金銀花-連翹藥對(duì)的成分和藥理作用研究進(jìn)展

丁曉彥，林志軍，王岱

(1.山東省中醫(yī)藥研究院，山東省中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250014；2.山東省醫(yī)藥工業(yè)設(shè)計(jì)院，山東 濟(jì)南 250013)

金銀花和連翹是常用清熱類中藥，二者組成藥對(duì)是臨床應(yīng)用中常見(jiàn)的配伍形式，二者配伍相須為用，可以增強(qiáng)清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功效，是溫病治療中常用藥對(duì)之一，代表性方劑當(dāng)屬《溫病條辨》所載的銀翹散。銀翹散對(duì)呼吸道感染、流行性腮腺炎、病毒性心肌炎等疾病均有療效，還具有抗炎、解熱、鎮(zhèn)痛、抗過(guò)敏等作用。在現(xiàn)有上市的中成藥中，涉及金銀花-連翹藥對(duì)的中成藥制劑有400余個(gè)，如小兒退熱顆粒、小兒熱速清口服液、利咽解毒顆粒、金嗓開(kāi)音丸等。本文在查閱近十年的大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)該藥對(duì)的化學(xué)成分、藥理與藥效作用研究進(jìn)行了綜述。

1 金銀花-連翹藥對(duì)化學(xué)成分研究

金銀花與連翹中化學(xué)成分眾多，除了各自含有的特征性有效成分外，還存在部分共有的有效成分，主要為揮發(fā)性物質(zhì)，如α-松香醇、雪松醇、月桂酸、棕櫚酸等。

1.1 金銀花化學(xué)成分研究

金銀花中含有多種化學(xué)成分，主要包括黃酮類、有機(jī)酸類、揮發(fā)油類、環(huán)烯醚萜類、皂苷類等。有機(jī)酸類的綠原酸、黃酮類的木犀草苷是公認(rèn)的指標(biāo)成分，已經(jīng)被多種中藥制劑作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考察的重要指標(biāo)。

金銀花中的黃酮類化合物主要為黃酮和雙黃酮，其中分離鑒定的黃酮類化合物有木犀草素、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、5-羥基-7, 4′-二甲氧基黃酮等32種；有機(jī)酸有阿魏酸、原兒茶酸、綠原酸等19種[1]；分離得到的環(huán)烯醚萜類化合物包括閉環(huán)環(huán)烯醚萜類、裂環(huán)環(huán)烯醚萜類和環(huán)烯醚萜苷的含氮化合物等60多種；揮發(fā)油是其有效成分之一，不同產(chǎn)地的金銀花揮發(fā)油成分略有不同，主要含有醇、醛、酮、酯、烷、烯等類成分。林凱[2]對(duì)福建金銀花進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其揮發(fā)油中共檢出 40 種化合物，主要成分為十六酸、亞麻酸甲酯、十六酸甲酯，占總含量的55.36%。王國(guó)亮等[3]從河南產(chǎn)金銀花干燥花蕾揮發(fā)油中鑒定出27個(gè)化合物，主要是單萜和倍半萜類化合物，占揮發(fā)油量的 67.7%，其主要成分有芳樟醇、香葉醇、香樹(shù)烯、苯甲酸甲酯、丁香酚及金合歡醇。杜成智等[4]采用 GC-MS 法對(duì)廣西和湖南產(chǎn)金銀花進(jìn)行分析，在廣西產(chǎn)金銀花揮發(fā)油中鑒定出35種化學(xué)成分，主要成分為亞麻酸甲酯、軟脂酸、ξ-依蘭油烯等；在湖南產(chǎn)金銀花揮發(fā)油中鑒定出18種化學(xué)成分，主要成分為軟脂酸、亞油酸、α-姜黃烯等。

1.2 連翹化學(xué)成分研究

連翹目前已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)和鑒別的成分有苯乙醇苷類、木脂素類、萜類(三萜、環(huán)烯醚萜類)、黃酮類及揮發(fā)油類、生物堿類等。連翹中含有大量的苯乙醇及其苷類化合物，是連翹的特征性成分之一，主要有連翹酯苷A、B、C、D等；木質(zhì)素類是連翹的主要活性成分之一，主要有連翹苷[5]、連翹脂素、牛蒡子苷及苷元等；揮發(fā)油類成分復(fù)雜繁多?？捉艿萚6]采用毛細(xì)管氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)連翹揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行了研究，共確認(rèn)了其中90種成分。目前，連翹苷和連翹酯苷A的含量被《中國(guó)藥典》作為重要的檢測(cè)指標(biāo)用來(lái)評(píng)判藥材質(zhì)量。

1.3 配伍前后化學(xué)成分比較研究

中藥通過(guò)配伍，其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)有增減變化，認(rèn)為是成分上的變化實(shí)現(xiàn)了其臨床、藥效作用的增效減毒。故對(duì)藥對(duì)進(jìn)行配伍前后化學(xué)成分的比較研究，有助于揭示其配伍藥效物質(zhì)和作用機(jī)制。林麗美等[7]對(duì)銀翹藥對(duì)中金銀花、連翹的單煎、合并及混煎樣品的物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其物質(zhì)基礎(chǔ)有相同成分，也有不同，但未對(duì)該相同和不同成分進(jìn)行定性。朱祥英等[8]采用頂空固相微萃取-氣相色譜/質(zhì)譜法(HS-SPME-GC/MS)分析金銀花、連翹及其藥對(duì)粉末中的揮發(fā)性成分，鑒定出的化合物種類分別為57、68和88種，發(fā)現(xiàn)金銀花、連翹藥對(duì)配伍對(duì)揮發(fā)性成分和含量有一定的影響：藥對(duì)新增了胡椒粉甲醚(具有殺菌和消炎等作用)；連翹中具有抗病毒活性的β-蒎烯、莰烯、α-水芹烯、松油醇-4、桃金娘烯醛、香桃木醇、古巴烯、α-石竹烯、芍藥醇等9種萜類物質(zhì)的量在藥對(duì)中明顯增多；金銀花中檢出的葉醇、2-己醇、苯甲醛、辛酸、香葉醇、癸酸、鄰苯二甲酸二甲酯、苯甲酸環(huán)己酯、2-十七烷酮等9種成分和連翹中檢出的對(duì)-異丙基苯甲醛、α-欖香烯等成分在藥對(duì)中未檢出。該研究結(jié)果與邢學(xué)鋒等[9]的研究結(jié)果略有不同，可能是由于二者采取的揮發(fā)油提取的方法不同造成的。另外，邢學(xué)鋒[10]還對(duì)金銀花連翹藥對(duì)配伍的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)藥對(duì)配伍對(duì)多糖的溶出具有促進(jìn)作用，對(duì)總黃酮的溶出量沒(méi)有明顯增加。

2 金銀花-連翹藥對(duì)藥理作用研究

2.1 抗病毒作用

近年來(lái)，有關(guān)抗病毒中藥的研究成為熱點(diǎn)，金銀花、連翹作為常用抗病毒中藥也備受關(guān)注，相關(guān)研究主要集中在對(duì)抗流感病毒和抗呼吸道合胞病毒的作用方面。

2.1.1 抗流感病毒作用

流感病毒(influenza virus)是一種引起人和禽類感染正黏病毒科分階段的負(fù)鏈RNA病毒，其中甲型流感病毒易發(fā)生變異，多次引起世界性大流行，危害最大。

金銀花的石油醚、丙酮、乙醇、水提取物均具有抑制流感病毒的作用[11]，其中，石油醚提取部位與乙醇提取部位的EC50均小于陽(yáng)性對(duì)照利巴韋林，說(shuō)明該兩部位是金銀花抗流感病毒作用的藥效集中部位；三氯甲烷、乙酸乙酯提取部位無(wú)抑制病毒作用；乙醇提取物對(duì)甲型流感病毒(H3N2、H1N1)的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為236.28±5.37 μg/mL、290.50±34.82 μg/mL，說(shuō)明金銀花的乙醇提取物對(duì)流感病毒的復(fù)制有一定的抑制作用[12]。金銀花多糖能夠從免疫調(diào)節(jié)、免疫促進(jìn)以及抑制炎癥反應(yīng)等方面防治流感病毒的感染[13]，通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)研究[14]，發(fā)現(xiàn)金銀花對(duì)流感病毒致小鼠流感模型血清中部分功能蛋白的表達(dá)有密切相關(guān)性。

段林建等[15-16]對(duì)連翹苷、連翹醇提液、連翹水煎液進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，連翹苷抑制甲型流感病毒NP基因轉(zhuǎn)染后表達(dá)的作用均優(yōu)于連翹醇提液和水煎液。王文麗等[17]發(fā)現(xiàn)連翹提取物在銀翹散的主要藥物組成成分中抗甲型流感病毒的作用最強(qiáng)。

張美義等[18]對(duì)金翹片體內(nèi)抗H1N1流感病毒作用進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)金翹片能明顯抑制小鼠肺指數(shù)升高，降低肺組織的病毒載量，提高γ-IFN的水平，具有明顯的治療作用。潘曌曌等[19]對(duì)銀翹散主要藥物金銀花、連翹、牛蒡子及其提取物進(jìn)行了體外抗流感病毒作用的研究發(fā)現(xiàn)，單味藥物及其配伍提取物均有很好的抑制甲型流感病毒增殖的作用，并且與藥物濃度和作用時(shí)間存在相關(guān)性。

2.1.2 抗呼吸道合胞病毒研究

金銀花對(duì)Hela細(xì)胞內(nèi)的RSV有直接滅活作用[20]，IC50為45 mg/mL，TI為31.2，隨著濃度升高，滅活作用增強(qiáng)；對(duì)病毒的復(fù)制增殖有顯著抑制作用，IC50為30 mg/mL，TI為10.5，優(yōu)于病毒唑?qū)φ战M；在病毒對(duì)細(xì)胞的吸附階段有一定的抑制作用，IC50為1 mg/mL，TI為5.0；對(duì)RSV病毒入侵細(xì)胞無(wú)阻斷作用，該研究結(jié)果對(duì)金銀花的臨床應(yīng)用提供了研究依據(jù)。

陳揚(yáng)等[21]對(duì)連翹經(jīng)水提醇沉、大孔樹(shù)脂柱層析洗脫得到的部位LC-4進(jìn)行抗RSV作用研究，在RSV感染Hela細(xì)胞前2 h給藥，在 LC-4濃度為31.25～3.91 μg/mL之間，與病毒對(duì)照組相比細(xì)胞病變(CPE)有顯著性差異，在病毒感染細(xì)胞2、4、6、8 h后分別給藥，與病毒對(duì)照組相比CPE程度有顯著性差異，說(shuō)明LC-4在體外對(duì)RSV復(fù)制有明顯的預(yù)防和治療作用。

對(duì)金銀花-連翹藥對(duì)抗呼吸道合胞病毒作用研究顯示，銀翹藥有抑制呼吸道合胞病毒的作用，且藥對(duì)的含藥血清對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用要優(yōu)于兩個(gè)單味藥的含藥血清[22]。銀翹散可以降低小鼠肺指數(shù)[23]，減輕鼻黏膜上皮細(xì)胞和肺組織的損傷，其對(duì)RSV感染小鼠呼吸系統(tǒng)的改善作用與利巴韋林陽(yáng)性對(duì)照藥的作用相當(dāng)；而體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了銀翹散對(duì)RSV感染的改善作用，其作用機(jī)制與NALP3炎性體激活相關(guān)。對(duì)銀翹抗感顆粒[24]進(jìn)行的抗RSV病毒研究發(fā)現(xiàn)，該制劑的半數(shù)毒性濃度為2.393 7 mg/mL，半數(shù)治療濃度為52.03 μg/mL，治療指數(shù)為46.01，說(shuō)明銀翹抗感顆粒對(duì)RSV有較好的抑制作用。

2.2 抗菌作用

金銀花對(duì)多種細(xì)菌均具有一定的抑制作用，是典型的廣譜抗菌類中藥。黃開(kāi)遠(yuǎn)等[25]對(duì)復(fù)方金銀花外洗液、金銀花水提液進(jìn)行抑菌作用研究發(fā)現(xiàn)，二者對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、綠膿桿菌4種菌均有抑菌活性。胡璇等[26]進(jìn)行四倍體金銀花藥材體外抗菌試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)四倍體金銀花水提物對(duì)金黃色葡萄球菌、乙型鏈球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、白色念球菌、肺炎克雷伯菌都具有抗菌和殺菌作用。綠原酸是金銀花中主要的有效成分，Karunanidhi等[27]研究發(fā)現(xiàn)，綠原酸對(duì)嗜麥芽窄食單胞菌生物的包膜合成具有顯著的抑制作用，認(rèn)為其可作為一種安全的人工合成抗菌藥物或聯(lián)合抗菌藥物用于治療嗜麥芽窄食單胞菌感染。

連翹揮發(fā)油[28]及水提液、乙醇提取液[29]對(duì)金黃色葡萄球菌有抑制作用。連翹的水提液、乙醇提取液[30-31]及乙酸乙酯提取液對(duì)大腸桿菌具有抑制作用。權(quán)志博等[32]研究發(fā)現(xiàn)，連翹水煎液對(duì)產(chǎn)ESBLs(超廣譜β-內(nèi)酰胺酶)大腸埃希菌20株臨床株均有不同程度的抑菌作用。

對(duì)金銀花-連翹配伍的抑菌作用研究發(fā)現(xiàn)，金銀花對(duì)溶珊瑚弧菌[33]抑菌、抑制生物膜形成作用較強(qiáng)，而連翹抑菌作用較弱，對(duì)成熟生物膜的破壞作用較強(qiáng)，且二者聯(lián)用可增大抑菌圈，即增強(qiáng)抑菌效果；金銀花、連翹配伍使用，對(duì)多藥耐藥耐甲氧西林金黃色葡萄球菌( MDR-MRSA)的抑菌殺菌作用優(yōu)于單味藥的使用，這說(shuō)明金銀花-連翹配伍使抗菌作用增強(qiáng)，闡明了二者配伍的協(xié)同作用。

2.3 解熱抗炎作用

研究發(fā)現(xiàn)，金銀花水煎液對(duì)二甲苯致耳廓腫脹的炎癥模型小鼠具有解熱抗炎作用[34]，且作用效果隨劑量的增加而明顯。采用香煙煙霧提取物刺激KB細(xì)胞，構(gòu)建急性口腔炎癥模型，進(jìn)行金銀花抗急性口腔炎癥的研究[35]，發(fā)現(xiàn)，給藥后金銀花組可抑制TNF-α、IL-6、IL-8表達(dá)水平的升高，改善IL-10分泌減少，且呈劑量依賴關(guān)系，提示金銀花對(duì)口腔炎癥均具有一定的治療作用。

連翹水提物[36]、揮發(fā)油[37]、連翹苷[38]、連翹酯苷[39]均具有一定的抗炎作用。

3 結(jié)論與展望

配伍是中藥臨床用藥的特色，而藥對(duì)是臨床配伍的最小配伍單位。金銀花-連翹藥對(duì)的藥理作用比較明確，研究熱點(diǎn)較為集中，相關(guān)文獻(xiàn)主要為化學(xué)成分、抗病毒、抗菌、解熱抗炎藥理作用方面報(bào)道，由于中藥復(fù)方的成分復(fù)雜性，配伍中藥的成分、作用機(jī)制、配伍機(jī)制等解析難度大。未來(lái)研究中，可以將逆向藥理學(xué)的研究方法應(yīng)用的金銀花-連翹藥對(duì)的配伍研究中，從藥對(duì)配伍和組分配伍的角度科學(xué)闡釋和優(yōu)化藥對(duì)的配伍應(yīng)用。隨著越來(lái)越多先進(jìn)分析及生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，將有助于以中醫(yī)藥“整體觀”為出發(fā)點(diǎn)，對(duì)藥對(duì)化學(xué)成分、藥效學(xué)、體內(nèi)過(guò)程、作用機(jī)制等方面進(jìn)行更加系統(tǒng)和深入的研究。借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、代謝組學(xué)、蛋白組學(xué)等新型研究手段，剖析金銀花-連翹藥對(duì)的配伍規(guī)律和作用規(guī)律，或許是探索中藥配伍機(jī)制、規(guī)律的有效途徑。