藍(lán)墨云班課平臺(tái)建設(shè)之草履蟲活體觀察方法優(yōu)選

喬征磊 金志民 劉鑄 田新民 李殿偉 趙杰

【摘要】建設(shè)藍(lán)墨云班課，就要為平臺(tái)提供優(yōu)質(zhì)的課程材料，《動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)》中的草履蟲觀察，由于草履蟲的活體難于觀察，因此很難提供好的素材，本文通過多種草履蟲觀察方法的篩選實(shí)驗(yàn)，最后確定了體積定量法是觀察效果最好的一種方法，值得推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】草履蟲 ?體積定量法

【基金項(xiàng)目】牡丹江師范學(xué)院教學(xué)改革項(xiàng)目（18-XJ20059和18-XJ20013）資助。

【中圖分類號(hào)】G642 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-3089（2019）13-0157-02

要借助于藍(lán)墨云班課改進(jìn)課程教學(xué)方法，就必然需要為平臺(tái)提供好的素材，以便使學(xué)生能提前充滿興趣，提高預(yù)習(xí)效果和自主學(xué)習(xí)的主動(dòng)性。為此需要對(duì)一些效果不是很理想的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行探索，以期改進(jìn)和提高課程效果。

草履蟲屬原生動(dòng)物門纖毛綱，是大學(xué)實(shí)驗(yàn)課程中最常用的單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的代表，是觀察研究原生動(dòng)物和單細(xì)胞動(dòng)物的好材料?；铙w觀察是研究原生動(dòng)物的一種重要手段，由于其形體微小，需要利用顯微鏡進(jìn)行觀察，但由于其在水中運(yùn)動(dòng)快速往往導(dǎo)致跑出顯微鏡的視野不能夠?qū)ζ浣Y(jié)構(gòu)和運(yùn)動(dòng)方式進(jìn)行比較全面和細(xì)致的觀察。因此尋找一種好的觀察方法成為《動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)》教學(xué)過程中很重要的一項(xiàng)研究?jī)?nèi)容。

目前所使用的《動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)》指導(dǎo)書上一般都是用棉纖維進(jìn)行固定觀察的，取單層薄棉絮放在載玻片上，滴上草履蟲培養(yǎng)液，蓋片鏡檢，如果草履蟲還快速游動(dòng)，可用吸水紙?jiān)谏w玻片的一端吸去一些水分。這種方法的不足是，棉纖維的量拿捏不準(zhǔn)，另外棉纖維不易分開，造成模糊，嚴(yán)重影響草履蟲的活體觀察效果。為此，我們對(duì)多種可能的方法進(jìn)行了試驗(yàn)，以期對(duì)草履蟲的活體觀察方法進(jìn)行優(yōu)選，為《動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)》教學(xué)提供簡(jiǎn)單、結(jié)構(gòu)清楚全面的觀察方法。

1.擦鏡紙纖維阻攔法

把擦鏡紙剪成與蓋玻片等大的小方塊，放在載玻片上，再將草履蟲培養(yǎng)液滴到擦鏡紙上（以正好能濕潤(rùn)鏡紙為宜），然后鏡檢。也可先將草履蟲培養(yǎng)液滴在玻片中央，再覆蓋擦鏡紙，使其充分濕潤(rùn)后加蓋玻片。

這種方法的優(yōu)點(diǎn)是鏡紙本身呈細(xì)密網(wǎng)絡(luò)狀，質(zhì)地薄而均勻，能較好地限制草履蟲的運(yùn)動(dòng);不足是所加溶液必須適量，稍微多一點(diǎn)都容易因水分多導(dǎo)致限制不了草履蟲的運(yùn)動(dòng)，溶液量過少又容易導(dǎo)致草履蟲數(shù)量偏少難以找到阻滯住效果好的蟲體。而且和棉花纖維一樣容易因?yàn)槔w維的阻擋不能夠詳細(xì)觀察蟲體的全部結(jié)構(gòu)和自然的運(yùn)動(dòng)方式。

2.膠水稀釋法

擠一滴稀釋過的膠水于載玻片，滴一滴草履蟲培養(yǎng)液于困擾劑中，用解剖針攪勻，再蓋上蓋玻片，然后顯微鏡下觀察。此法操作簡(jiǎn)便，蟲體運(yùn)動(dòng)極其緩慢甚至停滯不前，不僅能清楚地看清它的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，如伸縮泡和收集管，而且還能較清晰地看見其纖毛有節(jié)律的擺動(dòng)。另外由于膠水使得草履蟲內(nèi)外滲透壓變化較大所以引起草履蟲較高頻率地滲透壓調(diào)節(jié)，從而使得刺絲泡和收集管調(diào)節(jié)滲透壓的觀察效果更好。

此法的不足在于膠水要稀釋，否則極易導(dǎo)致草履蟲失水變形和死亡，另外膠水稀釋程度難把握，因此這種方法需要反復(fù)多次嘗試，而且稀釋膠水易變質(zhì)，不利于后續(xù)細(xì)胞核染色或刺絲泡釋放實(shí)驗(yàn)。

3.玉米面糊法

將6 g細(xì)粒玉米面放入100 ml水中，攪拌均勻，加熱至沸騰后，繼續(xù)加熱15 min，加熱過程中必須有人觀察，如發(fā)生溢出現(xiàn)象要及時(shí)處理;如果水分蒸發(fā)過多，玉米糊過稠，要注意添加水分使其始終保持100ml溶液。待混合物冷卻至室溫后，將草履蟲培養(yǎng)液和玉米面糊按1：1—1：2混合均勻，即可進(jìn)行觀察。

玉米糊粘稠度較大，草履蟲的運(yùn)動(dòng)受阻，運(yùn)動(dòng)速度明顯減慢?？梢杂^察到草履蟲的整體外形。玉米面糊中含有大量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，可觀察到草履蟲吞食營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)顆粒的過程。因此可以容易觀察到草履蟲的攝食，還可以觀察到刺絲泡。由于玉米面顆粒較大 ，還可以觀察到草履蟲通過狹窄縫隙時(shí)身體的變形現(xiàn)象。

4.體積定量法

用移液槍加入一定量的草履蟲培養(yǎng)液于載玻片上，然后蓋片鏡檢。這種觀察方法的優(yōu)點(diǎn)是，由于幾乎沒有人為加入雜質(zhì)的影響，形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察特別清楚，但同時(shí)由于水量有限，短時(shí)間后即容易失水變形甚至致死，尤其顯微鏡電源和光闌開的過大時(shí)容易導(dǎo)致快速失水。如果要進(jìn)行較長(zhǎng)時(shí)間的觀察，改善的方法是從蓋玻片一側(cè)不斷補(bǔ)充草履蟲培養(yǎng)液。由于蓋玻片有不同規(guī)格的，因此對(duì)應(yīng)地溶液量也有所不同。常見的18×18mm2、20×20mm2、22×22mm2及24×24mm2等不同規(guī)格的蓋玻片的最適草履蟲培養(yǎng)液體積分別為6.5～7.0uL、10～11uL、11～12uL和 14uL。當(dāng)然溶液越多草履蟲數(shù)目越多越便于找到效果更好的，因此建議使用尺寸較大的蓋玻片進(jìn)行觀察。

綜上所述，棉纖維法作為一種傳統(tǒng)的訓(xùn)練方法，不能夠使觀察者觀察到清晰完整的草履蟲結(jié)構(gòu)，效果最好的是體積定量法，它具有簡(jiǎn)單、方便、準(zhǔn)確和迅速的優(yōu)點(diǎn)，能使觀察者在短時(shí)間內(nèi)觀察到完整的草履蟲結(jié)構(gòu)以及運(yùn)動(dòng)方式，但滲透壓的調(diào)節(jié)不如膠水稀釋法;取食和排泄過程的效果不如玉米面糊法，總體而言體積定量法是最值得推廣應(yīng)用的一種草履蟲活體觀察法，是目前常用的草履蟲活體觀察法中最優(yōu)的一種。

作者簡(jiǎn)介：

喬征磊（1980.9-），男，漢族，講師，博士，主要從事動(dòng)物學(xué)的教學(xué)和科研工作。