右美托咪啶預(yù)處理對(duì)肥厚心肌缺血再灌注損傷的影響及機(jī)制

況 彤 龔長(zhǎng)蓮 羅 政

（南昌縣人民醫(yī)院，江西 南昌 330200）

心肌缺血后再灌注損傷指冠狀動(dòng)脈部分或完全急性阻塞后，在一定時(shí)間又重新獲得再通時(shí)，缺血心肌雖然得以恢復(fù)正常灌注，但其組織損傷反而呈進(jìn)行性加重的病理過(guò)程。心肌缺血再損傷是臨床麻醉中較為常見的病理過(guò)程，臨床上患者常伴有一些心臟疾病，如心肌肥厚等[1]。右美托咪啶具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜及抗焦慮的作用，屬于新型選擇性腎上腺素α2受體激動(dòng)劑[2]，其對(duì)肥厚心肌的缺血再灌注損傷的作用研究具有現(xiàn)實(shí)意義。本文旨在分析右美托咪啶預(yù)處理對(duì)肥厚心肌缺血再灌注損傷的影響及機(jī)制，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：本次選100只大鼠作為研究對(duì)象，所有大鼠均健康、成年，其中20只最為正常心肌對(duì)照組（正常對(duì)照組），平均體質(zhì)量（248.23±5.45）g，不做任何處理，其余將離體心臟分為四組，即缺血再灌注（20例，對(duì)照組）、Dex組（20例）、Dex/wortmannin組（20例）、Dex/L-NAME組（20例），對(duì)照組的平均體質(zhì)量（254.12±10.45）g，Dex組的平均體質(zhì)量（248.34±9.65）g，Dex/wortmannin組的平均體質(zhì)量（258.67±9.45）g，Dex/L-NAME組的平均體質(zhì)量（257.78±9.65）g，以上五組大鼠的體質(zhì)量經(jīng)分析，無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

1.2 方法：心肌肥厚大鼠模型建立：成年SD大鼠，麻醉后固定于仰臥位，常規(guī)消毒，鋪巾。從腹中線切開，分離腹主動(dòng)脈和腎動(dòng)脈，在腎動(dòng)脈上方約1 cm處將腹主動(dòng)脈結(jié)扎于G7針頭上，之后抽出針頭，縫合。術(shù)后注射青霉素。術(shù)后第7周對(duì)大鼠用超聲診斷儀檢測(cè)心臟結(jié)構(gòu)及功能。之后，取出心臟，對(duì)心臟外觀及心臟實(shí)際重量進(jìn)行測(cè)定。實(shí)驗(yàn)方法：心肌缺血將肥厚心肌的大鼠麻醉后，切開胸腔，摘出心臟并迅速接上Langendorff離體心臟灌注裝置，同時(shí)用KHB緩沖液開始灌注，通過(guò)恒溫水槽維持體溫在37 ℃，接上測(cè)壓氣囊和電磁流量計(jì)及針狀電極。穩(wěn)定后根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案要求加入Dex、L-NAME（NO合成酶抑制劑）、Wortmannin（PI3K抑制劑），在穩(wěn)定期末，再灌注開始和結(jié)束時(shí)各測(cè)一次血?dú)狻Ｔ俟嘧⒔Y(jié)束后，把左心室切成2 mm的薄片，計(jì)算心肌梗死率。

采用全自動(dòng)生化分析儀和相關(guān)試劑盒檢測(cè)血漿缺血前后乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶MB同工酶（CK-MB）活性；用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)試檢測(cè)（ELISA）法檢測(cè)cTNⅠ的活性、PI3K、MMP-2蛋白表達(dá)，Western-blotting方法測(cè)PI3K活性；用熒光分光光度計(jì)法測(cè)心肌組織中NO含量及NOS活性。取心肌組織做成石蠟切片，用免疫組化的方法測(cè)定MMP-2和IL-1β；用原位雜交的方法對(duì)MMP-2和IL-1β進(jìn)行檢測(cè)。心肌用1%氯三苯四唑（TTC）染色后，用高像素?cái)?shù)碼相機(jī)拍照，應(yīng)用Image-Pro Plus圖像處理軟件分析梗死面積百分比。

1.3 觀察指標(biāo)：LDH、CK-MB、cTNⅠ、PI3K、NO、NOS、MMP-2、IL-1β及其心肌梗死面積。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS19.0分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x-±s）表示，用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié) 果

五組各項(xiàng)指標(biāo)比較：LDH、CK-MB、cTNⅠ、NO、NOS、MMP-2、IL-1β、心肌梗死面積各項(xiàng)指標(biāo)在五組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中Dex組、Dex/wortmannin組、Dex/L-NAME組的LDH、CK-MB、cTNⅠ、MMP-2、IL-1β及心肌梗死面積均低于對(duì)照組、正常對(duì)照組相應(yīng)值，并且以上指標(biāo)Dex/wortmannin組和Dex/L-NAME組低于Dex組相應(yīng)值（P＜0.05）。見表1。

3 討 論

右美托咪定是一種高選擇性α2腎上腺受體激動(dòng)劑，諸多研究對(duì)心臟、腎等器官具有保護(hù)特性，但對(duì)于復(fù)蘇后心肌功能障礙的作用機(jī)制還不清楚。近期，研究證明右美托咪定對(duì)缺血再灌注心肌具有保護(hù)作用，且這種保護(hù)作用是通過(guò)磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和一氧化氮（NO）介導(dǎo)實(shí)現(xiàn)的。麻醉中使用右美托咪定既有自身優(yōu)點(diǎn)又保護(hù)心臟功能為臨床提供了一個(gè)新的思路。肥厚心肌具有不同于正常心肌的一些特性，如收縮蛋白表達(dá)的改變，供血血管的改變，細(xì)胞溶質(zhì)鈣的調(diào)節(jié)及底物傳輸和利用的改變，肥厚心肌對(duì)缺血耐受性是降低的，同時(shí)對(duì)再灌注敏感性增加。

表1 五組各項(xiàng)指標(biāo)比較（

表1 五組各項(xiàng)指標(biāo)比較（

注：與正常對(duì)照組相比，*P＜0.05；與Dex組相比，#P＜0.05

images/BZ_47_175_2870_2300_2916.png正常對(duì)照組 23.47±0.16 56.79±0.18 55.97±6.19 110.89±21.15 21.49±1.74 67.46±13.79 41.98±2.97對(duì)照組 23.23±0.23 56.34±0.21 55.78±6.25 110.67±21.62 21.32±1.23 67.23±13.45 41.23±2.89 Dex組 20.34±0.12* 50.56±1.56* 49.34±6.02* 109.37±20.17 18.32±2.01 60.23±10.56* 31.56±2.02*Dex/wortmannin組 17.34±0.12*# 45.67±1.04* 47.34±5.78* 102.78±16.18*# 15.47±2.82*# 58.47±9.38* 29.56±2.12*Dex/L-NAME組 15.23±0.34*# 40.51±1.00*# 46.34±6.81*# 92.49±15.20*# 13.42±1.43*# 55.63±8.28*# 25.45±2.02*#

右美托咪定預(yù)處理中，PI3K和NO參與介導(dǎo)其對(duì)缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）生成NO通過(guò)可溶性GC受體誘導(dǎo)cGMP的產(chǎn)生具有抑制心肌肥厚的作用，eNOS特異過(guò)量表達(dá)抑制異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心肌肥厚；eNOS缺乏易發(fā)生高血壓和心肌肥大；基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）在心肌肥厚過(guò)程中有重要作用，它們也是缺血再灌注后心肌重塑中代表性的酶。白細(xì)胞介素IL-1β是缺血再灌注損傷中主要的活性細(xì)胞因子之一，是心肌重塑過(guò)程中重要的影響因素。近年有研究指出，MMP-2和PI3K及NO途徑之間可能存在關(guān)聯(lián)。以右美托咪定預(yù)處理干預(yù)離體大鼠心臟缺血再灌注模型，發(fā)現(xiàn)右美托咪定可以改善線粒體功能，促進(jìn)缺血前線粒體 ATP 敏感性鉀通道，抑制再灌注早期線粒體滲透性轉(zhuǎn)換孔的開發(fā)[3]。LDH是乳酸脫氫酶同工酶的一型，心臟以LDH為主，CK-MB是肌酸激酶同工酶的一種，主要存在于心肌中，當(dāng)心肌缺損時(shí)，幾cTNⅠ可通過(guò)受損心肌細(xì)胞膜釋放到血液中。本次研究右美托咪定預(yù)處理，可以提高PI3K、NO水平，減輕心肌損傷，改善心功能。