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    甘肅地區(qū)沙棘葉中黃酮類物質含量測定

    2019-06-25 08:04:42孫國政慶陽市食品檢驗檢測中心甘肅慶陽745000
    中國食品工業(yè) 2019年5期
    關鍵詞:葉中沙棘黃酮類

    孫國政/錢 敏/周 蕓 慶陽市食品檢驗檢測中心 甘肅 慶陽 745000

    欒海波 甘肅高原圣果沙棘開發(fā)有限公司 蘭州 73000

    馮玉升 甘肅中商食品質量檢驗檢測有限公司 蘭州 73000

    沙棘(Hippophae rhamnoides L.)為胡頹子科落葉灌木或小喬木,其干燥成熟的果實為藏族、蒙古族的習用藥材,具有止咳化痰、消食化滯、活血散瘀的功效[1]。除沙棘果之外,沙棘的各個部位均含有多種活性物質,而沙棘葉中的黃酮類物質含量尤其高,具有很高的經(jīng)濟價值,近年來陸續(xù)開發(fā)出一些功能性食品,進入了大眾的生活[2]。沙棘葉中黃酮類物質具有抗心肌缺血、抗心律失常、提高耐缺氧能力、降低血清膽固醇、抑制血小板聚集、抗?jié)?、抗腫瘤、抗炎、抗過敏、抗氧化、抗衰老等廣泛的藥理作用[3]。

    沙棘作為西部防風治沙的主要經(jīng)濟作物,在甘肅野生和種植都很廣泛,沙棘葉原料豐富,市場前景廣闊。深入開發(fā)沙棘葉的經(jīng)濟價值,尤其是其醫(yī)藥方面的利用價值,則需要有簡便、快捷、全面的檢測分析方法,以便對沙棘葉的活性成分進行更為精準有效的分析。本研究以甘肅地區(qū)沙棘葉為研究對象,對不同產(chǎn)地和不同生長時期沙棘葉中黃酮類物質進行測定分析,為沙棘葉資源評價和開發(fā)提供科學數(shù)據(jù)。

    1 儀器與材料

    1.1 儀器與設備

    LC-20A高效液相色譜儀(日本島津);UV8100D型紫外可見分光光度計(北京萊伯泰科);千分之一/萬分之一天平(德國賽多利斯)。

    1.2 材料與試劑

    沙棘葉采集自甘肅慶陽(編號:Q)、張掖(編號:Z)、定西(編號:D)、平?jīng)觯ň幪枺篜)。

    標準物質:蘆?。ㄅ枺篞4160050,純度:99.3%, 上 海 安 普 ); 槲 皮 素( 批號:100081-201610,純度: 99.1%,中國食品藥品檢定研究院);山柰酚(批號:S1330010,純度:99.1%, 上 海 安 普 ); 楊 梅 素( 批號:R7580010,純度:99.8%,上海安普);異鼠李素(批號:K4000025,純度:99.4%,上海安普)。

    其他試劑均為分析純。

    2 方法與結果

    2.1 樣品預處理

    將采集的沙棘葉除雜,自然干燥后粉碎,過20目篩,分類編號,干燥減重法測定水分,密封裝袋,0~4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    2.2 總黃酮含量測定

    以蘆丁為對照品,紫外可見分光光度計法,在500nm的波長處測定沙棘葉中總黃酮含量[1]。

    2.2.1 對照品溶液的制備

    準確稱取經(jīng)減壓干燥的蘆丁標準品20mg,置于50mL容量瓶中,加65%乙醇稀釋至刻度,搖勻。精密量取25mL,置50mL容量瓶中,加65%乙醇稀釋至刻度,搖勻,即得(每1mL含蘆丁0.2mg)。

    2.2.2 標準曲線的制備

    準確吸取0.2mg/mL的蘆丁對照品溶液0,1,2,4,6,8,10mL于 25mL比色管中,各加入65%乙醇至12.5mL,分別加入5%亞硝酸鈉溶液1.0mL,搖勻放置5min,再加入10%硝酸鋁溶液1.0mL,搖勻后放置 5min,再加入 1.0mol/L氫氧化鈉溶液5mL,用65%乙醇溶液定容至刻度,以相應試劑做空白,放置15min后,在最大吸收波長500nm處測定吸光度A,以吸光度A為縱坐標,蘆丁質量濃度為橫坐標,繪制標準曲線,結果見圖1,直線回歸方程為:Y=0.6003A+0.0202(R2=0.9994)。

    2.2.3 供試品溶液的制備

    精密稱取粉碎的沙棘葉2g,加入70%乙醇30mL,超聲提取15min,65℃水浴回流提取1h,放冷,過濾;殘渣再加入70%乙醇30mL,65℃水浴回流提取1h,放冷,過濾,合并濾液,置100mL容量瓶容中,殘渣用70%乙醇洗滌,洗液并入同一容量瓶中,用70%乙醇定容至刻度,搖勻,待測定。

    2.2.4 樣品測定

    精密取供試品溶液10mL于25ml比色管中,加入 65% 乙醇至 12.5mL,照標準曲線制備(2.2.2項)方法,自“加入5%亞硝酸鈉溶液1.0mL”起,以相應試劑為空白對照,依法測定吸光值。按上述直線回歸方程計算供試品溶液的濃度,利用公式:總黃酮的含量(ω%)=提取的總黃酮質量/沙棘葉粉質量×100%=CV/M×100%,即可求得各樣品總黃酮的含量。結果見表1。

    表1沙棘葉中總黃酮含量(單位:mg/g,干重計)Table 1 The total content of flavonoids in seabuckthorn leaves(Unit: mg/g, dry weight )

    2. 3黃酮類物質的測定

    2.3.1 對照品溶液制備

    分別精密稱取山柰素、楊梅素、槲皮素、異鼠李素各10.0mg置于10mL容量瓶中,加入甲醇定容,搖勻,得到4種質量濃度為1000μg/mL的黃酮對照品溶液。

    2.3.2供試品溶液的制備

    精密稱取粉碎的沙棘葉2g,加入70%乙醇20mL,加入25%HCL溶液20mL,超聲提取15min,65℃水浴回流提取1h,放冷,過濾,濾液置于100mL容量瓶容中,殘渣用70%乙醇洗滌,洗液并入同一容量瓶中,用70%乙醇定容至刻度,搖勻,0.45μm濾膜過濾即得。

    2.3.3 色譜條件

    色譜柱:Agilent C18(150mm×4.6mm,5.0μm);流動相:乙腈-0.1%磷酸溶液(30:70);流速:1.0mL/min;二級陳列檢測器(370nm);柱溫:40℃;進樣量:10μL?;旌蠈φ掌泛驮嚇訄D譜見圖2。

    圖2 沙棘黃酮類標準品(A)和供試品(B)的色譜圖FIG. 2 The Chromatogram of Flavonoids standard (A)and test (B) of seabuckthorn

    2.3.4 樣品測定

    將制備的供試品溶液(2.3.2項)注入液相色譜儀,記錄色譜圖,按外標法計算各樣品中山奈素、楊梅素、槲皮素、異鼠李素的含量,不同產(chǎn)地和不同生長時期沙棘葉中黃酮含量見表2。

    表2沙棘葉中黃酮類物質含量(單位:mg/g,干重計)Table 2 The content of flavonoids in seabuckthorn leaves(Unit: mg/g, dry weight )

    對甘肅不同產(chǎn)地和不同生長時期沙棘葉中的黃酮類含量測定結果表明:由圖3可以看出,各地區(qū)不同采摘月份的沙棘葉中總黃酮含量變化不明顯,基本保持在一致水平。沙棘葉中總黃酮含量平均值均為35mg/g,比山西沙棘葉中總黃酮含量測定結果高出12mg [5],他們測定的結果平均值為23mg/g。

    圖3 甘肅不同地區(qū)不同月份沙棘葉中總黃酮含量比較FIG. 3 The Comparison of total flavonoids in seabuckthorn leaves from different regions and growing periods in Gansu

    圖4 甘肅不同地區(qū)不同月份沙棘葉中黃酮類物質含量比較(注:Q、P、D、Z分別代表慶陽、平?jīng)?、定西、張掖,?shù)字6、8分別代表采摘時間為6月份和8月份)FIG. 3 The Comparison of flavonoids in seabuckthorn leaves from different regions and growing periods in Gansu

    由表2可知:沙棘葉中山奈素、槲皮素、異鼠李素、楊梅素平均含量分別為0.091 mg/g、0.16 mg/g、0.39 mg/g、0.62 mg/g,且各地區(qū)不同采摘時間沙棘葉中上述4種活性物質含量變化不明顯;但從測定結果比較(見圖4)發(fā)現(xiàn)甘肅沙棘葉中楊梅素和異鼠李素含量明顯高于其他2種物質的含量高,分別是 0.62mg/g 和 0.39mg/g,研究[4][5]表明,楊梅素具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、降血糖、保肝等多種藥理活性,而異鼠李素具有降血糖和血脂活性的藥理作用。

    3討論

    沙棘防風固沙、保持水土和改良土壤等生態(tài)效益及其果實、果油和果籽含有多種生物活性成分的經(jīng)濟價值已經(jīng)得到大眾的認可。近年研究發(fā)現(xiàn),沙棘葉也含有維生素類、黃酮類、多酚類、甾醇類、多糖類有機酸等活性成分,其中黃酮類化合物含量比果實中高112.55%[6]。因此,在研究開發(fā)利用沙棘果實、果油和果籽的同時,不能忽略沙棘葉的利用研究,沙棘葉不同于沙棘果,其不受生長環(huán)境氣候惡變而產(chǎn)量減少,資源量比沙棘果更大且易于采摘。甘肅省是沙棘資源大省,自1999年“三北”地區(qū)沙棘工作會議后,針對沙棘耐干旱、耐瘠薄,并具有防風固沙、保持水土、改良土壤等作用,把沙棘資源建設與水土保持生態(tài)環(huán)境建設精密結合起來,擴大沙棘栽植面積,目前野生沙棘加人工栽植的沙棘面積已達450萬畝,主要分布在定西、慶陽、甘南、張掖、臨夏、隴南、平?jīng)?、天水等地,豐富的沙棘資源為研究開發(fā)利用沙棘葉提供了便利。從本研究的測定結果來看,甘肅沙棘葉中含有豐富的楊梅素、異鼠李素等活性物質,所以有必要對沙棘葉進行深層面的研究,以更科學合理利用沙棘資源。

    本研究是結合當?shù)厣臣a(chǎn)業(yè)企業(yè)對沙棘葉的基礎研究,在對沙棘葉中有效活性成分測定的同時,也對企業(yè)沙棘產(chǎn)品生產(chǎn)工藝改進、產(chǎn)品質量把關均具有積極作用。由于甘肅自然氣候的限制和接到本項目時間遲的緣故,在本研究中測定項目數(shù)量還不夠多,檢測的項目也不夠全面,在后續(xù)的研究中,我們將加強樣本的采集量,拓寬對沙棘葉的研究內(nèi)容,在深入測定分析沙棘葉中有效活性物質的同時,還將加大對有效活性物質提取純化和沙棘葉保健食品的研究,全面開發(fā)利用沙棘。

    本研究重在沙棘葉中有效成分測定,分析比對甘肅不同產(chǎn)地和不同生長時期沙棘葉中有效成分的差異,對黃酮類物質的提取、純化工藝及檢測方法的確認少有研究,而且對此方面的研究已有很多文獻,故在本文中沙棘葉中黃酮類物質的提取、純化工藝及檢測方法均參考文獻。

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