豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征混合感染的PCR診斷

王松梅

河南省通許縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南通許 475400

豬瘟（CSF）又稱“爛腸瘟”，是一種病毒性傳染病，致病原為豬瘟病毒（CSFV），具有很強(qiáng)的傳染性，不同年齡、品種和性別的豬都易感，豬感染后高熱，呼吸困難，皮膚表面有出血點(diǎn)，在養(yǎng)豬生產(chǎn)中有很高的發(fā)病率，雖然我國目前使用的豬瘟兔化弱毒疫苗在一定程度上控制了豬瘟的流行，但豬瘟感染的情況仍時(shí)有發(fā)生[1]。豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）又稱“藍(lán)耳病”，也是一種病毒性傳染病，致病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV），主要引起懷孕母豬流產(chǎn)、死胎和木乃伊胎以及新生仔豬的高死亡率。PRRSV具有免疫抑制性，豬感染PRRSV后病豬的免疫力降低，很容易發(fā)生混合感染和繼發(fā)感染，且對(duì)常規(guī)疫苗的免疫接種不產(chǎn)生免疫應(yīng)答[2]。本文針對(duì)2018年11月某豬場(chǎng)發(fā)生的1例疑似2種病原混合感染的病例進(jìn)行了臨床和實(shí)驗(yàn)室診斷，最終通過PCR確診為CSF和PRRS混合感染，診治過程如下。

1 臨床特征

該飼養(yǎng)場(chǎng)共有育肥豬450頭，發(fā)病豬為2月齡育肥豬，病豬發(fā)病突然，體溫升高，高熱稽留，精神沉郁，嗜睡，食欲不振，呼吸困難，皮膚潮紅、有點(diǎn)狀出血點(diǎn)，耳朵呈藍(lán)色，發(fā)病后曾用抗生素治療無效，發(fā)病豬一般在5 d內(nèi)死亡，剖檢病死豬可見全身淋巴結(jié)腫大、出血，脾臟梗死，腎臟表面有出血斑點(diǎn)，肺有彌漫性炎癥，心臟表面有出血點(diǎn)，膀胱、膽囊也有點(diǎn)狀出血。通過臨床癥狀和病理剖檢，初步判斷為疑似CSF與PRRS混合感染，無菌取發(fā)病死亡豬的淋巴結(jié)、腎臟、脾臟等病料組織送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

2 實(shí)驗(yàn)室診斷

將采集的病料研磨處理，離心取上清液作為檢測(cè)樣品，利用病毒基因組提取試劑盒（購自北京百泰克生物科技有限公司）提取核酸，參照蔣成硯等[3]的方法分別合成CSFV和PRRSV的特異性檢測(cè)引物。以提取的檢測(cè)樣品核酸為模板，分別利用CSFV和PRRSV檢測(cè)引物對(duì)其進(jìn)行一步法RT-PCR擴(kuò)增（一步法RT-PCR擴(kuò)增體系和擴(kuò)增程序詳見表1），擴(kuò)增產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳觀察顯示擴(kuò)增片段的大小分別為 603 bp（PRRSV）和 508 bp（CSFV），這與蔣成硯等[3]的報(bào)道結(jié)果相符，說明發(fā)病豬為CSF和PRRS混合感染，通過實(shí)驗(yàn)室PCR檢測(cè)對(duì)病例進(jìn)行了確診。

表1 一步法RT-PCR擴(kuò)增體系和擴(kuò)增程序

3 防控措施

疫情確診后，病豬應(yīng)及時(shí)隔離飼養(yǎng)，病死豬全部深埋并無害化處理，病豬的糞便也做好無害化處理，豬場(chǎng)全部用3%氫氧化鈉徹底消毒處理，對(duì)發(fā)病豬應(yīng)用CSF與PRRS高免血清進(jìn)行治療，同時(shí)應(yīng)用抗生素治療，防止繼發(fā)感染。對(duì)豬場(chǎng)內(nèi)健康豬群接種CSF疫苗，間隔1周后接種PRRS疫苗，通過一系列的防控措施，豬場(chǎng)疫情得到有效控制，沒有新發(fā)和死亡病例。

4 討論

本次疫情的發(fā)生可能與氣溫驟降導(dǎo)致豬抵抗力下降有關(guān)，通過觀察，養(yǎng)殖場(chǎng)的飼養(yǎng)管理比較混亂，沒有按照免疫程序進(jìn)行常規(guī)免疫接種。隨著規(guī)模化養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，疾病表現(xiàn)形式更加復(fù)雜和多樣化，如果飼養(yǎng)管理不到位，豬場(chǎng)很容易發(fā)生豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬、豬圓環(huán)病毒等疾病的混合感染[4]。CSF和PRRS的防控還是以疫苗免疫為主，由于PRRSV有很強(qiáng)的免疫抑制性，所以CSF和PRRS疫苗的免疫接種不能同時(shí)進(jìn)行，此外也要做好其他常見疫病疫苗的免疫接種工作。發(fā)生疫情時(shí)，應(yīng)對(duì)疑似感染豬及時(shí)隔離飼養(yǎng)，根據(jù)臨床癥狀做出初步診斷，確診要利用實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)方法，PCR方法是疾病的快速診斷方法，通過對(duì)核酸片段的特異性擴(kuò)增，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床病料的快速診斷，是目前應(yīng)用最廣泛的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法。鑒于此，本研究采用實(shí)驗(yàn)室PCR檢測(cè)方法，確診為CSF和PRRS混合感染，確保了診斷結(jié)果的準(zhǔn)確和可靠。多病原混合感染使疾病的臨床表現(xiàn)更加復(fù)雜，為了防止混合病原感染情況的發(fā)生，規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)要做好養(yǎng)殖飼養(yǎng)管理，保持環(huán)境美化和清潔，加強(qiáng)相關(guān)疾病的檢驗(yàn)檢疫，冬季注意豬舍的防寒保暖，避免擁擠和潮濕，低溫和不良的飼養(yǎng)環(huán)境會(huì)造成豬的抵抗力下降。只有加強(qiáng)平時(shí)的飼養(yǎng)管理，定期進(jìn)行疫苗的免疫接種，才能保持群體的免疫水平，控制疾病的暴發(fā)和流行，減少由疫病造成的養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)損失。