安康不同產(chǎn)區(qū)富硒茶中EGCG和沒(méi)食子酸含量的測(cè)定與比較研究

謝娟平, 靳文娟, 王 磊, 白金波, 賀 博

(1.安康學(xué)院 秦巴中藥資源研發(fā)中心，陜西 安康 725000; 2. 農(nóng)業(yè)部富硒產(chǎn)品開(kāi)發(fā)與質(zhì)量控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 安康市富硒產(chǎn)品研發(fā)中心，陜西 安康 725000)

茶葉為山茶科植物茶的芽、葉，含有兒茶素、膽甾烯酮、咖啡堿、肌醇、葉酸等成分，常飲可促進(jìn)人體健康[1～2]。茶多酚是形成茶葉色香味的主要成分之一，也是茶葉主要的保健成分之一，具有清除自由基作用和抗輻射、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗衰老和防治心血管疾病等多方面作用[3～5]。茶多酚以兒茶素類和沒(méi)食子酸為主，兒茶素類包括表兒茶素(EC)、表沒(méi)食子兒茶素(EGC)、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)和表兒茶素沒(méi)食子酸酯(ECG)等。EGCG被公認(rèn)為理想的抗癌物質(zhì)，沒(méi)食子酸具有抗炎、抗突變、抗氧化、抗自由基、抗腫瘤、保護(hù)肝臟等多種生物學(xué)活性[6～8]。安康地區(qū)是主要的富硒茶產(chǎn)區(qū)之一，茶葉的保健功能和開(kāi)發(fā)利用研究受到越來(lái)越多的關(guān)注。筆者選取安康地區(qū)不同產(chǎn)區(qū)的綠茶和紅茶，采用高效液相色譜法對(duì)茶葉中的茶多酚類成分EGCG和沒(méi)食子酸的含量進(jìn)行了測(cè)定分析和比較，以期為安康地區(qū)富硒茶葉的品質(zhì)研究和開(kāi)發(fā)利用提供參考[9～11]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

樣品：紫陽(yáng)綠茶，紫陽(yáng)紅茶，平利綠茶，平利紅茶，白河綠茶，嵐皋綠茶，漢濱區(qū)綠茶。標(biāo)準(zhǔn)品: 表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)、沒(méi)食子酸(GA)均為北京索萊寶科技有限公司提供且純度大于98%。試劑：甲醇(分析純)、磷酸(色譜純)、三重蒸餾水(實(shí)驗(yàn)室自制)

1.2 儀器

SPD-10AVP型日本島津高效液相色譜儀；KQ2200E超聲清洗儀(超聲頻率40KHz，超聲功率80W，加熱功率600W)：昆山市超聲儀器有限公司；FA2014型分析天平：上海良平儀器儀表有限公司；Molbiochem 520超純水機(jī)：重慶摩爾水處理設(shè)備有限公司.

1.3 方法

參考茶葉中多酚類成分含量測(cè)定方法[12～13]，采用HPLC法對(duì)安康地區(qū)茶葉中的茶多酚類成分EGCG、GA成分進(jìn)行測(cè)定。

1.3.1 供試品溶液制備 分別精密稱取1 g各供試茶葉，磨碎，混勻，將試樣置于50 mL具塞錐形瓶中，加入體積分?jǐn)?shù)50 %甲醇溶液20 mL，定量稱重后超聲處理30 min，放冷，在定量稱重，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，轉(zhuǎn)入離心機(jī)在3 500 r·min-1離心10 min，取上清液過(guò)0.45 μm濾膜，待用(該提取液在4 ℃條件下至多保存24 h)。

1.3.2 對(duì)照品溶液制備 分別精密稱取EGCG 標(biāo)準(zhǔn)品5.0 mg和 GA標(biāo)準(zhǔn)品4.0 mg于10 mL容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，即得對(duì)照品溶液。

1.3.3 色譜條件 Kromasil-C18(4.6mm×250 mm，5mm)色譜柱，柱溫25℃，波長(zhǎng)279 nm，A相：甲醇；B相：體積分?jǐn)?shù)0.1%磷酸水溶液(A∶B = 28∶72)，流速1 mL·min-1，進(jìn)樣量10μL。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)系列 分別精密吸取EGCG和 GA對(duì)照品溶液各2，4，6，8，10 mL，分別置10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，0.45 μm濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

按1.3.4項(xiàng)下方法操作，以峰面積A為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度C(mg·mL-1)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(n=6)，結(jié)果EGCG標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=345857C-26887，R2=0.9993，線性范圍0.5424～5.893μg，EA標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=190 356C+2 781.6，R2=0.9999，線性范圍0.7959～5.990。

2.2 對(duì)照品及樣品色譜圖

根據(jù)所建立的檢測(cè)條件，采用高效液相色譜法分析EGCG和GA混合標(biāo)品的HPLC色譜圖，結(jié)果如圖1、圖2所示(峰1為GA，峰2為EGCG)。

圖1 EGCG和GA混合標(biāo)品HPLC圖譜

圖2 市售茶葉HPLC圖譜(平利女媧銀峰)

2.3 精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性考察

分別取EGCG和 GA標(biāo)準(zhǔn)品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，RSD分別為1.47%和1.75%，精密度良好。準(zhǔn)確稱取綠茶(紫陽(yáng)縣豐和富硒茶業(yè)有限公司)樣品按“1.3.1”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，分別于0，2，4，8和12 h測(cè)定EGCG和 GA含量，RSD分別為1.42%和1.76%，測(cè)定樣品在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

稱取綠茶(安康市漢濱區(qū)茗谷源茶葉種植農(nóng)民專業(yè)合作社)樣品共5份，按“1.3.1”項(xiàng)下方法制備溶液，分別進(jìn)樣，定量測(cè)定，計(jì)算EGCG和 GA含量，RSD分別為1.92%和2.32%，重復(fù)性較好。

2.4 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的綠茶(安康市漢濱區(qū)茗谷源茶葉種植農(nóng)民專業(yè)合作社)樣品1.0 g，按“1.3.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按高中低濃度分別加入不同量的EGCG和 GA對(duì)照品溶液，每個(gè)濃度分別制備3份，加入相應(yīng)的對(duì)照品，共制備9份，分別測(cè)定加樣回收率。2種成分的加樣回收率均在96.39%到100.39%之間，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 GA加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5 安康地區(qū)茶葉中EGCG和GA含量的比較

從結(jié)果中可知，安康地區(qū)市售富硒綠茶中的EGCG含量較高，GA含量較低；富硒紅茶中EGCG含量低而GA含量大幅升高。

從表2可知，安康不同縣區(qū)富硒茶茶多酚EGCG和GA的含量差異較大，同一縣區(qū)不同公司加工出售的富硒茶中EGCG和GA的含量也有差別，可見(jiàn)茶葉的加工對(duì)茶葉中活性物質(zhì)含量影響較大，從而使富硒茶葉的品質(zhì)呈現(xiàn)差異。

表2 安康地區(qū)茶葉中EGCG和GA含量的HPLC測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

茶葉發(fā)酵過(guò)程中多酚類物質(zhì)氧化、聚合，形成茶黃素和茶紅素等成分，使發(fā)酵茶中兒茶素類成分含量有一定程度的降低。同時(shí)，酯型兒茶素尤其是EGCG在發(fā)酵過(guò)程發(fā)生降解，使發(fā)酵茶中該成分含量低于綠茶。

實(shí)驗(yàn)表明，富硒綠茶中茶多酚總含量較高，而發(fā)酵茶中茶多酚總含量降低。所測(cè)安康地區(qū)富硒茶樣品中，漢濱區(qū)富硒茶中EGCG含量為最高，依次為漢濱區(qū)茶葉>紫陽(yáng)縣茶葉>平利縣茶葉>嵐皋縣茶葉>白河縣茶葉。平利縣富硒紅茶GA含量顯著高于紫陽(yáng)富硒紅茶。安康地區(qū)不同縣區(qū)的茶葉中的茶多酚成分EGCG和GA含量差異較大，茶葉加工中要最大限度的保留影響茶葉品質(zhì)風(fēng)味的活性成分，發(fā)揮茶葉功效成分的保健作用。