金銀花枝葉提取物對(duì)炎癥小鼠的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

張艷冬 陳 宇

1 浙江省杭州市富陽區(qū)中醫(yī)院 浙江 杭州 311400

2 浙江省中醫(yī)藥研究院 浙江 杭州 310007

金銀花（Flos Lonicerae）為忍冬科（Caprifoliaceae）植物忍冬（LonicerajaponicaThunb）、菰（紅）腺忍冬（L．HypoglaucaMiq．）或毛花柱忍冬（L．DasystylaRehd．）的干燥花蕾或初開的花[1]。首載于南北朝陶弘景所著的《名醫(yī)別錄》，為常用中藥，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效。金銀花的副產(chǎn)物枝葉產(chǎn)量較高，卻一直被視為非藥用部位而長期未得到利用。明代李時(shí)珍曰：“莖葉及花，功用皆同?！爆F(xiàn)代藥理研究也表明金銀花枝葉與金銀花具有相近的化學(xué)成分和藥理活性[2]。本實(shí)驗(yàn)探討兩種不同提取方法制備得到的金銀花枝葉提取物對(duì)炎癥模型小鼠的抗炎鎮(zhèn)痛作用，為金銀花枝葉的開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：清潔級(jí)ICR小鼠，體重18～22g，雌雄各半，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0011。

1.2 藥品與試劑：角叉菜膠（購自美國Sigma公司，批號(hào)：16609068）；醋酸潑尼松片（購自天津太平洋制藥有限公司，批號(hào)：060201）；冰醋酸（分析純，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司，批號(hào)：20160307）；吲哚美辛腸溶片（購自廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：160601）；0.9%氯化鈉注射液（購自石家莊四藥公司，批號(hào)160408407）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 金銀花枝葉提取物制備：取金銀花枝葉200g，按液料比14：1加入70%濃度的乙醇溶液，分2次提取，每次提取1.5h，制備得到提取液，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至適量，真空干燥成粉末，即為金銀花枝葉醇提物。取金銀花枝葉200g，按液料比14：1加入純水，分2次提取，每次提取1.5h，制備得到提取液，過濾，濃縮至適量，真空干燥成粉末，即為金銀花枝葉水提物。

2.2 不同濃度金銀花枝葉提取物配制：根據(jù)人體推薦用量，將小鼠給藥劑量分為50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg。分別稱取金銀花枝葉醇提物1.0g、0.5g、0.25g，加純水100ml，混勻，配成10.0mg/ml、5.0mg/ml、2.5mg/ml濃度混懸液，用前搖勻；分別稱取金銀花枝葉水提物1.0g、0.5g、0.25g，加純水100ml，混勻，配成10.0mg/ml、5.0mg/ml、2.5mg/ml濃度混懸液，用前搖勻。

2.3 金銀花枝葉提取物對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響：取ICR小鼠80只，隨機(jī)分成空白對(duì)照組（等體積生理鹽水）、陽性藥物組（吲哚美辛10mg/kg）、醇提物三組（低、中、高劑量組）、水提物三組（低、中、高劑量組），每組10只?？瞻讓?duì)照組給予0.9%氯化鈉注射液，陽性藥物組給予吲哚美辛（10mg/kg），醇提物和水提物低、中、高劑量組分別按0.2ml/10g體重經(jīng)口給藥濃度為2.5mg/ml、5.0mg/ml、10.0mg/ml的金銀花枝葉提取物。各組連續(xù)給藥3天，1次/天，末次給藥40min后于右耳正反兩面均勻涂抹二甲苯20μl/只，20min后斷頸處死沿耳廓基線剪下雙耳，用直徑9mm打孔器在左右耳同一部位沖下耳片，分別稱定重量，以自身左右耳片重量之差表示腫脹度。腫脹度=右耳重量－左耳重量；抑制率=[（對(duì)照組腫脹度平均值－給藥組腫脹平均值）/對(duì)照組腫脹平均值] ×100%。

2.4 金銀花枝葉提取物對(duì)角叉菜膠致小鼠足腫脹的影響：取小鼠80只，隨機(jī)分成空白對(duì)照組（等體積生理鹽水）、陽性藥物組（醋酸潑尼松200mg/kg）、醇提物三組（低、中、高劑量組）、水提物三組（低、中、高劑量組）?？瞻讓?duì)照組給予0.9%氯化鈉注射液，陽性藥物組給予醋酸潑尼松（200mg/kg），醇提物和水提物低、中、高劑量組分別按0.2ml/10g體重經(jīng)口給藥濃度為2.5mg/ml、5.0mg/ml、10.0mg/ml的金銀花枝葉提取物。各組連續(xù)給藥3天，1次/天，末次給藥30min后，除空白對(duì)照組外，其余各組于小鼠右后足掌腱膜下注入1%角叉菜膠（0.03ml/只）致炎。于致炎6h后將小鼠頸椎脫臼處死，剪下雙側(cè)后足，分別稱定重量，左、右足質(zhì)量之差即為腫脹度。腫脹度=右足重量－左足重量；抑制率=[（對(duì)照組腫脹度平均值－給藥組腫脹平均值）/對(duì)照組腫脹平均值] ×100%。

2.5 金銀花枝葉提取物對(duì)冰醋酸所致小鼠扭體的影響：取ICR小鼠80只，隨機(jī)分成空白對(duì)照組（等體積生理鹽水）、陽性藥物組（阿司匹林組200mg/kg）、醇提物三組（低、中、高劑量組）、水提物三組（低、中、高劑量組），每組10只?？瞻讓?duì)照組給予0.9%氯化鈉注射液，陽性藥物組給予阿司匹林（200mg/kg），醇提物和水提物低、中、高劑量組分別按0.2ml/10g體重經(jīng)口給藥濃度為2.5mg/ml、5.0mg/ml、10.0mg/ml的金銀花枝葉提取物。各組連續(xù)給藥7天，1次/天，末次給藥30min后各組小鼠按每10g體重分別腹腔注射0.7%醋酸0.2ml，觀察小鼠扭體潛伏期及15min內(nèi)出現(xiàn)的扭體次數(shù)，計(jì)算小鼠扭體抑制率。扭體抑制率=（對(duì)照組扭體反應(yīng)次數(shù)－給藥組扭體反應(yīng)次數(shù)）/對(duì)照組扭體反應(yīng)次數(shù)×100%。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，各組數(shù)據(jù)均為計(jì)量資料，數(shù)據(jù)以±s表示，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 金銀花枝葉提取物對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響：與空白對(duì)照組比較，陽性對(duì)照組（吲哚美辛）與醇提高劑量組、醇提中劑量組及水提高劑量組小鼠耳腫脹度減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05），且具有劑量依賴關(guān)系。各組小鼠耳腫脹度及抑制率測定結(jié)果見表1。

表1 金銀花枝葉提取物對(duì)小鼠耳腫脹的影響（±s）

表1 金銀花枝葉提取物對(duì)小鼠耳腫脹的影響（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別空白對(duì)照組陽性對(duì)照組醇提物高劑量組醇提物中劑量組醇提物低劑量組水提物高劑量組水提物中劑量組水提物低劑量組抑制率（%）—47.06 30.01 22.56 21.30 24.20 9.85 3.13耳腫脹度（mg）13.43±3.44 7.11±2.89**9.40±2.71**10.40±2.72*10.57±4.33 10.18±3.49*12.21±3.69 13.01±4.11

3.2 金銀花枝葉提取物對(duì)角叉菜膠致小鼠足腫脹的影響：與空白對(duì)照組比較，陽性對(duì)照組（醋酸潑尼松）與醇提高劑量組、醇提中劑量組及水提高劑量組小鼠足腫脹度減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）。各組小鼠足腫脹度及抑制率測定結(jié)果見表2。

3.3 金銀花枝葉提取物對(duì)冰醋酸所致小鼠扭體的影響：與空白對(duì)照組比較，陽性對(duì)照組（阿司匹林）與醇提高劑量組、醇提中劑量組及水提高劑量組能使小鼠扭體潛伏期延長，扭體次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05），且具有劑量依賴關(guān)系。各組小鼠扭體潛伏期、扭體次數(shù)及扭體抑制率測定結(jié)果見表3。

表2 金銀花枝葉提取物對(duì)小鼠足腫脹的影響（±s）

表2 金銀花枝葉提取物對(duì)小鼠足腫脹的影響（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別空白對(duì)照組陽性對(duì)照組醇提物高劑量組醇提物中劑量組醇提物低劑量組水提物高劑量組水提物中劑量組水提物低劑量組抑制率（%）—48.59 40.10 21.85 6.17 26.48 10.54 5.91足腫脹度（mg）38.90±9.72 20.00±8.84**23.30±9.26**30.40±6.08*36.50±13.50 28.60±8.32*34.80±10.35 36.60±10.56

表3 金銀花枝葉提取物對(duì)醋酸扭體的影響（±s）

表3 金銀花枝葉提取物對(duì)醋酸扭體的影響（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別空白對(duì)照組陽性對(duì)照組醇提物高劑量組醇提物中劑量組醇提物低劑量組水提物高劑量組水提物中劑量組水提物低劑量組扭體抑制率—53.32%41.85%31.68%24.83%33.99%20.03%10.88%扭體潛伏期（s）5.70±3.28 10.60±5.97**10.10±5.71**8.90±4.78*6.70±4.35 9.10±4.90*6.80±4.68 5.90±3.58扭體次數(shù)（次）28.60±5.86 13.35±4.65**16.63±5.15**19.54±5.97*21.50±6.49 18.88±5.38*22.87±6.80 25.49±7.22

4 討論

據(jù)統(tǒng)計(jì)，約有1/3的中藥方劑中使用金銀花。目前，金銀花也是中草藥防治甲流、手足口、禽流感等病的主要原料之一，現(xiàn)代臨床已把金銀花譽(yù)為“中藥抗生素”，為中藥處方常用的清熱解毒藥。金銀花枝葉也具有較高的藥用價(jià)值，但是相比金銀花，其枝葉的藥用資源更為豐富，成本更為低廉。

本研究結(jié)果顯示，金銀花枝葉醇提高劑量組、醇提中劑量組及水提高劑量組可以明顯減少二甲苯所致小鼠耳腫脹和角叉菜膠所致小鼠足腫脹，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）；同時(shí)發(fā)現(xiàn)金銀花枝葉醇提高劑量組、醇提中劑量組及水提高劑量組能使冰醋酸所致小鼠扭體潛伏期延長，扭體次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05），且具有劑量依賴關(guān)系，因此證明金銀花枝葉同樣具有抗炎鎮(zhèn)痛作用。同時(shí)，也表明合理開發(fā)金銀花的枝葉具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。