究結(jié)果相似，具體原因有待于進(jìn)一步研究。

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